Pruebas de identificación bacteriana Identificación bacteriana

La identificación es un proceso por el cual debemos determinar a qué especie pertenece una determinada cepa bacteriana, mediante la comparación de una serie de características que pueden ser puestas en evidencia en el laboratorio y que han sido estudiadas para la gran mayoría de las especies importantes desde el punto de vista de la patología infecciosa humana. Cuanto más semejanza haya entre las características obtenidas en el laboratorio y las que habitualmente presenta una determinada especie, mayor será la probabilidad de que esa cepa problema pertenezca a dicha especie. Las características utilizadas en la identificación de cada grupo de microorganismos dependen de las posibilidades de cada laboratorio, fundamentalmente económicas y de cualificación del personal, así como de la epidemiología específica de la zona. Las características que se tienen en cuenta para lograr una correcta identificación son las siguientes: Características no bacterianas: ? Paciente: Edad Sexo Patología ? Muestra: Obtención Conservación Transporte

inclusive especie. agrupación y grupo taxonómico al que pertenece: Gram positivo o Gram negativo. Cada género. Identificación bacteriana es el ejercicio práctico en el que se ejercercen las pruebas de identificación bacteriana. por eso es conveniente realizar pruebas de identificacion. el determinar un diagnóstico y poder interpretar qué bacteria causó la molestia al paciente es aventurado. pues hay muchas bacterias que causan las mismas enfermedades. la reacción a la tinción de Gram. • Tinción de Ziehl Neelsen: Las bacterias Alcohol-Ácido resistentes (BAAR). secundarias y Complementarias. .Identificación bacteriana. agrupación. tiene diferentes reacciones cuando se les enfrentan diferentes reactivos. morfología colonial. tal vez y en un agar sangre muestre algo de crecimiento. son difíciles de cultivar. que son sumamente importantes para un buen diagnóstico de cualquier patología. reacciones metabólicas como producción de enzimas y reacciones de óxidofermentación. La identificación bacteriana primaria se basa en los siguientes puntos: • Tinción de Gram: Revela la forma de la bacteria. ya la bacteria aislada. por eso es útil esta tinción de identificación primaria. A estas pruebas se les ha como primarias. esto se hace a partir de un cultivo puro. propiedades. En la medicina general es común que llegue un paciente con síntomas de alguna infección bacteriana. con estas pruebas podremos decir casi con exactitud de que género y qué especie es esta bacteria. Pruebas Primarias Para la identificación de las bacterias en el laboratorio es importante conocer sus características morfológicas.

• Prueba de oxidasa: Básicamente es la detección de la enzima oxidasa. Excluyendo al género Streptococcus y algunos otros la mayoría de las bacterias aerobias y anaerobias facultativas tienen catalasa. La base de esta prueba es demostrar la presencia de la enzima catalasa. El sistema de citocromos está generalmente presente en organismos aeróbicos. La reacción de la oxidasa se debe a la presencia del sistema de citocromo-oxidasa. Un resultado positivo a la oxidasa consiste en una serie de reacciones en las cuales un componente autooxidable del sistema de citocromo es al final catalizado. colocando 2 o 3 gotas al cultivo. El resultado es positivo si en la colonia hay efervescencia. Escherichia coli. • Prueba de catalasa: La catalasa es una enzima que descompone al peróxido de hidrógeno en oxígeno y agua. Utilizando un tubo capilar con tetrametil-p-phenylendiamina al 1%. en menos de 10 segundos. indica según los ejemplos: Oxidasa (+): Pasteurella multocida Oxidasa (-): Escherichia coli .• Tinción de esporas: La espora es un mecanismo de defensa generalmente de los géneros Bacillus y Clostridium. muy útil en la identificación de bacterias Gram (-). se adiciona una pequeña cantidad a un cultivo bacteriano colocado sobre un papel filtro y obtenemos las siguientes reacciones: una reacción positiva (presencia de oxidasa) se indica por la apariencia de un color púrpura obscuro en el papel. Catalasa (-): Streptococcus spp. Ejemplos: Catalasa (+): Staphylococcus aureus. Pseudomonas sp. por la transferencia de un aceptor al estado terminal del sistema de transferencia de electrones. que consiste en una ausencia de color púrpura. esta enzima es similar a la estructura de la hemoglobina. la cual activa citocromos reducidos por oxígeno molecular. al contrario una reacción negativa.

En un tubo con agua peptonada al 1% tapado. obteniéndose: TUBO ABIERTO TUBO SELLADO INTEPRETACIÓ N Amarillo Verde Oxidación (aerobio) Amarillo (anaerobio facultativo) Amarillo Fermentación Verde (anaerobio estricto) Amarillo Fermentación . Se usa en dos tubos. se observará una burbuja en el tubo de Durham. contiene carbohidratos como: glucosa. Es un medio semisólido de color verde que se inocula por picadura.1. si produce gas. Se inoculan los dos tubos con la bacteria por picadura y se mantiene a 37°C por 24 horas. uno sin aceite y otro con acetie o vaselina sellándolo. como parte importante de su metabolismo. Se determina si la bacteria usa la glucosa produciendo ácido y/o gas a partir de dicho carbohidrato. se inocula la bacteria por agitación teniendo cuidado de no mover el tubo de Durham e incubándolo 24 horas y 37°C se obtienen los siguientes resultados. Si la bacteria usa la glucosa producirá ácido y/o gas.• Ácido de la Glucosa: La mayoría de las bacterias de interés médico usan la glucosa como fuente de carbono. lactosa. por lo tanto el agua peptonada se observará rosa. sacarosa o maltosa al 10%. • Prueba de O/F: para realizar esta prueba se usa el medio básico de Hugh y Leisfon con un pH de 7. Ejemplos: Ácido y gas a partir de la glucosa: Escherichia coli Negativo a producción de gas: Proteus stuartii. Como indicador de pH tiene Azul de bromotimol. y un tubo de Durham.

La base de esta prueba es determinar si la bacteria es móvil o inmóvil. los flagelos son encontrados principalmente en las formas bacilares y pueden presentarse en número y posición variados(monotricos. Especiales: Coagulasa. Algunas bacterias son móviles por presentar flagelo. La identificación se fundamenta en la comparación del microganismo que deseamos identificar con los microorganismos de identidad conocida. Ejemplos: Motilidad (+): como en Pseudomonas auruginosa.). Motilidad (-): como en Pasteurella multocida. Hialuronidasa y Acriflavina . Podremos observar si las bacterias tienen movimientos rectilíneos o curvos y en todas direcciones. LIA y SIM. Pruebas Secundarias. Estas pruebas se clasifican de la siguiente manera: • • • Simples: Citrato. Múltiples: TSI. ect. Malonato. Se coloca sobre un portaobjetos y se observa al microscopio. MR-VP. Nitrato y Leche Tornasol. La exactitud de la identificación depende de la eficacia del trabajo preparatorio así como su grado.Verde • Verde Negativo (NH3) Prueba de Motilidad: Llamada también de la gota suspendida. peritricos. Con un asa de inoculación se le coloca a un cubreobjetos un poco de muestra y se le agrega una gota de agua destilada.

Consiste en la determinación de las características fenotípicas y/o genotípicas y la comparación de estas características con los diferentes taxones de la clasificación considerada. La identificación de una bacteria es su asignación a un taxón según una clasificación dada. pero el más comúnmente utilizado es el Bergey's Manual of Determinative Bacteriology. A continuación se propone un esquema de trabajo para la identificación de .IDENTIFICACIÓN DE UNA CEPA BACTERIANA Existen diferentes sistemas de clasificación de bacterias. Las características a determinar y su número depende principalmente del tipo de bacteria y del fin que se persigue en la identificación.

somáticos (O) que corresponden al lipopolisacárido de la pared de los Gram negativos. y los antisueros se identifican con esas letras y el número o letra del . Las pruebas primarias son: Gram. quimioheterótrofos. Se determina así la forma y el Gram del microorganismo en estudio. esporas. morfología. 4) Realización de pruebas primarias: En la siguiente tabla. se utilizan un grupo de pruebas. Los antígenos bacterianos pueden ser capsulares. producción de coagulasa. modificada del Cowan & Steel's Manual of Identification of medical bacteria. 5) Realización de pruebas secundarias y terciarias a efectos de llegar a especie. grupo de géneros o en algún caso familia a la que pertenece un aislamiento. OF. fermentación de glucosa.una cepa bacteriana desde el punto de vista bioquímico (Biotipo): 1) Obtener un cultivo puro 2) Examen microscópico de células vivas y de frotis teñido por coloración Gram. producción de indol a partir de triptofano. o cuando las pruebas bioquímicas no son concluyentes. flagelares (H). fotoheterótrofos. oxidasa. También es importante determinar la agrupación y la presencia de esporas y otras características morfológicas de interés. de fenilalanina deaminasa. catalasa. con las cuales se puede determinar el género. se recurre al uso de antisueros específicos. 3) Determinar las características nutricionales (en general se desprenden de los métodos empleados en el aislamiento y cultivo anteriores).) Serotipo A los efectos de realizar identificaciones más rápidas. crecimiento en aerobiosis y anaerobiosisy movilidad. Estas dependerán del género o familia determinado. etc. (ej: producción de pigmentos. fotoautótrofos. quimioautótrofos. denominadas pruebas primarias.

coli.antígeno correspondiente. llamadas pruebas bioquímicas convencionales. Los ensayos bioquímicos tradicionalmente utilizados. Existen en el comercio antisueros para caracterización de: Salmonella. En una primera identificación se usan sueros polivalentes y para la caracterización serológica se usan sueros monovalentes dentro de cada tipo de antígeno. etc. Se puede expresar el nombre de una cepa de la siguiente manera: Yersinia género entercolítica especie 4 biotipo 03 serotipo ENSAYOS BIOQUIMICOS La identificación de un aislamiento bacteriano puede realizarse utilizando diferentes combinaciones de características y diferentes criterios en la evaluación de similitudes. E. Shigella. Fusobacterium. Haemophilus. porque proponen el mejor conjunto de pruebas bioquímicas para la identificación de un grupo bacteriano. También se pueden utilizar métodos de cromatografía gaseosa para identificar productos metabólicos. etc. porque simplifican la interpretación de . generalmente determinan la actividad de una vía metabólica (conjunto de reacciones químicas) a partir de un sustrato que se incorpora en un medio de cultivo y que la bacteria al crecer transforma o no. Existen diferentes sistemas que facilitan la realización de tales ensayos. en particular para la identificación de bacterias anaerobias no esporuladas como: Bacteroides.

son pruebas simples que se han desarrollado para demostrar en forma clara una determinada característica bioquímica como presencia o ausencia de una determinada actividad enzimática. comerciales. etc. grupo de enzimas o determinada vía metabólica.un resultado utilizando un valor numérico. ya sea por viraje de un indicador o por agregado de un reactivo revelador de la presencia del sustrato. .). Para llevarlas a cabo. etc. En todos los casos se emplean códigos numéricos para la interpretación de resultados. la realización de una prueba bioquímica implica: 1) Cultivar el microorganismo en un medio que contiene un determinado sustrato o inhibidor y luego de la incubación visualizar el crecimiento y la degradación de un sustrato. porque proveen los reactivos listos para su uso o porque son totalmente automatizables. Las pruebas o ensayos bioquímicos. revelador. No significan de ninguna manera un estudio profundo del metabolismo bacteriano. ya sea sustratos deshidratados. crecimiento a una determinada temperatura. tiras de papel de filtro impregnadas en reactivos o pequeños compartimentos con medios listos para sembrar. Por ejemplo se debe suplir con factores de crecimiento el medio de cultivo para estudiar la fermentación de distintos azúcares cuando se sabe que el microorganismo en estudio es exigente. etc.) que puede ser diferente aún para el mismo ensayo si se trata de diferentes microorganismos. A la determinación de la especie se puede llegar según diversos sistemas (manuales de identificación. crecimiento en presencia de inhibidores. a) Los comerciales utilizan modificaciones de las pruebas bioquímicas convencionales. o de algún producto de su degradación. se pueden utilizar diferentes sistemas de trabajo (medio de cultivo. indicador.

agrupadas según el tipo de ensayo y se denominan según su nombre corriente. 1) Enzimas vinculadas con la respiración a) b) catalasa 2) Descomposición de azúcares simples. fuerza iónica. de incubación) en un medio en que el microorganismo se desarrolla en forma óptima.2) Producción de ácido. atmósfera y temperatura adecuados. deben llevarse a cabo los correspondientes controles de calidad. ácidos orgánicos y otros 2.3) Detección de enzimas y vías metabólicas . sembrando en dicho medio una cepa positiva y otra negativa para ese test. se enumerarán a continuación solo las que se utilizan más frecuentemente. a pH. En todos los casos se debe tener un cultivo fresco (18-24 hrs. Si bien existen una gran variedad de pruebas bioquímicas empleadas con fines de identificación. Siempre que se prepara un nuevo lote de medio de cultivo para una prueba.2) Cultivar el microorganismo en un medio de propagación que contenga el sustrato de una enzima inducible y luego de la incubación demostrar la actividad enzimática. o ácido y gas Fermentación de carbohidratos 2.1) Requerimientos de oxígeno OF (óxido-fermentación) oxidasa Crecimiento en caldo tioglicolato 2.

G. (orto ß-D-galactopiranósico) Esculina e) Hipurato 3) Fuente única de carbono a) b) citrato malonato c) hipurato para coliformes 4) Utilización de compuestos nitrogenados 4.a) b) c) d) RM-VP (rojo de metilo nitro - Voges Proskauer) Gluconato O.2) Descomposición de carbohidratos aminoácidos y otros a) b) c) d) e) Urea 5) Ensayos combinados a) b) TSI LIA (Triple (Agar Azúcar Hierro Hierro) Lisina) Lisina.N.1) Reducción de nitrato a) b) denitrificación 4. indol H2S Fenilalanina arginina. ornitina asimilación c) Bilis esculina 6) Detección de exoenzimas .P.

a) b) c) d) e) f) acción de (hemolisinas) 7) Misceláneos a) b) c) producción de pigmentos 8) Test de crecimiento o inhibición a) b) c) Antibióticos proteasas. lecitinasa coagulasa amilasas celulasas desoxirribonucleasas microorganismos sobre la sangre KCN Bilis Temperatura NaCl .

TABLA MODIFICADA DE COWAN´S & STEEL PARA IDENTIFICACION DE BATERIAS HETERÓTROFAS tinción gram (cultivo fresco) forma agrupación crecimiento + aerobio crecimiento – anaerobio esporas movilidad – – + – – + + + – – – + + – – – + + – – – + + + + + – + – – – + + – + + + + – – – + + – + + + + – + + + + + + + coco coco coco coco racim racim caden tetrad os os as as bast bast Bast bast bast bast bast bast ón ón ón ón ón ón ón ón coco pare s + + + + + + + + – – – – – catalase + oxidase fermentació – n de – – + o + o –+ o – + o –+ o – +o– – + + + + + + + – + (o+ – – – + –) .

glucosa acido o a a – X X X X X X X X X X X X X X X X X X X O F F O acido+gas O/F Micrococcu s Staphyloco ccus Streptococc us Lactococcu s Enterococc us Leuconosto c Pediococcu s Aerococcus Lactobacillu s Clostridium Bacillus Alcaligenes Pseudomon as Enterobact erias Aeromonas Chromobac terium Neisseria .

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