LABORATORIO DE ANÁLISIS INSTRUMENTAL

NELI 03043

CROMATOGRAFÍA

Q. ODEMARYS VALLEJO TINOCO

CROMATOGRAFÍA
PRINCIPIOS BÁSICOS
 El concepto de cromatografía fue descrito
por primera vez por Tswett en 1906.

 Tsewtt creó un método para separar

pigmentos de las plantas utilizando un tubo
de vidrio lleno de CaCO3

 Después de añadir un extracto de las

plantas y lavarlo con un disolvente orgánico
observó que se separaban diferentes
bandas coloreadas en el interior de la
columna
CROMATOGRAFÍA
PRINCIPIOS BÁSICOS

Cromatografía
Técnica de separación en la que los componentes de una
muestra se distribuyen entre dos fases de diferente naturaleza;
debido a variables como la temperatura y la velocidad que se
establece al ser arrastrada por una fase móvil, líquida o gaseosa, a
través de una fase estacionaria, sólida o líquida
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PRINCIPIOS BÁSICOS
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FASES CROMATOGRÁFICAS
1. Fase Estacionaria. En la cual están retenidos los componentes de la muestra, y a
través de la cual fluye la fase móvil arrastrando a los mismos

2. Fase Móvil. Que fluye a través de una fase estacionaria, arrastrando con ella a los
compuestos de la mezcla.
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PRINCIPIOS BÁSICOS
Los componentes de la muestras se distribuyen en el interior del lecho
cromatográfico al ser arrastrados por la fase móvil.
Las especies individuales quedan retenidas en la fase estacionaria en función
de las interacciones que tienen lugar tales como: adsorción, solubilidad y
carga

Adsorción. Los átomos, iones o moléculas de una sustancia se adhieren a la

superficie del material

Absorción. Un fluido se disuelve en un líquido o un sólido.

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PRINCIPIOS BÁSICOS
CROMATOGRAFÍA
PRINCIPIOS BÁSICOS
TIEMPO DE RETENCIÓN tR
Es el tiempo que tarda cada sustancia en abandonar el sistema cromatográfico. Esta retención se
define en función de las características moleculares de cada compuesto
Tiempo que transcurre desde la inyección de la muestra hasta que el soluto alcanza el detector (a
veces esta magnitud se mide en volumen de elución)

Ancho de pico de
Tiempo muerto (tM). la base (W).
Es el tiempo Tiempo transcurrido
necesario para que desde que la
una especie que no muestra alcanza el
se retiene en FE detector hasta que
alcance el detector lo abandona
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PRINCIPIOS BÁSICOS
Elución. Proceso por el cual todos los solutos terminan por abandonar la columna
Factor de retención (k). Factor que se puede determinar experimentalmente y permite
comparar la velocidad de migración de los diferentes solutos.
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FACTOR DE SELECTIVIDAD (α)
Relaciona los tiempos de retención de dos solutos y por lo tanto me
permite saber la eficacia de la columna para separarlos
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PODER DE SEPARACIÓN DE LA COLUMNA. PLATOS TEÓRICOS
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PODER DE SEPARACIÓN DE LA COLUMNA. PLATOS TEÓRICOS

N = número de platos
teóricos
W = Ancho de pico
Tr = Tiempo de retención
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PODER DE SEPARACIÓN DE LA COLUMNA. PLATOS TEÓRICOS
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PODER DE SEPARACIÓN DE LA COLUMNA. PLATOS TEÓRICOS

H = altura de pato teórico

L = longitud de la columna
N = número de platos
teóricos
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CLASIFICACIÓN DE LOS MÉTODOS CROMATOGRÁFICOS
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CLASIFICACIÓN DE LOS MÉTODOS CROMATOGRÁFICOS
También se pueden clasificar en función de la forma en la que se lleve a cabo.
a) Plana. La fase b) Columna. se utiliza un tubo de vidrio cilíndrico como
estacionaria se coloca soporte de la fase estacionaria y se hace pasar a través de
sobre una superficie ella la fase móvil.
plana
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CLASIFICACIÓN DE LOS MÉTODOS CROMATOGRÁFICOS
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INSTRUMENTACIÓN

1. Gases
2. Inyector
3. Horno, columna
4. Detector
5. Registro
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INSTRUMENTACIÓN. GASES
AEPT. Altura Equivalente de Platos Teóricos
• Los gases portadores deben
ser inertes. Fase Móvil
• Gases grado UAP
• Eliminar Trazas de O2 y H2O
• Válvulas de presión constante
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INSTRUMENTACIÓN. INYECTOR

INYETOR PARA COLUMNA EMPACADA

• Cantidad de muestra elevada
• Muestra previamente calentada.
• Septum
• Liner. Acero inoxidable, níquel, vidrio o
cuarzo
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INSTRUMENTACIÓN. INYECTOR
COLUMNA CAPILAR
• Muy poca muestra. 0.1 L
• Inyección con división de muestra
• Inyección spitlees
• Inyección en columna
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INSTRUMENTACIÓN. INYECTOR

INYECTOR CON DIVISIÓN DE MUESTRA

• SPLIT
• Partición de muestra.
• Volatilizar muestra y disolvente

• SPLITLESS
• No se volatiliza el disolvente. Temperatura
mas baja que la sustancia mas volátil
• Liberar condensación en la purga
• Mayor sensibilidad y cantidad de muestra
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INSTRUMENTACIÓN. INYECTOR

• INYECTOR EN COLUMNA
• Columna 0,23 mm de diam interno
• Agujas de sílice fundida (0.15 mm diam)
• Sin septum
• Temperatura más baja de la sustancia más volátil
• Ventajas de spitless
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INSTRUMENTACIÓN. DETECTORES

• DETECTORES UNIVERSALES Y ESPECÍFICOS

• Detector de Conductividad Térmica (TCD)
• Detector de Ionización De Flama (FID)
• Detector de Captura Electrónica (ECD)
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INSTRUMETACIÓN. DETECTORES

DETECTOR DE CONDUCTIVIDAD
TÉRMICA
• Diferencia de CT entre el gas portador puro y
con muestra
• Termo sensor. Hilo de metal calentado o
termistor
• Gases permanentes e hidrocarburos ligeros
• Sensibilidad 10-6 – 10-8 g
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INSTRUMENTACIÓN. DETECTORES
DETECTOR DE IONIZACIÓN DE FLAMA
• Gas de la columna + H2

• Flama con exceso de Aire

• El colector cilíndrico polarizado recoge los
iones generados
• Medir corriente iónica entre el colector y el
quemador.
• Elevada sensibilidad
• Gran estabilidad
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INSTRUMENTACIÓN. DETECTORES

DETECTOR DE CAPTURA
ELECTRÓNICA
• El más sensible
• Ni63 fuente de radiación 
• Permisos especiales
• Limpieza especial
• Dificultad de lectura por
contaminación.
• Selectividad
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INSTRUMETNCIÓN. COLUMNA
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TRATAMIENTO DE MUESTRAS
• SEPARACIÓN.

• DESTILACIÓN

• SOLIDOS DISULETOS

• TURBIDEZ

• DISOLVENTE
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PARÁMETROS

• Gas portador
• Temperatura de inyector
• Temperatura del horno
• Temperatura del detector
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CROMATOGRAMAS
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CROMATOGRAMAS
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