LA

CROMATOGRAFÍ
Es A un método físico
esencialmente de
separación en el que los componentes a
separar se distribuyen entre dos fases, una
inmóvil (lecho estacionario), y otra móvil
(fase móvil)

La fase estacionaria: La fase móvil:

Debe de ser solida o liquida Debe de ser liquida o gaseosa
para su optima ejecución para su mejor ejecución.
Técnica Fase móvil Fase estacionaria
Cromatografía de gases Gas Sólido o líquido
Cromatografía líquida Sólido o líquido
en fase inversa Líquido (polar) (menos polar)
Cromatografía líquida Líquido Sólido o líquido
en fase normal (menos polar) (polar)
Cromatografía líquida
de intercambio iónico Líquido (polar) Sólido
Cromatografía líquida
de exclusión Líquido Sólido
Cromatografía líquida
de adsorción Líquido Sólido
Cromatografía de
fluidos supercríticos Líquido Sólido
CLASIFICACIÓN DE LOS MÉTODOS DE
SEPARACIÓN EN CROMATOGRAFÍA

 Cromatografía plana. La fase

estacionaria se sitúa sobre una placa
plana o sobre un papel. Las principales
técnicas son:
 Cromatografía en capa fina
 Cromatografía en papel

 Cromatografía en columna. La fase

estacionaria se sitúa dentro de una
columna. Según el fluido empleado
como fase móvil se distinguen:
 Cromatografía de líquidos
 Cromatografía de gases
 Cromatografía de fluidos supercríticos
CROMATOGRAFÍA EN
PAPEL 
Es la técnica de separación e identificación
de sustancias químicas mediante un
disolvente que se mueve sobre hojas o tiras
de papel de filtro.
Existen muchos tipos de cromatografía sobre
papel, una primera división de las variadas
clases podría ser:

Cromatografía ascendente: el disolvente se

encuentra en el fondo del recipiente que
sostiene al papel y va subiendo a través de el
por capilaridad.
Cromatografía descendente: el disolvente esta
en un recipiente esta en un recipiente del que
cuelga el papel, fluye por él hacia abajo por una
combinación de capilaridad y gravedad.
CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA
Aplicación de las muestras
La cromatografía en
capa fina (CCF) es una 
técnica cromatográfica
 que utiliza una placa
inmersa verticalmente.
Esta placa
cromatográfica consiste
en una fase estacionaria
polar (comúnmente se
utiliza sílica gel)
adherida a una
superficie sólida. La fase
estacionaria es una capa
uniforme de un
absorbente mantenido
sobre una placa, la cual
puede ser de vidrio,
Elección del eluyente

Principales eluyentes en orden

creciente de polaridad:
• Éter de petróleo
• Éter dietílico
• Ciclohexano
• Tetracloruro de carbono†
• Acetato de etilo
• Piridina†
• Cloroformo†
• Diclorometano†
• Benceno†
• Etanol
• Metanol
• Agua
• Ácido acético
† Compuestos cancerígenos.
CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA

Es una técnica de separación y no debe confundirse con una

técnica cuantitativa o cualitativa de análisis. Es una de las
técnicas analíticas ampliamente utilizadas, la cual permite
separar físicamente los distintos componentes de una
solución por la adsorción selectiva de los constituyentes de
una mezcla. En toda cromatografía existe un contacto entre
dos fases, una fija que suele llamarse fase estacionaria, y
una móvil (fase móvil) que fluye constantemente durante el
análisis, y que en este caso es un líquido o mezcla de varios
de ellos. La fase estacionaria por su parte puede ser alúmina
, sílice o resinas de intercambio iónico . Éste es el principio
fundamental de la cromatografía. Un ejemplo notable es la
cromatografía de intercambio iónico. Las columnas más
utilizadas son las de sílice.
CROMATOGRAFÍA DE GASES
 La cromatografía de gases se aplica a
numerosos compuestos orgánicos. En el caso
de compuestos no volátiles, se recurre a
procesos denominados de "derivatización", a
fin de convertirlos en otros compuestos que
se volatilicen en las condiciones de análisis.

Dentro de la cromatografía líquida, destaca la cromatografía líquida

de alta resolución que es la técnica cromatográfica más empleada
en la actualidad, normalmente en su modalidad de fase reversa, en
la que la fase estacionaria tiene carácter no polar, y la fase móvil
posee carácter polar (generalmente agua o mezclas con elevada
proporción de la misma o de otros disolvente polares, como por
ejemplo, metanol). El nombre de "reversa" viene dado porque
tradicionalmente la fase estacionaria estaba compuesta de sílice o
alúmina, de carácter polar, y por tanto la fase móvil era un
disolvente orgánico poco polar.
 La cromatografía de gases es una técnica 
cromatográfica en la que la muestra se volatiliza
y se inyecta en la cabeza de una columna
cromatográfica. La elución se produce por el flujo
de una fase móvil de gas inerte. A diferencia de
los otros tipos de cromatografía, la fase móvil no
interactúa con las moléculas del analito; su única
función es la de transportar el analito a través de
la columna.

Existen dos tipos de cromatografía de gases (GC): la

cromatografía gas-sólido (GSC) y la cromatografía gas-
líquido (GLC). En la GSC la fase estacionaria es sólida y la
retención de los analitos en ella se produce mediante el
proceso de adsorción. Precisamente este proceso de
adsorción, que no es lineal, es el que ha provocado que
este tipo de cromatografía tenga aplicación limitada, ya
que la retención del analito sobre la superficie es
semipermanente y se obtienen picos de elución con
colas. Su única aplicación es la separación de especies
gaseosas de bajo peso molecular.
  Gas portador
El gas portador
cumple
básicamente dos
propósitos:
Transportar los
componentes de la
muestra, y crear
una matriz
adecuada para el
detector. Un gas
portador debe
reunir ciertas
condiciones:
• Debe ser inerte para evitar interacciones (tanto con la
muestra como con la fase estacionaria)
• Debe ser capaz de minimizar la difusión gaseosa
• Fácilmente disponible y puro
• Económico
• Adecuado al detector a utilizar...
 Sistema de inyección de muestra  Inyector de muestra para un GC

La inyección de muestra es un Si es necesaria una

apartado crítico, ya que se debe
inyectar una cantidad adecuada, y
debe introducirse de tal forma (como
un "tapón de vapor") que sea rápida
para evitar el ensanchamiento de las
bandas de salida; este efecto se da
con cantidades elevadas de analito
reproducibilidad del tamaño de
muestra inyectado se puede usar
una válvula de seis vías o válvula
de inyección, donde la cantidad
a inyectar es constante y
determinada por el tamaño del
bucle de dicha válvula.
 Columnas y sistemas de
control de temperatura

En GC se emplean dos tipos de columnas: las empacadas o de

relleno y las tubulares abiertas o capilares. debido a su mayor
rapidez y eficiencia. La longitud de estas columnas es variable,
de 2 a 60 metros, y están construidas de acero inoxidable, 
vidrio, sílice fundida o teflón. Debido a su longitud y a la
necesidad de introducirlas en un horno, las columnas suelen
enrollarse en una forma helicolidal con longitudes de 10 a 30
cm, dependiendo del tamaño del horno.

 Detectores
El detector es la parte del cromatógrafo que se encarga de
determinar cuándo ha salido el analito por el final de la
columna. Las características de un detector ideal son:
• Sensibilidad: Es necesario que pueda determinar con precisión
cuándo sale analito y cuando sale sólo el gas portador. Tienen
sensibilidades entre 10-8 y 10-15 g/s de analito.
• Respuesta lineal al analito con un rango de varios órdenes
de magnitud.
• Tiempo de respuesta corto, independiente del caudal de
salida.
• Intervalo de temperatura de trabajo amplio, por ejemplo
desde temperatura ambiente hasta unos 350-400 °C,
temperaturas típicas trabajo.
• Estabilidad y reproducibilidad, es decir, a cantidades iguales
de analito debe dar salidas de señal iguales.
• Alta fiabilidad y manejo sencillo, o a prueba de operadores
inexpertos.
• Respuesta semejante para todos los analitos, o
• Respuesta selectiva y altamente predecible para un
reducido número de analitos.
 Algunos tipos de detectores:  Aplicaciones

• Detector de ionización de llama Por una parte su capacidad para

 (FID, Flame Ionization Detector). separar mezclas orgánicas
• Detector de conductividad térmica complejas, compuestos
 (TCD, Thermical Conductivity organometálicos y sistemas
Detector). bioquímicos. Su otra aplicación
• Detector termoiónico (TID, es como método para
ThermoIonic Detector). determinar cuantitativa y
• Detector de captura de electrones cualitativamente los
 (ECD, Electrón-Capture Detector). componentes de la muestra.
• Detector de emisión atómica (AED, Para el análisis cualitativo se
Atomic Emission Detector). suele emplear el tiempo de
retención, que es único de cada
compuesto en condiciones
determinadas (mismo gas
portador, rampa de temperatura
y flujo), o el volumen de
retención. En aplicaciones
cuantitativas, integrando las
áreas de cada compuesto o
midiendo su altura, con los
CROMATOGRAFÍA DE  INSTRUMENTACIÓ
FLUIDOS N
SUPERCRÍTICOS Debido a las características
La cromatografía de  de la fase móvil (alta presión
fluidos supercríticos (en inglés y temperatura), se emplean
, Supercritical Fluid equipos parecidos a los de
Chromatography, o SFC) es una HPLC, con varias diferencias:
técnica híbrida entre la 
cromatografía de gases (GC) y la 
• El empleo de un horno
HPLC, que combina lo mejor de
termostático para poder
ambas técnicas. Esta técnica es
controlar con precisión la
importante porque permite la
temperatura de la fase móvil.
separación de mezclas en las que
• El uso de un restrictor,
no es adecuada la aplicación de la
empleado para poder
GC ni de la HPLC.
mantener por una parte la
presión en el interior de la
columna, y -por otra parte-
permitir la bajada de la
presión a la salida para que el
fluido supercrítico (SF en
adelante) pase al estado
gaseoso y pueda detectarse
 Fases estacionarias  Fases móviles

Se pueden emplear, al La fase móvil estrella en la SFC es el 

igual que en la GC, las dióxido de carbono, por sus
columnas capilares o de excelentes propiedades:
relleno, prefiriéndose las • Apolar, disuelve una gran variedad
primeras. Las dimensiones de moléculas orgánicas.
son parecidas en longitud, • Transparente a la 
de 10 a 20 m, y el radiación ultravioleta
diámetro interno es • Inodoro
bastante menor, de 0,05 a • No tóxico
0,10 mm. • Fácil de obtener
• Barato
• No inflamable
  Detectores  TÉRMINOS EMPLEADOS EN CROMATOGRA
Se puede emplear el 
detector de ionización de llama
 (también usado en GC), (permite
detectar casi cualquier compuesto
orgánico), alta sensibilidad y bajo
mantenimiento. El espectrómetro de
masas también tiene utilidad, al tener
una salida en fase gas, y detectores
espectrofotométricos como el de  líquidos o CEC). un gas
infrarrojos, ultravioleta, el de emisión
por fluorescencia, el termoiónico y el
fotométrico
Aplicacionesde llama.
La SFC se aplica a una gran variedad
de compuestos, entre los que
podemos citar drogas, alimentos,
herbicidas, tensioactivos, polímeros y
aditivos para éstos, impelentes,
explosivos o combustibles fósiles.
• Analito es la substancia
que se va a separar
durante la cromatografía.
• Fase móvil es la fase que
se mueve en una dirección
definida. Puede ser un
líquido (cromatografía de
(cromatografía de gases) o
un fluido supercrítico
(cromatografía de fluidos
supercríticos). Fase
estacionaria es la
sustancia que está fija en
una posición durante la
cromatografía. Un ejemplo
es la capa de gel de sílice
 en la 
cromatografía en capa fina
• Cromatografía analítica se  EJEMPLOS DE CROMATOGRAFÍ
emplea para determinar la
existencia y posiblemente también
la concentración de un analito en • Aplicaciones
una muestra. petroquímicas.
• Fase enlazada es una fase • Comprobación de
estacionaria que se une de forma  incendios.
covalente a las partículas de • Para separar tintas.
soporte o a las paredes internas de • Detección de
la columa. radiactividad.
• Cromatograma es el resultado • Para determinar la
gráfico de la cromatografía. En el pureza de una
caso de separación óptima, los sustancia.
diferentes picos o manchas del • Estudio de los vinos.
cromatograma se corresponden a • Control del destilado
los componentes de la mezcla industrial de
separada. aguardientes
• Estudios de calidad de
aceites de oliva.
 CONCLUSIONES

Se observó en esta práctica que por medio de la cromatografía es

posible identificar de qué sustancias está compuesta una mezcla.
Como la polaridad del solventes utilizados para la cromatografía
determinan la el resultado mostrándonos sus diferentes
compuestos.
Se observó como las diferentes características de la mezcla “A” se
veían en la placa promedio de sus diferentes manchas.
Como ciertos factores pueden modificar el restado en esta práctica.
Se observó en esta práctica que por medio de la cromatografía es
posible identificar cuáles son las sustancias que está compuesta
una mezcla a través de una fase estacionaria que muestra la
cromatografía.
La polaridad de los solventes utilizados para la cromatografía
determina el resultado mostrándonos sus diferentes compuestos,
colores y pureza que podemos obtener de ello.