MEDIOS DE

CULTIVO Y
TECNICAS DE
SIEMBRABlgo. BSc. José Yareta
CAPACIDADES
1. Identifica y conoce la utilidad de
los medios de cultivo.

2. Experimenta con las técnicas de

siembra de bacterias (Simulador)

3. Identifica las diferentes técnicas

de siembra utilizadas en
microbiología.
 Veamos un video

https://www.youtube.com/watch?v=zM3dNjZr7Es
 ¿Qué es un Medio de
Cultivo?
Un medio de cultivo es un sustrato o una solución de nutrientes que
permite el desarrollo de microorganismos.
1. Entre los requerimientos más importantes para su desarrollo
están el carbono, el oxígeno, nitrógeno, dióxido de carbono e
hidrógeno.
2. Muchas bacterias sin embargo necesitan del aporte extra de
factores de crecimiento específicos en forma de suero, sangre,
extracto de carne, bilis y extracto de levadura entre otros.
 ¿Cómo se clasifican los medios de
Cultivo?
1. SEGÚN SU ORIGEN: naturales, semisintéticos y sintéticos.
2. SEGÚN SU CONSISTENCIA: líquidos, semilíquidos, sólidos.

3. SEGÚN SU COMPOSICIÓN: básico o aislamiento,

enriquecidos, diferenciales, transporte.
 Condiciones Físicas y Químicas para
Crecimiento Bacteriano
1. Humedad
2. Oxígeno (anaerobios, aerobios facultativos, aerobios)
3. pH (neutro, algunos ácidos)
4. Temperatura (37°C)
5. Luz
6. Esterilidad
 Medios de cultivo mas
Agar salinoutilizados
manitol (MS, Medio de Chapman)
Medio selectivo para estafilococos debido a la alta concentración de cloruro
sódico (75 g/L). La mayoría de los microorganismos no crecen a esta
concentración de sal, mientras que los estafilococos (Staphylococcus aureus y
S. epidermidis), sí lo hacen. Incorpora manitol como fuente de carbono y
rojo fenol como indicador, lo que permite observar la capacidad
fermentadora del manitol de los estafilococos para establecer un diagnóstico
presuntivo y sirve, por lo tanto, como indicativo de la presencia de
Staphylococcus aureus. Los estafilococos patógenos fermentan el manitol y
producen colonias amarillas. Los estafilococos no patógenos generan
colonias rosas.
 Medios de cultivo mas
utilizados
Agar Columbia base sangre
Es una excelente base para el crecimiento de microorganismos
exigentes y para la buena visualización de hemólisis con el agregado
de sangre. Incluye peptona, tripteína, extracto de levadura y
extracto de corazón que favorecen el desarrollo de microorganismos
exigentes. El almidón incrementa el desarrollo de neiserias y las
reacciones de hemólisis de algunos estreptococos. Tiene la ventaja
de permitir la adición de sangre o de antibióticos entre otras cosas,
obteniéndose así un medio más enriquecido o selectivo de acuerdo
al aditivo.
 Medios de cultivo mas
utilizados
Agar chocolate
Este medio usa la misma base que el agar sangre. La sangre de
cordero desfibrinada y estéril se adiciona a la base fundida a una
temperatura de 85°C para lisar parcialmente las células, lo que
otorga al medio el color pardo-chocolate. También se puede agregar
IsoVitaleX y vancomicina, un suplemento definido que proporciona
el factor V, vitaminas, aminoácidos, coenzimas, glucosa, iones
férricos y otros factores que favorecen el crecimiento de especies
exigentes (Neisseria gonorrhoeae y N. meningitidis).
 Medios de cultivo mas
utilizados
Agar BHI (infusión cerebro-corazón, “brain-heart”)
Es una fórmula muy rica que puede emplearse, ya sea
como caldo o medio sólido, con sangre adicional o sin
ésta, para el crecimiento de una gran variedad de
microorganismos. Los componentes clave incluyen
infusión de distintos tejidos animales con el agregado
de peptona, tampón fosfato y una pequeña
concentración de glucosa. Los caldos infusión cerebro-
corazón se emplean con frecuencia como medio para
hemocultivo y como medio base para muchas pruebas
metabólicas, en especial para la identificación de
estreptococos.
Medios de cultivo mas utilizados (Gram
negativos)
Agar CLED (cistina, lactosa, deficiente en electrolitos)
Es un medio diferencial recomendado para el análisis bacteriológico
de orina, crecen tanto Gram negativas como Gram positivas, que
provocan infecciones urinarias, pudiéndose diferenciar o identificar
sus respectivas colonias. Debido a su deficiencia en electrolitos las
colonias de Proteus no invaden la placa de cultivo, lo que facilita el
recuento. La lactosa es el único carbohidrato presente. La cistina
facilita el crecimiento de los coliformes dependientes de ella. El azul
de bromotimol permite distinguir las colonias de bacterias
fermentadoras de las que no lo son.
 Medios de cultivo mas
utilizados
Agar EMB (eosina, azul de metileno, Agar de Levine)
Es un medio diferencial y selectivo para aislar y detectar
enterobacterias en muestras mixtas. Los colorantes de anilina
(eosina y azul de metileno) inhiben el desarrollo de bacterias Gram
positivas y a las Gram negativas exigentes. El medio incluye lactosa,
lo que permite la diferenciación de los fermentadores de lactosa de
los no fermentadores. Los fermentadores fuertes de lactosa, sobre
todo Escherichia coli, producen colonias de color negro verdoso con
brillo metálico. Los productores más débiles de ácidos, forman
colonias de color violeta. Los no fermentadores de lactosa forman
colonias transparentes.
 Medios de cultivo mas
utilizados
Agar MacConkey
Medio selectivo y diferencial utilizado para la recuperación de
enterobacterias y bacilos Gram negativos entéricos relacionados.
Contiene sales biliares y cristal violeta que inhiben el desarrollo de
bacterias Gram positivas y de algunas Gram negativas exigentes. La
lactosa es la única fuente de carbono. El indicador es el rojo neutro.
Las bacterias fermentadoras de lactosa forman colonias de
diferentes tonos de rojo o zonas opacas alrededor de las colonias.
Las bacterias que no fermentan la lactosa forman colonias incoloras
o transparentes
 Medios de cultivo mas
utilizados
Agar Mueller-Hinton
Es un medio de cultivo rico, diseñado especialmente para hacer
ensayos de sensibilidad y recomendado por el Comité de la
Organización Mundial de la Salud sobre estandarización de pruebas
de susceptibilidad. El agar Mueller-Hinton se utiliza para la
realización del ensayo de difusión en placa, en tanto que el caldo
Mueller-Hinton se emplea para la determinación de la
concentración mínima inhibidora en el ensayo de diluciones
seriadas.
 Medios de cultivo mas
utilizados
Agar SS (Salmonella-Shigella)

Lleva sales biliares, citrato sódico y férrico, tiosulfato y el colorante verde

brillante. El carácter diferencial se basa en la fermentación de la lactosa.
Incorpora rojo neutro. Las colonias lactosa positivas son de color rojo,
mientras que las lactosa negativas son transparentes (Shigella). Las colonias
de Salmonella son transparentes con el centro negro.
 Medios de cultivo mas
utilizados
Agar triptona-soja (TSA)

Medio rico de uso general para el crecimiento de una amplia variedad de

microorganismos. Se produce por digestión enzimática de la soja y de la
caseína. Con frecuencia se utiliza como agar base para otros tipos de medios,
como agar sangre, por ejemplo. En este medio pueden crecer algunos
microorganismos exigentes como ciertas especies de Brucella,
Corynebacterium, Listeria, Neisseria y Vibrio.
 Medios de cultivo mas
Agar verdeutilizados
brillante
Medio altamente selectivo para el aislamiento de especies de Salmonella
excepto S. typhi y S. paratyphi. No se recomienda para el aislamiento de
Shigella. Incluye lactosa, sacarosa y rojo fenol. El verde brillante es el agente
inhibidor. Las colonias de Salmonella se ven de color rosa o blanco, o
transparentes, sobre un fondo rojo.
 Medios de cultivo mas
Agar Lowenstein-Jensen
utilizados
Medio de enriquecimiento selectivo para micobacterias. El colorante
verde de malaquita inhibe el crecimiento de contaminantes que son
capaces de sobrevivir al tratamiento inicial de la muestra. Los
medios con base de Lowenstein son los únicos de uso común que
requieren el agregado de huevos homogeneizado, lo cual obliga a la
esterilización por tindalización. La utilización de la proteína de los
huevos por parte de algunas micobacterias les permite producir
niacina, una característica diferencial importante. Actualmente se
adiciona glicerol o antibióticos y ácido ribonucleico como factor de
crecimiento.
Medios diferenciales para identificación
Citrato,
bioquimica TSI, LIA, Urea
 Veamos un video

https://www.youtube.com/watch?v=YGoPu0cn9ms
TECNICAS DE
SIEMBRA
Blgo. BSc. José Yareta
 Técnicas de Siembra en
Microbiología
Las técnicas de siembra mas usada son:

1. Estría en superficie
2. Agotamiento
3. Dilución
4. Punción
5. Estría simple
6. Mixta (estría y punción)
Siembra por estría

Inoculación primaria Estría en ángulo recto

Estría en ángulo recto cruzado, para producir
“estria simple” una esfera de
crecimiento.
Siembra por
Agotamiento
Siembra por agotamiento
Siembra por
Dilución en
placa
Siembra por extensión
en superficie
Siembra por
punción
Siembra por estría simple en
tubo
Siembra Mixto
 Veamos un video

https://www.youtube.com/watch?v=zVqrSpIFe_M&t=10s
SIMULAR UNA TÉCNICA
DE SIEMBRA EN PLACA

SIMULADOR:
https://learn.chm.msu.edu/vibl/content/gramstain.html
• Las bacterias se pueden cultivar en el laboratorio gracias a los denominados cultivos
de bacterias.

• Un cultivo de bacterias es una técnica que aprovecha la capacidad de división

celular que tienen las bacterias para obtener gran cantidad de bacterias a partir de
unas pocas.

Bacterias obtenidas
durante su cultivo

Bacterias
introducidas en el
cultivo
 • Para realizar un cultivo de bacterias es necesario preparar un medio de cultivo.
• Un medio de cultivo es una mezcla de nutrientes, por ejemplo, de azúcares,
proteínas, sales, vitaminas, agua, etc.
Ejemplo de un cultivo sólido
• Para conseguir un cultivo sólido, se añade a la mezcla de nutrientes y agua una sustancia
que le de una consistencia gelatinosa.

• El medio se prepara en las llamadas placas petri, que son unas cajas de vidrio o cristal.

Placa petri
Células

Medio de
cultivo sólido
Medio de cultivo
sólido

En este medio de cultivo, las células

crecen adheridas a la superficie.