Cromatografía de Gases

y HPLC
Análisis de Productos Agrícolas. Tema 4

Imágenes cortesía de https://lidiaconlaquimica.wordpress.com y https://www.google.com/imghp?hl=es-419

 Cromatografía de
Líquido –Líquido (LLC) reparto
Líquido –Sólido (LSC)
Líquido
Intercambio iónico (IEC)
Exclusión EC
FE: Líquido
FM: Gas de arrastre
Gas-líquido (GLC):
Gas
Gas sólido (CGS):
FE: Sólido
FM: Gas de arrastre
Distribución por diferencias de solubilidad
Cromatografía de
gases Columna

Arrastrada por la
fase móvil
Muestra
Vaporizada
Retenida por la
fase estacionaria

• La fase móvil actúa como un medio de arrastre

• La separación ocurre por diferencias de solubilidad con la fase estacionaria
Cromatografía de
gases Separar los diferentes
componentes de una
muestra

Identificar
cualitativamente los
diferentes componentes
separados

Cuantificar la
concentración de los
componentes
Cromatografía de
gases

La muestra se introduce
en la fase móvil y es
transportada a lo largo de
una columna que
contiene la fase
estacionaria distribuida
Cromatografía de
gases
Fase Móvil

Flujo

Fase Estacionaria

Los componentes de la muestra, experimentan

interacciones repetidas (repartos) entre la fase móvil
y la fase estacionaria
Cromatografía de
gases

Cuando ambas fases se han escogido de forma

adecuada, los componentes de la muestra se
separan gradualmente en bandas en la fase móvil
Cromatografía de
gases

Los componentes
abandonan la columna en
orden creciente de
interacción con la fase
estacionaria

Eluido
Cromatografía de
gases

La amplia gama de selección de materiales

para la fase móvil y la estacionaria permite
separar moléculas que difieren muy poco
en sus propiedades físicas y químicas
Cromatografía de
gases

Gas Sólido Gas Liquido

La fase estacionaria es La fase estacionaria es un
sólida y la retención de líquido sobre un soporte
los analitos se produce sólido inerte
por adsorción. Ampliamente usado y se
Uso limitado: Separación conoce comúnmente
de especies gaseosas de como cromatografía de
bajo peso molecular gases
Cromatografía de
gases
Fase Móvil Fase estacionaria líquida
Soporte
Soporte
Elevada superficie por unidad de volumen
estabilidad térmica
Dureza mecánica suficiente
Inactividad química o de absorción
Baja resistencia al paso de un gas
(Tierra de diatomeas, Teflón, Alúmina)
Fase Estacionaria
No volátil a la temperatura de
operación de la columna
Térmicamente estable
Químicamente inerte a los
solutos de análisis a
temperatura de la columna
Que los solutos a disolverse
tengan un coeficiente de
reparto dentro de límites
apropiados
Cromatografía de
gases
Tiempo de Volumen de Razón de reparto
retención (tr) retención (Vr) (k)
Es el tiempo que Volumen de fase móvil Es una medida del
transcurre desde que necesario para tiempo que el
se inyecta la muestra transportar la banda componente está en la
hasta que alcance el de un componente fase estacionaria en
detector y sale el pico desde el punto de relación con el tiempo
inyección, a través de que está en la fase
la columna, hasta el móvil
detector (en el máximo
de pico del
componente
Cromatografía de Componentes de un Cromatógrafo de gases
gases
1. Fuente de gas
7
2. Regulador de flujo
2 3
3.Sistema de inyección

4. Columna
6
5. Horno
5
6. Detector
4
7. Registrador
1
 Componentes de un Cromatógrafo de gases

1. Fuente de gas Inerte para evitar interacciones

Suministra el gas que Capaz de minimizar la difusión gaseosa

actuará como fase móvil
Fácilmente disponible

Puro y Seco

Económico

Adecuado al detector a utilizar

 Componentes de un Cromatógrafo de gases

1. Fuente de gas

Hidrógeno
Argón – Metano
Helio
Nitrógeno

Tipo de muestra
Tipo de Columna
Tipo de detector
Fase estacionaria
 Componentes de un Cromatógrafo de gases

2. Regulador de flujo

Dispositivo que permite

regular el flujo de gas al
equipo, usualmente se
utilizan de 25 a 150
mL/min
 Componentes de un Cromatógrafo de gases

Gas portador
3. Sistema de Inyección Septum
Cámara de
Vaporiza la muestra para mezcla
incorporarla a la Placas
corriente de gas Calefactoras
portador, calentando a
una temperatura superior
al punto de ebullición del
soluto menos volátil
Columna
 Componentes de un Cromatógrafo de gases

4. Columna Cobre
Eficacia de la columna Aluminio
Longitud
Diámetro Acero
Eficacia de la columna

Tamaño de las partículas del inoxidable

relleno Vidrio
Naturaleza de las fases Teflón
Cantidad de fase estacionaria
Temperatura
Velocidad del gas de arrastre
Cantidad de muestra inyectada
Material de fabricación
Empacada Capilares
Enrollado
 Componentes de un Cromatógrafo de gases

4. Columna

Viene descrita en función del

Eficacia de la columna

número de “platos teóricos: N”.

Dicha cantidad puede estimarse a
partir del ancho de una banda de
elución y del tiempo de retención.
N = 16 (tR / Wb)2 donde:
tR: tiempo de retención
Wb: base del pico
 Componentes de un Cromatógrafo de gases

4. Columna

La eficiencia de la columna puede

Eficacia de la columna

EFICIENCIA N AEPT (cm)

ser estimada también gracias al
parámetro conocido como “altura EXCELENTE 500 0.06
equivalente de un plato teórico” BUENA 300-500 0.06-0-10
JUSTA 200-300 0.10-0.15
(AETP). La cual se puede obtener
DUDOSA 100 0.30
mediante la siguiente expresión:
AEPT= l/N donde:
L: longitud de la columna
N: nro. De platos teóricos
 Componentes de un Cromatógrafo de gases

5. Horno

Contiene a la columna cromatográfica

Calienta a Temperatura constante o por gradiente
Se programa en función de las diferencias en
volatilidad de los componentes de la mezcla
 Componentes de un Cromatógrafo de gases

6. Detector
Detector Cromatograma
Mide la modificación de
la concentración de un
compuesto que es Columna Señal
eluído en el seno del gas
portador

Produce un señal estable cuando solo pasa gas de

arrastre y diferentes cuando pasa un componente
de la mezcla
 Componentes de un Cromatógrafo de gases

6. Detector

• Alta sensibilidad
• Respuesta rápida a los cambios de concentración
• Amplio rango de respuesta lineal
• Estable con respecto a ruido y deriva
• Baja sensibilidad a pequeñas variaciones de flujo,
presión y temperatura
• Señal fácil de manejar
• Fácil mantenimiento
 Componentes de un Cromatógrafo de gases

6. Detector

De conductividad De ionización a la
Térmica (TCD) llama (FID)
En función de la forma en
que la señal es generada
existen diferentes tipos
de detectores, entre los
que están los siguientes:
De fotometría de De Captura
llama (FPD) electrónica (ECD)
 Componentes de un Cromatógrafo de gases

6. Detector

Consiste en un
dispositivo denominado
catatómetro, cuyo
funcionamiento se basa
en los cambios en la
conductividad térmica
de gas ocasionados por
la presencia de
moléculas de analito.
Conductividad Térmica
 Componentes de un Cromatógrafo de gases

6. Detector
Utiliza un filamento caliente colocado en el flujo de
gas emergente
La cantidad de calor por conducción que pierde el
filamento hacia las paredes del detector depende de
la conductividad térmica de la fase gaseosa
Alambre de platino
Tungsteno
Aleación Níquel - cobalto
Aleación tungsteno - renio
Conductividad Térmica
 Componentes de un Cromatógrafo de gases

6. Detector

Permite determinar la
presencia incluso de
pequeñas cantidades de
materiales orgánicos que
La temperatura del filamento y su resistencia
producen una reducción
eléctrica, dependen de la conductividad
relativamente grande en
térmica del gas que lo rodea.
la conductividad térmica
del eluyente de la
columna
Conductividad Térmica
 Componentes de un Cromatógrafo de gases

6. Detector

La respuesta se produce
como resultado de la
combustión de los
compuestos orgánicos
en una pequeña llama de
aire-hidrógeno, con
desprendimiento de
iones (CHO+) y
electrones
Ionización de la llama
 Componentes de un Cromatógrafo de gases

6. Detector
Si aplicamos una
diferencia de potencial
entre el extremo del
quemador y el cátodo
colector se genera una
corriente eléctrica que,
amplificada, constituye la
señal analítica

Ionización de la llama
 Componentes de un Cromatógrafo de gases

6. Detector

Ésta será proporcional al

número de átomos de
carbono por unidad de
tiempo.

Ionización de la llama
 Componentes de un Cromatógrafo de gases

6. Detector
Mide la emisión óptica procedente,
principalmente, del fósforo y del azufre.
Cuando el eluido pasa por una llama
mezclado con hidrógeno y aire. Los átomos
excitados emiten una radiación
característica que se puede aislar con un
filtro y detectar con un tubo
fotomultiplicador
Fotometría de llama
 Componentes de un Cromatógrafo de gases

6. Detector

El gas que abandona la

columna atraviesa un
emisor de electrones, los
cuales provocan su
ionización. Al aplicar una
diferencia de potencial se
crea una corriente
eléctrica que constituye
la señal Captura electrónica
 Componentes de un Cromatógrafo de gases

Existen instrumentos híbridos que combinan la cromatografía de gases con

otras técnicas, como puede ser un espectrómetro de masas o un
espectrofotómetro UV
 Componentes de un Cromatógrafo de gases

7. Registrador

• Permite el cálculo integral del área de los picos

producidos por los distintos componentes de la
muestra
• Se realiza la comparación entre estándar y la
muestra
 HPLC
(High Performance Liquid
Chromatography/
Cromatografía líquida de alto
desempeño)

Las separaciones
dependen de: las
dimensiones de la
columna, constitución
• Separaciones dentro de un gran número de química del material de
sustancias en un tiempo corto relleno, tamaño del
• Sustancias poco volátiles o térmicamente grano, características del
inestables poro y composición del
• Resultados Cualitativos y Cuantitativos eluyente
 HPLC
Inyección de la • Bucles o válvulas dosificadoras
muestra

• Depende de la naturaleza de los componentes a

Columna
analizar

Relleno • Depende del mecanismo de separación

Eluyente y • Depende de: Viscosidad, transparencia al UV, Pto. De

flujo Ebullición. Toxicidad, etc.

• UV/Visible, fluorescencia, electroquímico, Universal, De

Detectores
índice de refracción y conductividad

Especificaciones de los equipos

HPLC
 Usos
Gas Sólido
Definiciones
Líquido Gas

Gas Liquido Componentes de

un cromatógrafo
Cromatografía de
reparto
HPLC
Fuente de gas

Regulador de flujo

Sist. de Inyección
Especificaciones Funcionamiento
de los equipos Columna
Eficacia
Conductividad
Horno
Ionización de la llama
Fotometría de la llama Detector
Captura de electrones
Acoplamiento con Registrador
espectrómetro de masas