CRECIMIENTO

RECUENTO
CULTIVO DE MICROORGANISMOS

Ph. D. Otto Zea Mendoza

 CRECIMIENTO CELULAR
 El crecimiento es el resultado de la división celular y es
el proceso definitivo en la vida de una célula microbiana
 En microbiología, se define el crecimiento como el
aumento en el número de células
 La forma más común de división en procariotas es la
fisión binaria
 Tiempo de generación: El tiempo que demora en darse la
reproducción. Varía según la bacteria
 CRECIMIENTO CELULAR
 Durante el crecimiento exponencial, el aumento del número de células es inicialmente bastante
lento, pero aumenta a una velocidad cada vez mayor. En las últimas etapas del crecimiento
exponencial, esto provoca un aumento explosivo del número de células.
 LA MEDICIÓN DE LAS CONCENTRACIONES
BACTERIANAS

1. RECUENTO DE CÉLULAS VIABLES

2. TURBIDEZ

3. DENSIDAD DE BIOMASA
 RECUENTO DE CÉLULAS VIABLES
 TÉCNICA DE VERTIDO EN PLACAS
 UNIDADES FORMADORAS DE COLONIAS
 Los microorganismos que están vivos son capaces de
formar colonias bacterianas visibles
 RECUENTO DE CÉLULAS VIABLES
 Objetivo
 Técnica cuantitativa que permite determinar la cantidad de bacterias que tiene una suspensión

 Usos
 Análisis de inocuidad de alimentos
 Desafíos bacterianos en condiciones experimentales

 El recuento de la placa Petri x la dilución, dará el número de unidades formadoras de colonia

(UFC)/ml en la suspensión bacteriana no diluida
RECUENTO DE CÉLULAS VIABLES
 LA MEDICIÓN DE LAS CONCENTRACIONES
BACTERIANAS

 UN VOLUMEN DE 1 ml ES REMOVIDO DE UNA SUSPENSIÓN SOSPECHOSA DE

TENER BACTERIAS Y SE DILUYE DE FORMA SERIAL EN SUSPENSIONES DE 10 ml,
(1 ml de suspensión y 9 ml de agua peptonada) SEGUIDA DE PLAQUEO DE ALICUOTAS
DE 0.1 ml EN UN MEDIO AGAR ADECUADO.

 AGUA PEPTONADA O CLORURO AL 0.85% ESTERILIZADA

 PARA PROPÓSITOS ESTADÍSTICOS, LAS PLACAS PETRI QUE CONTENGAN UN

RECUENTO DE ENTRE 30 A 300 COLONIAS DAN LOS DATOS MÁS PRECISOS.
VIDEO DE RECUENTO DE CÉLULAS VIABLES

 https://www.youtube.com/watch?v=DbRUzTpa_h4
TURBIDEZ
TÉRMINOS RELACIONADOS AL CONTROL BACTERIANO
 ESTERILIZACIÓN: Proceso que destruye o elimina todas las formas de un microbio vivo que
proviene de un objeto o del medio ambiente.
Esto incluye a las esporas, que son altamente resistentes.
Esterilización de materiales para cirugía: NO DEBE HABER ESPORAS

 DESINFECCIÓN: Proceso que elimina muchos de los microorganismos patogénicos, excepto

esporas bacterianas, de un objeto o del medio ambiente.

 PASTEURIZACIÓN: El proceso de aplicar calor, usualmente para leche o queso, por un

período específico para matar o retardar el crecimiento de bacterias patógenas
TÉRMINOS RELACIONADOS AL CONTROL BACTERIANO

 BACTERICIDA
 Es cuando el biocida mata a la bacteria

 BACTERIOSTÁTICO
 Propiedad a través de la cual un biocida inhibe la multiplicación bacteriana. Luego de la
remoción del agente, la multiplicación se reasume. Fungistáticos, esporostáticos
 TÉRMINOS RELACIONADOS AL CONTROL BACTERIANO

 SÉPTICO
 Caracterizado por la presencia de microorganismos patógenos en el tejido vivo

 ASÉPTICO
 Ausencia de microorganismos patógenos

 ANTISÉPTICO
 Un biocida o producto que destruye o inhibe el crecimiento de microorganismos dentro o
en tejidos vivos.
 1)Yodo en espuma; 2)Alcohol yodado

 DESINFECTANTES
 Productos o biocidas utilizados para matar microorganismos en objetos o superficies
CULTIVO DE MICROORGANISMOS
 FUENTES DE ENERGÍA MICROBIANA

 FERMENTACIÓN

 RESPIRACIÓN

 FOTOSÍNTESIS
 FUENTES DE ENERGÍA MICROBIANA

 FERMENTACIÓN

La formación de ATP en la fermentación no se acopla a la transferencia de electrones

Se caracteriza por la FOSFORILACIÓN DE SUSTRATOS

La fosforilación de sustratos en un proceso enzimático en el cual un enlace pirofosfato es

donado directamente al difosfato de adenosina (ADP) mediante un intermediario metabólico
fosforilado
FERMENTACIÓN

La fermentación no se
acompaña de cambios en los
estados de oxido-reducción

La composición fundamental
de los productos de la
fermentación es la misma que
la de los sustratos
 FUENTES DE ENERGÍA MICROBIANA

 RESPIRACIÓN

 La reducción química de un oxidante (aceptor de electrones) a través de una serie específica de

portadores de electrones en la membrana establece la fuerza motriz del protón a través de la
membrana bacteriana.
 FUENTES DE ENERGÍA MICROBIANA

 FOTOSÍNTESIS
 La fotosíntesis es como la respiración en que la reducción de un oxidante a través de una serie
específica de portadores de electrones establece la fuerza motriz del protón.

 La diferencia entre los dos procesos es que en la fotosíntesis, el reductor y el oxidante se crean
fotoquímicamente por la energía luminosa absorbida por los pigmentos en la membrana

 Las plantas y algunas bacterias pueden invertir una cantidad sustancial de energía lumínica en
hacer del agua un reductor del dióxido de carbono. En este proceso se genera oxígeno y se
produce materia orgánica
 NUTRICIÓN

 FUENTES DE CARBONO

 FOTOTROFOS (AUTÓTROFOS): USAN ENERGÍA FOTOSINTÉTICA PARA REDUCIR AL

DIÓXIDO DE CARBONO A EXPENSAS DEL AGUA

 QUIMIOLITRÓTOFOS: MICROORGANISMOS QUE USAN SUSTRATOS INORGÁNICOS

COMO EL HIDRÓGENO O EL TIOSULFATO EN CALIDAD DE REDUCTOR Y AL DIÓXIDO
DE CARBONO COMO FUENTE DE CARBONO

 QUIMIORGANOTOTROFOS (HETEROTROFOS): REQUIEREN COMPUESTOS ORGÁNICOS

PARA CRECER Y ESTE DEBE ENCONTRARSE EN UNA FORMA QUE SEA ASIMILABLE
 NUTRICIÓN

 FUENTES DE AZUFRE
 FUENTES DE FÓSFORO
 FUENTES DE MINERALES
 FACTORES DEL CRECIMIENTO
 Es un compuesto orgánico que debe tener una célula para crecer pero que es incapaz de
sintetizar
 NUTRICIÓN

 FUENTES DE NITRÓGENO
 EL PRODUCTO FINAL DE TODAS LAS VÍAS DE ASIMILACIÓN DEL NITRÓGENO ES EL
ION DE AMONIO (NH4)

 FIJACIÓN DE NITRÓGENO
 IMPLICA LA FORMACIÓN DE AMONIACO (NH3) A PARTIR DE DINITRÓGENO GASEOSO
 La capacidad para asimilar N2 de manera reductiva por medio del NH3, denominada FIJACIÓN DE
NITRÓGENO ES UNA PROPIEDAD ÚNICA DE LOS PROCARIONTES Y SON
RELATIVAMENTE POCAS LAS BACTERIAS CON ESTA CAPACIDAD METABÓLICA.

 NUTRICIÓN

 FUENTES DE NITRÓGENO
 La mayoría de los microorganismos pueden recurrir al NH 4 como fuente de nitrógeno y muchos
pueden producir este ión a partir de aminas o de los aminoácidos
 La producción de amoniaco a partir de la desaminación de los aminoácidos se denomina
amonificación.
 El amoniaco se introduce en la materia orgánica mediante vías bioquímicas en las que participa
el glutamato y la glutamina
 Organismos fijadores de nitrógeno
Algunos organismos fijadores de nitrógeno
Aerobios de vida libre
Quimiorganotrofos Fototrofos Quimiolitrotofos
Azotobacter, Klebsiella Cianobacterias Acidiothiobacillus

Anaerobios de vida libre

Clostridium Heliobacteria Metanococcus

SIMBIÓTICOS
Con plantas leguminosas
Soya, guisantes, trébol, etc., con
Rhizobium, Bradyrhizobium,
Sinorhyzobium
Con plantas que no son leguminosas
Aliso, arándano, olivo de otoño, muchas otras
plantas arbustivas con Actynomicete Frankia
 FACTORES MEDIOAMBIENTALES QUE AFECTAN EL
CRECIMIENTO

 UN MEDIO DE CULTIVO ADECUADO DEBE CONTENER TODOS LOS NUTRIMENTOS

REQUERIDOS POR EL MICROORGANISMO QUE VA A SER CULTIVADO Y
CONTROLARSE MINUCIOSAMENTE FACTORES COMO pH, TEMPERATURA Y
AIREACIÓN
 FACTORES MEDIOAMBIENTALES QUE AFECTAN EL
CRECIMIENTO

 NUTRIMENTOS

 CONCENTRACIÓN DE IONES HIDRÓGENO (pH)

 TEMPERATURA

 AIREACIÓN
CONCENTRACIÓN DE IONES HIDRÓGENO (pH)
TEMPERATURA
 AIREACIÓN
 ROL DE OXÍGENO COMO ACEPTOR DE HIDRÓGENO:

 AEROBIOS OBLIGADOS: Requieren oxígeno como aceptor de hidrógeno

 ANAEROBIOS FACULTATIVOS: Capaces de vivir de forma aeróbica o anaeróbica
 MICROAEROFILOS: Requieren pequeñas cantidades de oxígeno (2-10%) para respiración
aeróbica. Más es tóxico
 ANAEROBIOS OBLIGADOS: Requieren otras sustancias que no sean oxígeno como
aceptores de hidrógeno ANAEROBIOS AEROTOLERANTES: Son indiferentes al oxígeno
 ANAEROBIOS OBLIGADOS
 Los géneros bacterianos que se aíslan con mayor frecuencia comprenden:
 Bacilos Gram negativos como
 Bacteroides spp., Prevotella spp., Porphyromonas spp., Fusobacterium spp.

 Cocos Gram negativos como Veillonella sp.

 Cocos Gram positivos principalmente los Peptostreptococcus
 Bacilos Gram positivos no formadores de esporas: Propionibacterium, Actinomyces,
Eubacterium, Lactobacillus y Bifidobacterium
 Bacilos Gram positivos formadores de esporas Clostridium spp.
 AIREACIÓN
 LOS PRODUCTOS DEL METABOLISMO AERÓBICO SON PERÓXIDO DE HIDRÓGENO Y
SUPEROXIDO.

 EN LA PRESENCIA DE HIERRO ESTOS PRODUCTOS PUEDEN GENERAR LOS

PELIGROSOS RADICALES HIDROXIL

 LA PRESENCIA DE SUPEROXIDO DISMUTASA Y CATALASA PROTEGEN A LAS CÉLULAS

DEL LOS EFECTOS ADVERSOS DEL PERÓXIDO DE HIDRÓGENO Y DEL SUPERÓXIDO

 TODOS LOS ANAEROBIOS ESTRICTOS CARECEN DE PERÓXIDO DE HIDRÓGENO Y

SUPEROXIDO.
 EJEMPLOS
 AEROBIOS OBLIGADOS: Bacillus BACTERIAS
GRAMPOSITIVAS
 ANAEROBIOS OBLIGADOS: Clostridium FORMADORAS DE
ESPORAS
 MICROAEROFILOS Y AEROBIOS: Staphylococcus

 AEROBIOS NO FORMADORES DE ESPORAS: Corynebacterium, Listeria

VIDEO DE ANAEROBIOSIS

 https://www.youtube.com/watch?v=yib6n9Xa2pc
MEDIOS DE CULTIVO
 LOS MEDIOS
 Existen tres circunstancias bajo las cuales se pueden cultivar microorganismos

I. AMPLIFICAR UN CLON BACTERIANO ESPECÍFICO

 Algunas bacterias son fáciles de reproducir en medios de crecimiento (E. coli), y otras intracelulares no
(Chlamydiae y Rickettsiae: intracelulares obligatorios)

II. EXAMINACIÓN MICROBIOLÓGICA DE ESPECIMENES NATURALES

 Para determinar la población total de bacterias que existen dentro de un espécimen dado: microbioma
 Más de seis u ocho diferentes medios de cultivo

III. AISLAMIENTO DE UN TIPO PARTICULAR DE MICROORGANISMO

 Cultivo de enriquecimiento
 MEDIOS DE
CULTIVO

LÍQUIDOS SEMISÓLIDOS SÓLIDOS

Caldo nutritivo Menos cantidad de agar Agares
Caldo peptona Bacterias móviles Agar nutritivo
 MEDIOS DE
CULTIVO

SIMPLES ENRIQUECIDOS SELECTIVO DIFERENCIALES

COMPUESTOS NOCIVOS PARA
COMO SIMPLES PERO CON BACTERIAS MCCONKEY
DESARROLLO BACTERIANO SUSTANCIAS PARA QUE SOLO
INHIBIDORES O FACTORES
GENERAL CALDO LACTOSA BILIS CREZCAN UNAS BACTERIAS
DE CRECIMIENTO
BRILLANTE
 MEDIOS DE
CULTIVO

LÍQUIDOS SEMISÓLIDOS SÓLIDOS

Caldo nutritivo Menos cantidad de agar Agares
Caldo peptona Bacterias móviles Agar nutritivo

NO CONTIENEN AGAR
LOS MICROORGANISMOS SE MUEVEN EN
LIBERTAD
 MEDIOS DE
CULTIVO

SIMPLES ENRIQUECIDOS SELECTIVO DIFERENCIALES

COMO SIMPLES PERO CON COMPUESTOS NOCIVOS PARA
DESARROLLO BACTERIAS MCCONKEY SUSTANCIAS PARA QUE SOLO
INHIBIDORES O FACTORES
BACTERIANO GENERAL CREZCAN UNAS BACTERIAS
DE CRECIMIENTO CALDO LACTOSA BILIS BRILLANTE
 MEDIOS DE ENRIQUECIMIENTO
 SE UTILIZAN CON EL PROPÓSITO DE FAVORECER EL DESARROLLO DE UNA
ESPECIE DETERMINADA QUE POR ENCONTRARSE EN PEQUEÑAS CANTIDADES EN
LA MUESTRA, CONJUNTAMENTE CON OTRAS ESPECIES QUE SE ENCUENTRAN EN
MAYOR PROPORCIÓN, SE ENCONTRARÍAN EN DESVENTAJA SI LA COLOCAMOS EN
UN MEDIO DE CULTIVO, DONDE AMBAS SE PUEDEN DESARROLLAR, YA QUE LAS
QUE SE ENCUENTRAN PREDOMINANDO CONSUMIRÍAN PRACTICAMENTE CASI
TODOS LOS NUTRIENTES LO QUE TRAERÍA COMO RESULTADO UN POBRE
DESARROLLO O INCLUSO NINGÚN DESARROLLO DEL GERMEN QUE NOS
INTERESA CULTIVAR

 CALDO SELENITO: SALMONELLA – SHIGUELLA (COPROCULTIVO)

 MEDIOS DE AISLAMIENTO
 RESULTAN ESPECÍFICOS PARA UN SOLO TIPO DE GERMEN AL NO PODER
DESARROLLARSE EN ELLOS NINGUNA DE LAS DEMAS ESPECIES POR LAS
CARACTERÍSTICAS DEL MEDIO

 AGAR MANITOL SALADO: Estafilococos

 AGAR VERDE BRILLANTE: Salmonella

 MEDIO DIFERENCIAL

 EN ESTE MEDIO DE CULTIVO SE

PUEDEN DESARROLLAR SIN
DIFICULTAD DIFERENTES ESPECIES
MICROBIANAS
 SE UTILIZA PARA DIFERENCIAR LAS
ESPECIES DESARROLLADAS POR LA
REACCIÓNES BIOQUÍMICAS QUE
GENERAN SU ACTIVIDAD
METABÓLICA