FUNDAMENTOS DE

CROMATOGRAFÍA GASEOSA

SUMI SCIENTIFIC INSTRUMENTS

LABORATORIO DE APLICACIONES
 CONTENIDO

• Principios Básicos
• Instrumentación
• Aplicaciones
• Mantenimiento Básico & troubleshooting
 CONCEPTO DE CROMATOGRAFÍA
• La cromatografía es un método de separación en el que los compuestos de la
muestra son separados de acuerdo con sus diferentes interacciones con la fase
estacionaria y la fase móvil.

Fase estacionaria  fase que se mantiene fija en la columna.

Fase móvil  transporta la muestra a través de la fase estacionaria conforme fluye por la
columna.

• Objetivos de la cromatografía:
Separar, identificar y cuantificar compuestos-dentro de la
matriz.
 CONCEPTO DE LA CROMATOGRAFÍA
Fase estacionaria 
Columna cromatógrafica (cromatografía en columna)
Fase móvil 
• Líquido
• Gas Simbología
• Fluido supercrítico
Cromatografía líquida LC, HPLC, CLAE

Cromatografía En columna Cromatografía

gaseosa GC, CG

Cromatografía de fluido SFC

supercrítico
 HISTORIA DE LA CROMATOGRAFÍA

Éter de petróleo (mezcla de

hidrocarbonatos –
pentano/hexano)

Clorofila  mezcla de
Botánico ruso substancias (descubrió 6
CaCO3 pigmentos diferentes)

Mikhael Semenovich Tswett : pionero en el desenvolvimiento de la cromatografía.  estudio de pigmentos vegetales

(1906)
 PROCESO CROMATÓGRAFICO
Muestra

Flujo de la fase móvil

Analito A

Analito B

A
B
 QUE ES LA CROMATOGRAFÍA
GASEOSA?

• Cromatografía gaseosa es un método analítico donde los

compuestos de una muestra son físicamente separados antes de
la medición.
 QUE TIPO DE MUESTRAS PUEDEN SER
ANALIZADAS POR GC?
• Compuestos orgánicos en general
• Vaporizables a ~400 ºC
• Térmicamente estables

• Otras muestras pueden ser analizadas después de realizar un

pretratamiento a las muestras.
¿QUÉ ES UN CROMATÓGRAFO GASEOSO?

GC-2010 GC-17A

GC-2014

GC-14B GC-8A
 COMPONENTES DEL GC
Horno de la
columna

Inyector Columna
(Entrada de
muestra)
Detector

Sistema de
Controlador de procesamiento de
flujo de gas datos

10
 CROMATÓGRAMA
• El cromatógrama es el gráfico obtenido por el análisis
cromatográfico
• Cada pico del cromatógrama (idealmente) representa un único
compuesto
• El tiempo en que el pico alcanza su intensidad máxima se refiere al
tiempo de retención.
Intensidad de la Señal

Tiempo 11
 SEPARACIÓN EN GC
• Separación ocurre en la columna
• Dos fases son envueltas:
• Fase estacionaria
• Fase móvil (gas de arrastre)
• Fase estacionaria reside en la columna
• Fase móvil se desplaza sobre a fase estacionaria

12
 SEPARACIÓN EN GC

• Los compuestos son separados por que se

desplazan a tasas diferentes dentro de la columna.

13
 POR QUE MIGRAN A TASAS
DIFERENTES?
• Interacciones intermoleculares atraen moléculas para la fase
estacionaria
• Ej.: puente de hidrogeno

Interacción mas débil Interacción mas fuerte

Fase Estacionaria

14
 FACTORES QUE AFECTAN LA SEPARACIÓN

• Estructura química de los compuestos (1) M

T↑
• Fase estacionaria (2)
• Temperatura de la columna (3) S

M T↓
M M

S
S S (3)
(1) (2)
15
 INSTRUMENTACIÓN

• Controlador de flujo de gas

• Inyector
• Columna
• Detector

16
PRINCIPALES COMPONENTES DE GC
Muestra Analista
Controlador de Flujo
INJ Detector

Gas Software
Columna
(Hélio)
GC Horno Control del Instrumento
Adquisición de datos
Procesamiento de datos
Almacenamiento de datos

17
 CONTROLADOR DE FLUJO DE GAS
• Dispositivo usado para ajustar flujos de gas en el cromatógrafo de gases
• Dos tipos:
• Controlador de flujo manual
• Ej.: GC-14B, GC-17AP
• Controlador de flujo electrónico
• Ej.: GC-17AA, GC-2010
• Ventajas de los controladores de flujo electrónico:
• Menos trabajo y operación mucho más simple.
• Reduce errores por operación manual como split ratio.
• Mejor repetibilidad y confiabilidad cuantitativa

18
 INYECTOR
• Componente del cromatógrafo gaseoso donde la
Entrada de la muestra
muestra es introducida
• Vaporiza la muestra (solvente +
compuestos a analizar)
• Mezcla el vapor de la muestra con la Entrada
fase móvil (gas de arrastre) del gas de
arrastre
• Transfiere vapor dentro de la columna

• Forma mas simple:

• Cámara de calentamiento
• Inyector liner/glass insert
Flujo hacia la
• Flujos de gas columna
Glass liner/
inyector liner/
glass insert

19
 GLASS INSERT
• Por que usar glass insert:
• Eliminar contacto de la muestra
con el metal (inyector)
Lana de
vidrio
• Calentamiento uniforme para
mejor vaporización de la silanizado
muestra

Glass inserts de Shimadzu para

columnas capilares

20
 CUALIDADES DESEABLES DEL
INYECTOR
• Inyección de la muestra en la fase móvil sin dispersión de la muestra
• Vaporizar todos los solutos instantáneamente sin descomposición térmica
• No contaminar la muestra
• No perder la muestra

21
 TIPOS DE INYECTORES
• Inyector por Vaporización
• La muestra es inyectada en una cámara constantemente calentada
• Inyector Split/Splitless
• Inyector Wide Bore
• Programmed Temperature Vaporizing Injector (Inyector de vaporización a temperatura
programada)
• La muestra es inyectada en una cámara donde la temperatura puede ser
programada
• Inyector On-Column
• La muestra es introducida directamente dentro de la columna

22
 TIPOS DE INYECTORES SHIMADZU
Inyector Tipo

Vaporización/ Inyector caliente

Inyector Split/Splitless

Inyector Wide Bore

Vaporización / Inyector caliente

Inyector On-Column (OCI) Inyector frió, bueno para compuestos térmicamente

inestables

Inyector frió, bueno para compuestos térmicamente

Inyector de vaporización con temperatura
inestables, alto punto de ebullición para inyección de
programada (PTV)
gran volumen de muestra

23
 INYECTOR SPLIT/SPLITLESS
• Ventajas:
• Previene la introducción de Flujo de purga
componentes no volátiles de la del septum
muestra
• Desventajas: Flujo de gas
de arrastre
• Discriminación de compuestos con
alto punto de ebullición y Flujo split
compuestos térmicamente
inestables.

• Dos modos de inyección en un único

inyector

Flujo de la columna

24
 DISCRIMINACIÓN EN EL INYECTOR
(DE LA MUESTRA)

• La muestra no es completamente vaporizada en el momento de la entrada de la columna

• Porcentajes diferentes de cada compuesto entra en la columna

25
 INYECCIÓN SPLIT
• Vapor de muestra mezclado con el gas de arrastre:
• Una pequeña parte del flujo entra en la columna (1-4ml/min.)
• La otra gran parte (10-100mL/min.) sale por la válvula split

• Volumen típico de inyección: 1-2 microlitros

• Valor split es determinado por:

• Split ratio = Flujo Split/Flujo de la columna

26
 INYECCIÓN SPLIT

Purga del septum

• Para muestras con alta concentración Arrastre

• Ventajas: Split
• En general los picos con buen formato

27
 INYECCIÓN SPLITLESS

• Durante la inyección, válvula de la línea split es

cerrada
• Todo el vapor de la muestra entra en la columna

• La línea de flujo split es reabierta aproximadamente

después de 30 seg. a 2 minutos
• Purga del vapor restante del inyector

28
 INYECCIÓN SPLITLESS

Purga del septum*

• Para compuestos de nivel trazas Arrastre

• Bueno para muestras semi-volátiles Split*

(analitos con puntos de ebullición
encima de ~150)

* Cerrado antes y
durante la
inyección

29
 INYECTOR ON-COLUMN (OCI)
• Deposita la muestra directamente
dentro de la columna a baja
temperatura
• Sin discriminación de la
muestra para compuestos
de alto punto de ebullición Arrastre

• Minimiza la descomposición
de los compuestos Entrada de
térmicamente inestables aire frió

• Desventajas:
• Contaminación más rápida
de la columna Salida de
aire frió

OCI Insert

30
 INYECTOR CON VAPORIZACIÓN DE
TEMPERATURA PROGRAMADA (PTV)
• El glass insert puede ser calentado y
enfriado rápidamente Purga del septum
• La muestra es introducida en un Arrastre
inyector frió Salida de flujo
• Minimiza la descomposición split
de la muestra y discriminación Entrada de
• Compuestos no volátiles no aire frió
son depositados
directamente en la columna
• Permite inyección de gran volumen
de muestra (con programación del Salida de
flujo del split) aire frió

31
 INYECTOR PTV/OCI SHIMADZU

• Sistemas de inyección de PTV y OCI de Shimadzu

están disponibles en un único inyector

• OCI/PTV-2010 para GC-2010 series

• OCI/PTV-17 para GC-17A series

32
TIPOS DE COLUMNAS PARA GC

Columna capilar
Resina de
Columna empacada poliamida
Tubo de Sílica Fase
fundida estacionaria

Vidrio o acero inox.

Material sólido
Fase estacionaria
para soporte
(camada fina)

33
 TIPOS DE COLUMNA CAPILAR
Film de polímero revestido Partículas sólidas porosas Partículas sólidas
en la pared interna de la revestidas en la pared empacadas dentro
columna interna da columna de la columna

Wall Porous Packed

Coated Layer Capillary
Open Open
Tubular Tubular

~90% ~10%

34
 FASE ESTACIONARIA
• Cromatografía Gas-Líquido (~90%)
• Polisiloxano

R= CH3 methyl
R R
CH2CH2CH2CN cyanopropyl
O Si O Si O
R R CH2CH2CF3 trifluoropropyl

• Polietileno glicol phenyl

HO CH2 CH2 O H
n
• Cromatografía Gas-Sólido (~10%)
• Materiales sólidos absorbentes, por ej., partícula molecular, alumina, etc.
• Uso: hidrocarbonatos muy volátiles (ej. CH4), gases inorgánicos (ej. N2,
CO2)

35
 TIPO DE FASE ESTACIONARIA
(METIL SILICONA)

CH3

Si O

CH3
100%

Nombre de la fase estacionaria： 100% Dimetilpolisiloxano

Polaridad ： Apolar
Propiedad de Separación ： Elusión en orden del punto de ebullición
Uso ： Petróleo, solventes, compuestos con alto punto
de ebullición
Rango de temperatura ： - 60℃ ～ 360℃ （430℃ posible)
Nombre comercial ： *** - 1

36
 TIPO DE FASE ESTACIONARIA
(FENILMETIL）

CH3
Si O Si O

CH3

Nombre de la fase estacionaria ： ** % Difenil ** % Dimetilpolisiloxano

Polaridad ： Polaridad media
Propiedad de Separación ： Compuestos aromáticos son retenidos en el grupo fenil
Uso ： Aromas, ambiental, compuestos aromáticos
Rango de temperatura ： - 60℃ ～ 340℃
Nombre comercial ： *** - 5, *** - 35, *** - 50, (*** - 17)

37
 TIPO DE FASE ESTACIONARIA （CIANOPROPILFENIL）

C N
(CH2)3 CH3
Si O Si O

CH3

Nombre de la Fase estacionaria ： ** % Cianopropilfenil ** % Dimetilpolisiloxano

Polaridad ： Polaridad media para fuerte
Propiedad de Separación ： Eficaz en la separación de compuestos nitrogenados e
isomeros, etc.
Uso ： Pesticidas, PCB, Compuestos nitrogenados
(mejor evitar su uso con FTD)
Rango de temperatura ： - 20℃ ～ 280℃
Nombre comercial ： *** - 1301, *** - 1701, *** - 225

38
 TIPOS DE FASE ESTACIONARIA（TRIFLUOROPROPIL）

CF3
(CH2)2 CH3
Si O Si O
CH3 CH3

Nombre de la Fase estacionaria： ** % Trifluoropropil ** % Dimetilpolisiloxano

Polaridad ： Polaridad media a fuerte
Propiedad de Separación ： Los compuestos halogenados son retenidos
Uso ： Compuestos halogenados, compuestos polares,
solventes
Rango de temperatura ： - 20℃ ～ 340℃
Nombre comercial ： *** - 200, *** -210

39
 TIPO DE FASE ESTACIONARIA
（POLIETILENO GLICOL）

H H
C C O

H H

Nombre de la fase estacionaria: Polietileno glicol

Polaridad ： Fuertemente polar
Propiedad de separación ： Retención de compuestos polares y fuertes
Uso ： Compuestos polares, solvente, aromas éster metílico de
ácidos grasos.
Rango de temperatura ： 40℃ ～ 250℃
Nombre comercial ： *** - WAX

40
SELECCIÓN DE LA FASE ESTACIONARIA
• Escoja la fase líquida que más se asemeja en polaridad
a los compuestos de interés del análisis.
Análisis de compuestos apolares-columna apolar (ej.: Rtx-1)
Análisis de compuestos polares-columnas con polaridad fuerte (ej.: StabilWAX)

• Escoja la fase líquida de acuerdo con el propósito del

análisis.
Cuando la diferencia de los puntos de ebullición de los compuestos es grande.
－Columna apolar (ej.: Rtx-1)
Cuando la diferencia de los puntos de ebullición de compuestos no es grande
como isomeros
- Columna con polaridad fuerte (ej.: StabilWAX)

41
DIMENSIONES DE COLUMNA CAPILAR
PARA APLICACIONES EN GC
• Longitud
• Normalmente 30 ~ 60 m

• Diámetro interno
• Normalmente 0.25 mm (narrow-bore), 0.32 mm (semi wide-bore) o
0.53 mm (wide-bore)

• Espesor de la fase estacionaria

• Normalmente 0.1 ~ 3 micrones

42
 DETECTOR

• Detector indica la presencia de cada componente

que eluye de la columna
• Cantidad de componentes pueden ser medidas
basándose en la señal del detector en función del tiempo

43
 DETECTORES PARA GC

• Flame Ionization Detector (FID) Universal

Detector por Ionización de Llama
• Thermal Conductivity Detector (TCD) Universal
Detector por Conductividad Térmica
• Flame Thermionic Detector (FTD/NPD) Selectivo
Detector Termoiónico de Llama
• Flame Photometric Detector (FPD) Selectivo
Detector Fotométrico de Llama
Selectivo
• Electron Capture Detector (ECD)
Detector por Captura de Eletrones
Selectivo
• Surface Ionization Detector (SID)
Detector por Ionización de Superfície Universal &
• Mass Spectrometer Detector (MSD) Selectivo
Detector de Espectro de Masas
• etc.

44
GAS DE ARRASTRE Y DE DETECTOR
Gas de Arrastre
He e N2
(No en caso de columna capilar, es preferible Helio)
El gas debe tener pureza de 99.9999% o más.
Gas para Detector
• TCD … No utiliza
• FID … H2、Ar
• ECD … N2(En caso de columnas empacadas, el gas de
arrastre N2. En de columna capilar, N2 es utilizado como gas
makeup)
• FTD … H2 、Ar
• FPD … H2 、Ar
• SID … Ar
 DETECTORES
Detector Compostos Detectábles Cantidad minima
detectáble
Detectores universales

Thermal Conductivity Todos los compuestos excepto gas de arraste 10ppm

Detector TCD (10ng)
Flame Ionization Compuestos Orgánicos 0.1ppm
Detector FID (0.1ng)
Detectores selectivos

Electron Capture Compuestos organo halogenados 0.1ppb

Detector ECD Compuestos organometálicos (0.1pg)
Flame Thermionic Compuestos organo nitrogenados 1ppb(1pg)
Detector FTD Compuestos fosforados: orgánicos e inorgánicos 0.1ppb(0.1pg)
Flame Photometric Compuestos sulfurados: orgánicos e inorgánicos 10ppb
Detector FPD Compuestos fosforados: orgánicos e inorgánicos (10pg)
Compuestos estanñosos: orgánicos e
inorgánicos
Surface Ionization Compuestos amina terciária 0.1ppb(0.1pg)
Detector SID Compuestos poliaromáticos 1ppb(1pg)

＊Cantidad mínima detectable del patrón. Puede cambiar con la

estructura de los compuestos en condiciones analíticas.
 TCD (DETECTOR DE CONDUCTIVIDAD
TÉRMICA)
• Es posible detectar todos los compuestos excepto el gas de arrastre
• Es utilizado principalmente helio como gas de arrastre
(Pero, cuando se analiza helio e H2, N2 e Ar son utilizados) →
Constante de Conductividad Térmica（10-6cal/sec・cm・ ℃)
He：408 H2：547 （Muy alta）
N2：73 Ar：52 O2：76 H2O：60 Etano:77
Metanol：52 Acetona：40 Cloroformo：24 …
• Principales ejemplo de aplicación
Análisis de Gases
Análisis de compuestos indetectables por FID, como agua,
formaldehído y ácido fórmico.
FID (DETECTOR POR IONIZACIÓN DE
LLAMA)
• Responde a casi todos los compuestos orgánicos (que
contiene carbono)
<excepción>
No hay respuesta para C del grupo carbonilo o carboxilo (C=O).
(CO, CO2, HCHO, HCOOH, etc.)
HCHO (Formaldehído) CH3CHO(Acetaldehído)

H-C-H CH3 - C - H
O Sim O Respuesta
respuesta

• Principales ejemplos de aplicación

Análisis de compuestos orgánicos
FID (DETECTOR POR IONIZACIÓN DE
LLAMA)
Compuestos orgánicos son
Procesamiento de quemados en la llama de
datos hidrogeno formándose iones.

Colector Oxidación
CH CHO+ ＋ e-
(O)
Llama
Oxidación
CN NO+ ＋CO＋ e-
Alto 2(O)
voltaje

Aire Genera señal eléctrica

Aguja de
Cuarzo Hidrogeno gas cuando los iones son
(nozzle) Makeup） colectados

Salida de la
columna 49
FTD (DETECTOR TERMOIÓNICO DE
LLAMA)
NPD (NITROGEN PHOSPHORUS DETECTOR)

• El detector posee una alta selectividad y alta sensibilidad para

compuestos orgánicos nitrogenados, y para compuestos orgánicos
e inorgánicos fosforados.
(En la selectividad de compuestos fosforados, FPD es mejor)

• No responde a compuestos inorgánicos nitrogenados

• Principales ejemplos de aplicación

Análisis farmacéuticos, pesticidas órgano nitrogenados y órgano
fosforados

50
ECD (DETECTOR POR CAPTURA
DE ELECTRONES)

• Este detector puso alta selectividad y alta sensibilidad a los

compuestos eletrofílicos. (compuestos orgánicos
halogenados, órgano metálicos y dicetonas)
• Como el detector es equipado con radioisótopo, es necesario
obtener documentación de aprobación de uso/instalación.
• Principales ejemplos de aplicación
Análisis ambiental
Residuos de PCB, pesticidas clorados
VOC clorado en aguas residuales
Mercurio orgánico en el ambiente

51
 ECD (DETECTOR POR CAPTURA
DE ELECTRONES)
Procesamiento de datos
Colector
N2 usado como gas de arrastre (gas
makeup) es ionizado la emisión de
partículas β por el 63Ni.
Exaustación β rayo
N2 N2+ ＋ e-
Genera corriente eléctrica cuando electrones
son capturados por el colector (corriente inicial)

Si entran compuestos eletrofílicos :

PCB ＋ e- PCB-
63Ni Como PCB- es un compuesto bien mayor
fuente comparando con e-, demanda tiempo para
Gas Makeup radioativa alcanzar al colector  diminuye la corriente
10mCi eléctrica
Salida de la
columna 52
 FPD (DETECTOR FOTOMÉTRICO DE
LLAMA)

• Este detector puso alta selectividad y alta sensibilidad a los compuestos

fosforoso (P), sulfuroso (S) y orgánico estañazo
• Selectividad de detección es la mas alta pues detecta la luz
característica del elemento que emite luz en la llama del hidrogeno
• Principales ejemplos de aplicación
• Análisis de pesticidas órgano fosforados
Análisis del olor repugnante de azufre / análisis de aroma en alimentos
Análisis de estaño orgánico en los productos marinos

53
 FPD (DETECTOR FOTOMÉTRICO DE
LLAMA)

multiplicadora
Foto
Procesamiento de
datos. Data
processor

Ar
Tubo de Filtro
Cuarzo
Solamente la luz con longitud
de onda específico puede
pasar por el filtro
For S (azul) ･･･394nm
For P (amarillo) ･･･526nm
Hidrógeno
For Sn (naranja) ･･･610nm
（＋gas Makeup）
Combustión de compuestos S, P y
Sn, emite luz con la longitud de onda
inherentes. Dejando pasar esa luz
por el filtro, solamente o la longitud
de onda inherente alcanza al foto
multiplicador. La intensidad de la luz
amplificada es cambiada por la señal
eléctrica del foto multiplicador.

Salida da columna 54
SID (DETECTOR DE IONIZACIÓN DE
SUPERFICIE)

• Este detector coloco alta selectividad y alta sensibilidad para

compuestos poli aromáticos y aminas terciarias (Detección de
varios 100fgs es posible para amina trimetil)
• Principales ejemplos de aplicación
Trialquilamina (análisis de olor repugnante)
Análisis farmacéutica
Análisis de compuestos poli aromáticos.

55
 ESPECTROMETRÍA DE MASAS
(MSD)
• Mide la abundancia de iones producidos por
ruptura del compuesto en fragmentos con valores
de masa/carga (M/Z) característicos
 MSD-CARACTERÍSTICAS

• Alta sensibilidad
• Proporciona un espectro de masa de cada
compuesto
• Destructivo
• Ideal para el análisis de muestras con matrices
complejas
• Ideal para el análisis de trazas (ppb-ppt)
ESPECTROMETRÍA DE MASAS (MSD)
 ESPECTROMETRÍA DE MASAS –
FUENTES DE IONIZACIÓN
• De impacto electrónico
• Fuente de electrones: filamento
incandescente, los electrones son
acelerados por una diferenciad e
potencial entre 5 y 70eV.
• Enfoque: campo magnético,
paralelo a la dirección de los
electrones, describiendo una
trayectoria helicoidal hasta llegar a
un ánodo en donde son recogidos.
• Ingreso de muestras: las moléculas
ingresan atravesando el haz de
electrones de alta energía
colisionando con ellos.

59
 ESPECTROMETRÍA DE MASAS –
FUENTES DE IONIZACIÓN
• El más probable
de éstos
mecanismos es la
formación de un
radical ABC+
• Los demás
mecanismos son
de 1000 a 10.000
veces menos
probables.

60
 ESPECTROMETRÍA DE MASAS –
FUENTES DE IONIZACIÓN
• La molécula, una vez ionizada, y fragmentada, se
utiliza una placa cargada positivamente para
repeler los iones fuera del haz de electrones,
utilizando un potencial eléctrico elevado entre 1 y
10kV que se establece entre El elproceso
final de
de la fuente de
producción de
iones y una placa situada detrás de ella. de la
iones dependerá
energía de los electrones
(70eV)
Esta energía es muy superior
a la de la ionización de la
molécula, por lo tanto se
formaran moléculas

61
 ESPECTROMETRÍA DE MASAS – FUENTES DE
IONIZACIÓN
• Impacto electrónico Problemas:
• Dependiendo de la naturaleza de la molécula, algunos iones serán más estables que otros,
existiendo algunos casos en donde el ion molecular sufra muy poca descomposición, mientras que
en otros casos la importancia de los procesos secundarios será tan grande que apenas quedará ion
molecular.
• Dificultad para la identificación de la molécula.
 ESPECTROMETRÍA DE MASAS –
FUENTES DE IONIZACIÓN
• Ionización Química
• Como agente ionizante se utiliza un ion que transfiere su
carga a la molécula de nuestra muestra por medio de
una reacción biomolecular.
• La fuente de iones en este caso es igual a la de impacto
electrónico
• Se introduce metano en la fuente de iones siendo
ionizado por lo electrones.

Al ion originado se lo denomina ion cuasimolecular

(presenta una unidad más de masa que el ion molecular
original) y éste se origina casi sin exceso de energía interna
por lo que presentará tendencia a no descomponerse.

63
COMPARACIÓN DE DETECTORES
 VENTAJAS DE LA
CROMATOGRAFIA GASEOSA

• Análisis rápido, generalmente minutos

• Eficiente, provee alta resolución
• Sensible, detecta fácilmente concentraciones de
ppm a ppb
• Análisis cuantitativo con buena exactitud, valores
de RSD de 1-5%
• Requiere pequeña cantidad de muestras,
generalmente µL
• Barato
 DESVENTAJAS DE LA
CROMATOGRAFIA GASEOSA

• Limitado a muestras volátiles, o derivatizables

• No es adecuado para muestras termolábiles
• Requiere espectroscopia, generalmente
espectrometría de masas, para confirmar la
identidad de los picos
 APLICACIONES
• Análisis de alimentos: Análisis de Triglicéridos
 APLICACIONES
• Análisis de alimentos: Análisis de Etilenglicol en
vinos
 APLICACIONES
• Análisis de alimentos: Análisis de Residuos de
Pesticidas
 APLICACIONES
• Análisis Industrial: Análisis de Gasolina
 GAS MAKEUP PARA DETECTORES GC

• Volumen de detectores comunes son grandes

• Cuando se usa columna capilar, flujo adicional de
gas, el makeup gas, es normalmente requerido
• Previene dispersión de zonas cromatograficas en el
detector (deterioración de separación)

71
CROMATOGRAMA

72
 CROMATOGRAMA
Definiciones:
Determina la
identidad del
componente tR : Tiempo de retención
Tiempo en que el analito permanece
tR dentro de la columna cromatográfica,
siendo medido desde el momento de la
Pico
introducción de la muestra en el sistema
Señal

hasta el momento del punto máximo de

A la señal del pico.
to

to : Tiempo muerto
Tiempo necesario para elusión de analitos
Tiempo
Proporcional a no retenidos en la columna.
la
cuantidad de A : Área
analito 73
 CROMATOGRAMA

Picos

Línea de Base

Tiempo de Retención
4.014 5.180
Punto de inyección min. min.
de la muestra

74
PICOS CON FORMATOS RUINS
Pico con cola
Cuando los componentes son adsorbidos en el
glass insert o en la columna.
Cuando los componentes polares son analizados
con una columna de fase líquida apolar (o inverso),
puede aparecer cola en muchos casos.

Cola frontal
Cuando la columna es sobrecargada con los
componentes de la muestra.
Cuando la temperatura de la columna es muy
baja.
Cuando la temperatura del inyector es baja

75
 LONGITUD DEL PICO

Pico corto
Columna capilar：
Generalmente, el pico es corto
Columna empacada：
En un análisis isotérmico, el pico que
eluye primero queda mas corto.

Pico largo
Packed Column：
En un análisis isotérmica, el pico
que eluye después queda mas
largo.

76
DERIVA DA LÍNEA DE BASE
Deriva En un análisis con temperatura programada, debido al
aumento del vapor por el sangrado de la columna, la
línea de base puede subir.

77
UNIDAD（PESO/VOLUMEN)

Volumen
Peso mL = 10-3L
g μL = 10-6L
mg = 10-3g nL = 10-9L
μg = 10-6g
ng = 10-9g
pg = 10-12g
fg = 10-15g Cuando el peso específico
es 1
1mL = 1g
1μL = 1mg
1nL = 1μg

78
 UNIDAD （CONCENTRACIÓN）

Concentración 1ppm
En caso de muestras líquidas
ppm = 10-6 1μg / g = 1 ppm (w/w)
（millón) 1nL / mL = 1 ppm (v/v) ［1μg / mL
ppb = 10-9 ≒ 1 ppm (w/v)]
（billón) En caso de muestras gaseosas
ppt = 10-12 1μL /L = 1 ppm (v/v)
（trillón)

79
 APLICACIONES DE GC
• Seleccionando la configuración para el
análisis
• Análisis de la muestra
• Análisis de datos
• Visión general de las técnicas de
muestreo en GC

80
SELECCIONANDO LA CONFIGURACIÓN

• Consideraciones de los propósitos de análisis de la

muestra
• Seleccionando la columna para GC
• Seleccionando el detector

81
 CONSIDERACIONES DE LOS
PROPÓSITOS DE ANÁLISIS DE LA
MUESTRA
• Compuestos de interés
• Volatilidad
• Estabilidad térmica

• Condición de la muestra (matriz)

• Gas
• Líquido
• Sólido
• Fuente biológica
• Ambiental

• Propósito del Análisis

• Cualitativa
• Peso molecular
• Sensibilidad de detección

82
SELECCIONANDO COLUMNA PARA GC

• Empacada o capilar?
• Que fase estacionaria?
• Que espesor del film de la fase
estacionaria?
• Diámetro interno de la columna?
• Longitud de la columna?

83
COLUMNA CAPILAR O EMPACADA?

• Consideraciones generales: Resolución

• Columna empacada: resolución baja, número

pequeño de componentes

• Columna capilar: alta resolución, número grande

de componentes

baja alta

84
QUE TIPO DE FASE ESTACIONARIA?

• Cromatografía Gas-Líquido:
• Polaridad de los analitos y de la fase estacionaria
• Para compuestos con polaridad similar
• Solutos con polaridad similar a la polaridad de la fase
estacionaria son más retenidos (“semejante atrae a lo
semejante”)
• En otras palabras, compuestos polares son mucho más
retenidos por la fase estacionaria polar de los que son menos
polar.

• Polaridad de la fase estacionaria es determinada por la

polaridad de los grupos funcionales del material de la fase
estacionaria

85
 POLARIDAD

• Técnicamente, polaridad se refiere a la distribución

de electrones en la molécula
• Moléculas apolares poseen distribución igual o casi de
electrones

CH3-CH2-CH2-CH2-CH2-CH3

• Moléculas polares poseen distribución de electrones

desiguales; cuando mas desigual fuera, mas polar será la
molécula

CH3–OH

86
 ESPESOR DEL FILM DE LA FASE
ESTACIONARIA
• Influencia directamente en la retención de la
columna
• Cuanto mas el film fuere grueso, retiene mas analitos y vice-
versa
• Ejemplos:
• Compuestos muy volátiles requiere fase estacionaria con
mas espesor
• Compuestos con alto punto de ebullición requiere fase
estacionaria mas fina df = espesor de la fase estacionaria
= 0.1 ~ 5 micrón

87
DIÁMETRO INTERNO DE LA COLUMNA
• Consideraciones:
• Concentración de la muestra vs. capacidad de la muestra
(cantidad máxima de muestra que puede ser cargada dentro de
la columna sin causar distorsión del pico)

• Capacidad aproximada de la muestra en la columna

• 0.25 mm i.d. : 50-100 ng por compuesto
• 0.32 mm i.d. : 400-500 ng por compuesto
• 0.53 mm i.d. : 1000-2000 ng por compuesto

• Instrumentación, ej., limitación de la presión en la entrada de la

columna, limitación de tasa de flujo da columna
• Por ej.: Aplicaciones en GC/MS se utiliza en general columnas
de 0.25mm a 0.32 debido a la limitación de la tasa de flujo de
la columna

88
 LONGITUD DE LA COLUMNA

• Consideraciones:
• Poder de resolución aumenta con columnas largas
• Tiempo de análisis aumenta con columnas largas
• Temperatura de la columna durante el análisis
• Isotérmica: tiempo de retención aumenta (como tiempo de
análisis) mas que el aumento en la resolución
• Programa de temperatura: tiempo de retención es más
dependiente con la temperatura
• Costo aumenta con columnas más largas

89
 APLICACIONES DE GC
• Seleccionando la configuración para el
análisis
• Análisis de la muestra
• Análisis de los datos
• Visión general de las técnicas de
muestreo en GC

90
PROCESO BÁSICO DE ANÁLISIS EN GC

1. Configuración del Instrumento

2. Ajuste de los parámetros de operación del instrumento

3. Análisis de la muestra patrón

4. Crear (compound table) y ajustar parámetros cuantitativos

5. Análisis de la muestra patrón

6. Crear curva de calibración

7. Análisis de muestras desconocidas

8. Cálculo de la concentración

91
CONFIGURACIÓN DEL INSTRUMENTO

• Preparar inyector
• Instalar columna
• Conectar el instrumento
• Estabilizar la temperatura
• Configuración del Sistema (System Configuration)

92
 MÉTODO PARA GC
(PARÁMETROS DEL INSTRUMENTO)

Parámetros del Instrumento Parámetros para Procesamiento

• Temperatura del inyector, Presión en
la entrada de la columna o flujo del
gas de arrastre /velocidad lineal,
relación split, programa de
temperatura del horno de la columna,
temperatura del detector, etc.
de Datos
• Tabla de Compuestos
• Parámetros de integración de los
picos
• Curvas de calibración, etc.

Método
Desenvolvimiento del método para separación de los compuestos de interés

93
PARÁMETROS CROMATOGRÁFICOS

• Temperatura del inyector y del detector

• Normalmente ajustado entre 250 – 280 ºC
• Modos de inyección
• Split : generalmente para muestras de concentración alta
• Splitless: generalmente para muestras de concentración
baja
• Programación de la temperatura de la columna
• Temperatura constante (isotérmico)
• Temperatura programada

94
 APLICACIONES DE GC
• Seleccionando la configuración para el
análisis
• Análisis de la muestra
• Análisis de datos
• Visión general de las técnicas de
muestreo en GC

95
ANÁLISIS BÁSICA DE DATOS EN GC
• Análisis Cualitativa
• Mismo compuestos tendrán el mismo
？
tiempo de retención en las condiciones ？
particulares de análisis. ？
？
• Comparar tiempos de retención de los ？
picos de la muestra con los del patrón.

• Análisis Cuantitativa
• Área del pico está relacionada a la
cantidad de compuestos inyectados
• Comparar el área del pico de la muestra
desconocida con la de la muestra patrón.

96
 ANÁLISIS CUALITATIVA

Cuando el análisis es realizada sobre las mismas condiciones

analíticas, el mismo compuesto eluye al mismo tiempo. (Tiempo
de retención es igual)

Muestra
desconocida

Muestra patrón Componente A Componente B

(solución mezcla de
componentes A y B)

Inyección de la
muestra

Como el tiempo de retención es la única información

cualitativa, es necesario la muestra patrón en GC.
97
 ANÁLISIS CUANTITATIVA
El área del pico (altura) del componente es proporcional a la
cantidad de componente que se ha detectado.

Conc.
Componente A (ppm)
Muestra
100
desconocida 1μL

Área del pico ： 700 70

Muestra patrón
1μL (Componente A Componente A
100ppm)
700 1000
Área do
Área del pico： 1000 pico

La muestra patrón es necesaria también para el

análisis cuantitativo.
98
 QUÉ ES LA CUANTIFICACIÓN?
• Determinación de la concentración individual de los compuestos a
ser separados

• En GC, el objetivo es lograr la separación completa de los

compuestos para que los compuestos detectados sean puros y con
eso puedan ser determinadas sus concentraciones con exactitud.

• Principales métodos para cuantificación.

• Método de porcentaje de área (Normalización)
• Método de normalización de área corregida
• Método de calibración absoluta (patrón externo)
• Método de patrón interno

99
 CALIBRACIÓN
• Medición de una mezcla de patrones
• Generación de curva que muestra la relación entre
la concentración y el área del pico (o altura del
pico) para cada compuesto (curva de calibración)
Y
(Área)
Y = (constante) . X

X (Concentración)

100
 MÉTODO DE NORMALIZACIÓN
• Determinar la composición relativa de la muestra
• Contenido del compuesto en una muestra (C) :
Ci = Ai/AT x 100%
• Ai = Área del pico del compuesto en el cromatograma
• AT = Área total de los picos en el cromatograma

• Atención: 10000 6000 4000

• Asumiendo que la respuesta del detector sea la misma para
diferentes compuestos
• Asumiendo que los compuestos
A B deCla muestra inyectada sean todos
detectados y produzcan picos
• Aplicables para detector TCD

101
MÉTODO DE NORMALIZACIÓN DE ÁREA
CORREGIDA
• Determinar la composición relativa de la muestra
• Ajuste (corrección) es realizado llevándose en cuenta la diferencia
de la respuesta del detector para diferentes compuestos
• La muestra que contienen compuestos con concentraciones
conocidas son analizados primero.

50% 30% 20%

A B C
Área 5000 6000 3200

102
 MÉTODO DE PATRÓN EXTERNO

• Determinar las concentraciones absolutas de los componentes de la

muestra
• Implica:
• Medición de la mezcla de patrones con concentraciones
conocidas
• Generación de la curva de calibración de patrones externos (que
muestra relación entre concentración absoluta/cantidad de los
componentes en su área/altura del pico)
• Medición de la muestra con concentraciones desconocidas de
sus componentes
• Cálculo de las concentraciones de los componentes de las
áreas/alturas de los picos

103
 MÉTODO DE PATRÓN EXTERNO

Y Patrón Y = (constante) . X
(Área)
Área
RF =
Muestra Conc.

X (Concentración)
• Patrón y muestra deben ser analizados sobre las mismas condiciones
porque el área y la altura del pico son dependientes de las
condiciones analíticas
• Importante: volumen de la muestra inyectada debe ser consistente

104
 MÉTODO DE PATRÓN INTERNO

• Consiste en adicionar una cantidad conocida de

una substancia (patrón interno) en la muestra a ser
analizada y relacionar las dos áreas obtenidas.

• El patrón interno debe ser similar a las substancias a

ser cuantificada y no debe contener la muestra.

105
 PATRÓN INTERNO
Relación entre las áreas del compuesto de interés

Patrón Y = (constante) . X
Ai/AIS
RF =
patrón interno (Ai/AIS)

Muestra Ci/CIS

Relación de la concentración del compuesto de interés y el patrón interno

(Ci/CIS)
y el

106
 PATRÓN ( STANDARD) PARA
CALIBRACIÓN - MÉTODO DE PATRÓN
EXTERNO
Solución madre:
Compuestos de interés +
Solvente

CAL 1 CAL 2 CAL 3 CAL 4 CAL 5

Aumento de la concentración de los compuestos
a analizar

107
 PATRÓN PARA CALIBRACIÓN -
MÉTODO DE PATRÓN (STANDARD)
INTERNO
Solución madre: Solución del
Standard Interno
Analito + Solvente (Internal standard
(I.S.))

CAL 1 CAL 2 CAL 3 CAL 4 CAL 5

Aumento de la concentración del compuesto a analizar
Concentración del I.S constante

108
 APLICACIONES DE GC
• Seleccionando la configuración para el
análisis
• Análisis de la muestra
• Análisis de datos
• Visión general de las técnicas de
muestreo en GC

109
TÉCNICAS DE INTRODUCCIÓN DE LA
MUESTRA AL GC

• Inyección Líquida
• Headspace (HS)
• Microextracción en fase sólida (SPME)
• Pirolisis
• Deserción térmica (TD)

110
 INYECCIÓN LÍQUIDA

• Mayoría de las muestras introducidas en el GC/MS

son líquidas

• Microjeringas es normalmente utilizada para

inyección de muestras líquidas
• Capacidad de la jeringa: normalmente 10 microlitros
• Formato da la aguja:

111
 HEADSPACE (HS)
• Extracción de compuestos orgánicos volátiles y semi-
volátiles presentes en la matriz líquida o sólida.
• Por ej.:. VOCs en el agua, solventes residuales en
materiales de embalaje, fragancias en alimentos, etc..
• Como funciona:

Equilibrio
Incubación

3. Un volumen fijo de vapor

1. Incubación de la muestra
es introducido en el GC
2. Equilibrio termodinámico.
Concentración de los analitos en la
fase vapor es representativo aquel
presente en la muestra original
112
MICRO EXTRACCIÓN EN FASE SÓLIDA
(SPME)
• Extracción de compuestos orgánicos volátiles y
semi-volátiles de la matriz sólida o líquida, por ej.
Residuos de pesticidas en agua, compuestos de
aroma & fragancia en alimentos, materiales
residuales de explosivos, etc..

113
 MUESTREO POR SPME Desorción

Adsorción

Analitos son adsorbidos en Analitos son térmicamente

Fibra de sílica fundida
revestida con material
adsortivo y expuesta con la
muestra en un vial sellado.
el material de revestimiento desorvidos de la fibra y
de la fibra, tanto de la entra en el GC
solución como del
headspace.
114
 INYECCIÓN AUTOMÁTICA DE LA
MUESTRA
• Shimadzu Auto-
inyector / Auto-
muestreador:
• AOC-20i e AOC-20s
 Inyección de muestras
líquidas

• AOC-5000
 Inyección Líquida
 Inyección/muestreado
por Headspace
 Inyección/muestreado
de SPME

115
 PIROLISIS
• Para análisis de muestras que no pueden ser
vaporizados por el inyector de GC, normalmente
polímeros

• Como funciona:
• La muestra es descompuesta por el calentamiento
(pirolizado)
• Productos de la descomposición son analizados por el GC

116
 DESORCIÓN TÉRMICA
• Extracción de compuestos orgánicos volátiles de las matrices
sólidas o de aire. Por ej.: VOCs en el aire del un ambiente
cerrado, componentes de sabor y fragancia en condimentos,
solventes residuales en embalajes de alimento, etc..

117
MANTENIMIENTO BÁSICO &
TROUBLESHOOTING DE GC

• Mantenimiento del inyector

• Mantenimiento de la columna
• Problemas comunes con GC

118
 MEDIDAS PREVENTIVAS
• Varios motivos pueden ser causales para un
problema/síntoma particular

• Siempre use el equipamiento apropiadamente

• Realice el mantenimiento necesario
• Verifique constantemente las condiciones
generales de operación del equipamiento
• Mantenga un libro de registro
• Inyecte la cantidad apropiada de la muestra

119
 MANTENGA UN LIBRO DE REGISTRO
(LOG BOOK)

• Reserve un libro por sistema

• Deje cerca del sistema
• Describa en la tapa:
• Configuración del Instrumento, ID, Número de Serie, etc.
• Registre todas las actividades
• ej. Datos, de mantenimiento, cambio del cilindro, instalación, número de
inyecciones, nombre del operador, etc.
• Problemas, sospechas o algo diferente
• Soluciones para los problemas
• Llamada al servicio técnico y resultados

120
 MANTENIMIENTO DEL
CROMATÓGRAFO DE GASES

• Inyector
• Columna
• Controladores de Flujo
• Abastecimiento de Gas

121
 MANTENIMIENTO DEL INYECTOR
• Verifique o sustituya si es necesario:
• Septum – use de alto desempeño y vea el limite de la temperatura
• Glass insert – use el apropiado
• O-ring para glass insert – sustituya cuando cambie el glass insert
• Sustituya:
• Cuando este contaminado con porciones no-volátiles de la muestra
• Cuando este dañado.
• Medidas preventivas:
• Ejecute cleanup de la muestra para remover componentes no
volátiles
• Minimice “backflash” usando pequeño volumen de inyección posible
• NOTA: Ejecute el mantenimiento cuando INJ < 50 ºC

122
 LIMPIANDO EL GLASS INSERT

• Enjuague con solventes (metanol, acetona o

hexano) si no tuviere depósitos visibles

• Si tuviere depósitos visibles:

• Colocar en solvente y usar ultrasonido.
• Usar cepillo blando (que no arañe la superficie)
• Usar ácido para lavado.

• Inertizar glass insert si la superficie estuviere arañada

o lavada con ácido

123
TORNANDO UN GLASS INSERT INERTE

• Agente silanizante: 5% Dimethyldichlorsilan (DMDCS) en tolueno

• Puede ser adquirido por Supelco (cat. no. 33065-U)
• Sumerga el liner en la solución DMDCS y deje por una noche. La lana
de de vidrio también puede ser inertizada separada del liner.
• 1. Purgar el liner con tolueno
• 2. Purgar con etanol absoluto
• 3. Seque el liner con gas nitrógeno (introduzca el flujo para dentro y
fuera del liner)
• Acondicionar el liner dentro del inyector a 300°C como mínimo por
2-3 horas o por una noche.
• Después secar el liner, colocar dentro del inyector lo más rápido
posible.

124
MANTENIMIENTO DE LA COLUMNA

• Cambio de columna
• Uso de la columna
• Acondicionamiento de la columna
• Almacenamiento de la columna

125
INSTALACIÓN DE LA COLUMNA (1)

• Verifique visualmente por cualquier contaminación o

quebradura.
• Instale la columna en el lado de inyección
1. Instale el nut apropiado en la columna
2. Instale vespel ferrula de tamaño y tipo apropiado para la columna
3. ‘Marcar’ la ferrula de grafito (graphite ferrule)
4. Corte la punta de la columna
5. Mida la longitud de la columna para posicionar correctamente al
anillo con el gabarito obtenido.
6. Limpie la columna con paño libre de suciedades y acetona
7. Encaje en lado de inyección

• Verifique el flujo de gas de arrastre en la columna (“Tes de

burbuja”)

126
INSTALACIÓN DE LA COLUMNA (2)

• Corte la punta de la columna capilar con

herramienta apropiada
• Corte en perpendicular para mejores resultados
cromatográficos
• Normalmente corte de 1 a 2 cm. es lo adecuado.
• Inspeccione el corte con una lupa.

• Evite arañar la columna

127
 USO DE LA COLUMNA

• Use columna dentro del rango de temperatura de

operación especificada
• Verifique el estado general de la columna
• Verifique la información sobre a columna

• Limite inferior de temperatura

• Limite superior de temperatura

• Use guarda columna cuando debe analizar

muestra que tiende a deteriorar la columna
rápidamente

128
 MUESTRAS QUE DETERIORAN
RÁPIDAMENTE LAS COLUMNAS DE GC

• Fluidos biológicos
• Tejidos biológico
• Suelos
• Lana
• Agua de desechos

• Porque Contienen alto nivel de residuos no volátiles

129
 ACONDICIONAMIENTO DE LA
COLUMNA
• Tratamiento para remover impurezas de la fase estacionaria
de la columna
• Previene líneas de base instables y la contaminación del
detector
• Conecte la columna con el inyector mas no con el detector
• Con la columna a temperatura ambiente, deje fluir el gas de
arrastre a través de la columna por 15 a 20 minutos para
remover e aire
• Aumente la temperatura de la columna a 10 ºC/min. hasta la
temperatura máxima a que la fase estacionaria puede ser
utilizada
• Deje la columna a la temperatura elevada por 2 horas (para
columnas capilares) y varias horas para columnas
empacadas

130
 OTRAS FORMAS DE REMEDIAR LA
CONTAMINACIÓN EN LA COLUMNA

• Cuando es contaminado por porciones no volátiles

de la muestra:
• Corte las puntas de la columna (si es necesario 0.5m a 1m
del lado del inyector
• Substituya por uno nuevo

131
ALMACENAMIENTO DE LA COLUMNA

• Cierre la columna del aire (oxígeno y humedad)

cuando no está en uso
• Para tapar las puntas de la columna se puede aprovechar
el septum usado o tapas especiales.

• Registre el uso de la columna (temperatura más

alta utilizada, muestras analizadas utilizando dicha
columna)

132
CONTROLADOR DE FLUJO DE GAS

• Mantenimiento de rutina:
• Substituya el purificador de gas (gas traps) para el split y
purgue las líneas de flujo a cada 6 meses o conforme a la
necesidad dependiendo de:
• Número de inyecciones
• Muestra
• Ajuste de split ratio

133
 MANTENIMIENTO DEL GAS DE
ARRASTRE
• Certifique la pureza del gas para:
• Minimizar interferencia/background
• Asegure el abastecimiento del gas para prevenir deterioros de la
columna
• Como:
• Use gas de arrastre con pureza 99.999% o mejor
• Prevenga perdidas de aire para dentro del gas de arrastre
• Use purificador de gas de arrastre
• Cambie el purificador de gas de arrastre conforme a la
necesidad
• Verifique la presión del gas de arrastre diariamente
• Verifique los reguladores de gas cada 3 meses

134
 ESTRATEGIA GENERAL PARA
TROUBLESHOOTING
• Examine los síntomas
• Considere las posibilidades
• Verifique primero las partes obvias como:
• Abastecimiento de gas – presión correcta, gas correcto
• Flujo de gas – velocidad lineal de gas de arrastre, flujo split, etc.
• Temperaturas
• Pérdidas en los nut, septum, líneas de gas
• Detector – está encendido?
• Sistema de datos – canal correcto?
• etc.
• Verifique cualquier cambio que hubiere en el sistema
• Use UNA medida correctiva por vez
• Haga el ajuste y reparos
• Testee.(Pruebe)

135
 HERRAMIENTAS ÚTILES PARA
TROUBLESHOOTING
• Columna de referencia (duplicada)
• Nueva jeringa
• Nuevo septum, ferrule, glass inserts
• Detector de perdida de gas.
• Medidor de flujo de gas
• Termómetro
• Libro de registro
• Manual del instrumento

136
PROBLEMAS MÁS COMUNES EN GC
• Pico fantasma
• Deriva de la línea de base
• Efecto cola en el pico
• Ausencia de picos
• Cambio del tiempo de retención

137
 QUÉ ES UN PICO FANTASMA?

• Un pico en el cromatograma
• Identidad desconocida
• Apariencia inconsistente entre las corridas

• Principales causas posibles:

• Acondicionamiento insuficiente de la columna; algunas
impurezas en la columna obstruyen durante el análisis
• Contaminación en el inyector; con la contaminación en
el inyector son vaporizadas los contaminantes y entran en
la columna
• Contaminantes en el gas de arrastre o de las tuberías del
gas de arrastre

138
 COMO VERIFICAR LA CAUSA DEL PICO
FANTASMA
• Acondicionamiento insuficiente de la columna
• El pico fantasma aparece solamente una vez
• Repita las inyecciones de la misma muestra y verifique la
repetibilidad

• Contaminación en el inyector
• El pico fantasma aparece consistentemente
• Inyecte una pequeña cantidad de solvente y verifique los picos
que no sean del solvente
• Con inyecciones repetidas de la muestra el tamaño del pico
fantasma diminuye

• Contaminante en el gas de arrastre o de la tuberías del gas de

arrastre
• Aparece más como nivel alto de ruido, que como pico.

139
 ACCIONES CORRECTIVAS PARA PICO
FANTASMA
• Acondicionamiento insuficiente de la columna
• Ejecute condicionamiento suficiente de la columna (hasta la
temperatura máxima del análisis)

• Contaminación en el inyector
• Si el tamaño del pico fantasma no disminuye significantemente,
aumente la temperatura del inyector, e inyecte el solvente
repetidamente hasta que desaparezca el pico fantasma
• Cambie el glass insert
• Cambie el septum

• Contaminación del gas de arrastre o de la tubulación de gas

• Instale filtro de partículas molecular en la línea de gas de
arrastre
• Cambie las tuberías

140
 DERIVA EN LA LÍNEA DE BASE

• Movimiento ascendente e/o descendente de la

línea de base del cromatograma
• No confundir con sangrado de la columna
• Causas posibles:
• Contaminación de la columna por residuos semi-volátiles
• Sangrado excesivo de la columna
• Detector no fue estabilizado

141
 COMO VERIFICAR LAS CAUSA DE
DERIVA DE LÍNEA DE BASE
• Contaminación de la Columna
• Mezclas para Test:
• Alcoholes exhibe efecto de cola en el pico si la columna estuviera
contaminada
• Hidrocarbonatos no son afectados por la contaminación al menos que
sea bien severo
• Corte 0.5 m – 1 m del lado del inyector y pruebe
• Sangrado excesivo de la columna
• Ejecute el programa de temperatura sin inyecciones (corrida de blanco)
50ºC  limite de temperatura isotérmico a 10 a 20 ºC/min., mantenga la
temperatura final por 10 min.
• Perfil :
• Sin un pequeño aumento de la Línea de base en las regiones de
temperaturas mas bajas
• Aumento agudo a 30-40C debajo del limite de temperatura superior
• Línea de base horizontal en la región isotérmica
• Ausencia de picos

142
 ACCIONES CORRECTIVAS PARA
DERIVA DE LÍNEA DE BASE
• Contaminación de la Columna
• Corte 0.5 m – 1 m la columna del lado del inyector
• Lave la columna con un volumen grande de solventes (NO para
fase estacionaria no-activada)
• NO es lo mismo que inyectar volumen grande de solvente
• Condicione la columna (con temperaturas altas) por cerca de
dos horas para columnas capilares (NO MAS)

• Sangrado excesivo de la columna

• Substituya columna si el sangrado fuere inaceptable
• Prevenga exponer al oxigeno, a ácidos minerales y bases durante
el análisis o almacenamiento
• Prevenga exponer por mucho tiempo la columna capilar a altas
temperaturas

143
 EFECTO COLA

normal Con cola

• Pico con cola es causado por el hecho de que la molécula se
mueve mas a lo largo de la columna que la mayoría de los
compuestos
• Principales causas posibles:
• Contaminación de la columna y del inyector por residuos no
volátiles
• Volúmenes muertos debido a instalación incorrecta do glass insert
o de la columna
• Compuestos activos que están interviniendo con sitios activos en
el inyector o la columna
• Fase estacionaria no muy adecuada para la muestra
• Coelucion de dos picos

144
 CAUSAS DE PICO CON COLA

• Contaminación de la columna y el inyector

• Vea el Test para Contaminación en Deriva de Línea de Base

• Volúmenes muertos
• Pico con cola es mas severo para los picos que eluyen primero

• Actividad de compuestos
• Normalmente la cola es mas severo en los picos que eluyen
después

• Fase estacionaria no muy adecuada para la muestra

• Cambie la columna con fase estacionaria de polaridad diferente

145
ACCIONES CORRECTIVAS PARA PICO
CON COLA
• Contaminación de la columna o inyector
• Para columna, vea presentación anterior
• Para inyector, substituya por un glass insert nuevo,
silanizado
• Volumen muerto
• Reinstale glass insert y columna con mas cuidado
• Actividad del compuesto
• Use glass insert inerte/silanizado
• Use columna limpia

146
 AUSENCIA DE PICOS

• Principales causas posibles:

• Salida del detector no está conectada apropiadamente al
sistema de datos
• Gas de arrastre con flujo muy bajo o sin a través de la
columna
• Jeringa trancada o sucia
• Si utiliza automuestreador
• Volumen de la muestra insuficiente en el vial
• Posición errada de vial
• Inyección en el inyector errado
• Columna rota
• Columna instalada en el inyector o detector errado

147
PRUEBAS PARA CAUSA DE AUSENCIA
DE PICOS
• Verifique conexión del detector (al sistema GC) al sistema de datos
• Sin flujo en la columna
• Verificar si el flujo de la columna con la columna instalada en el
inyector y no al detector, coloque la otra punta en un solvente
(hexano, acetona). Si tuviere flujo en la columna, va aparecer
burbujas
• Chequee si la columna no está quebrada
• Verifique el abastecimiento del gas de arrastre
• Verifique la jeringa
• Utilice la jeringa y observe si pincha el líquido
• Verifique con una jeringa nueva
• Automuestreador
• Verifique la posición del vial y el volumen de la muestra en el vial

148
PRUEBAS PARA CAUSA DE AUSENCIA
DE PICOS
• Inyector Errado
• Repita inyecciones tomando cuidado de inyectar en el inyector
configurado
• Columna quebrada ( rota)
• Verifique el flujo da columna
• Use el detector de gas
• Instalación incorrecta de la columna
• Verifique la instalación de la columna

149
ACCIONES CORRECTIVAS PARA AUSENCIA
DE PICOS

• Certifique el abastecimiento del gas de arrastre

• Localicé si hay daños en la columna y reconecte la
columna
• Limpie la jeringa o substituya por una nueva

150
CAMBIO EN EL TIEMPO DE RETENCIÓN

• Principales causas posibles

• Cambio en la velocidad lineal del gas de arrastre
• Cambio en las condiciones de temperatura de columna
• Perdida en el septum
• Cambio del solvente de la muestra

151
PRUEBAS PARA CAUSAS DE CAMBIO DE
TIEMPO DE RETENCIÓN

• Verifique los parámetros de velocidad lineal del gas

de arrastre y la temperatura de la columna en el
método

• Verifique el septum
• Chequear las especificaciones del septum en cuanto al
número máximo de inyecciones.
• Compare con el registro de número de inyecciones
después de la instalación del septum nuevo.

152
 COMO OBTENER AYUDA

• Literatura:
• Libros
• Artículos científicos (ej.: Analytical Chemistry, Journal of
Chromatography)
• Métodos Oficiales (ej.: EPA, USP, AOAC)
• Manual del Instrumento
• Guía técnica de los fabricantes de columnas
• Colegas
• Soporte Técnico

153
 REFERENCIA/BIBLIOGRAFIA

• Basic Relationships of Gas Chromatography, L.S. Ettre, J.V. Hinshaw

• A Practical Guide to the Care, Maintenance, and Troubleshooting of
Capillary Gas Chromatographic Systems, D.Rood
• Shimadzu GC System User’s Guides & Operation Guidebooks
• www.restekcorp.com (Restek Chromatography Products)
• www.sge.com (SGE Chromatography Products)

154