Facultad de Ciencias Químicas

UNAN- León
Carrera de FARMACIA

CONTROL MICROBIOLÓGICO
DE MEDICAMENTOS
PLAN 2019

Lic. Fania Valesca Valladares Silva

 CONTENIDO:
ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO DE AGUA
PURIFICADA

Se puede definir el análisis

microbiológico como el conjunto de
operaciones encaminadas a determinar
los microorganismos presentes en una
muestra problema de AGUA.
TIPOS DE AGUA PARA USOS FARMACÉUTICOS
TRATAMIENTO DE AGUA
(SISTEMA DE AGUA)
EJEMPLO DEL SISTEMA DE
TRATAMIENTO DE AGUA
PURIFICADA
TOMA DE MUESTRA
La muestra de agua se recolecta en frascos estériles, el volumen debe
ser de 500 a 1000 mL, tratando que no quede espacio de aire.
En caso de agua clorada se debe agregar tiosulfato sódico al 3%
estéril, se agrega 0.3 mL/250 mL.
El análisis debe realizarse en un periodo no mayor de 6 h.
En circunstancias excepcionales, las muestras pueden conservarse a
una temperatura de 4°C ± 2°C durante un periodo máximo de 24 h
antes de su análisis.
Durante el muestreo se debe utilizar guantes y cubrebocas.
TOMA DE MUESTRA
(CONT)
Es importante que todas las muestras se identifiquen con los datos
completos en su etiqueta.

El frasco donde se colecta la muestra no se debe destapar sino hasta

el momento en el que se efectúe el muestreo, evitar que el cuello del
frasco se ponga en contacto con los dedos o cualquier otro material
contaminante.

Para la toma de muestra de un grifo, sanitizar y abrir completamente

dejando que el agua fluya de 2 a 3 minutos o el tiempo suficiente
para permitir la purga de la línea. Controlar el flujo de la llave para
que se pueda llenar el frasco sin salpicaduras. Una vez recolectada la
muestra, transportar al laboratorio de análisis.
¿QUÉ MICROORGANISMOS
SE DETERMINAN?
Coliformes totales: Bacterias gram negativas
(Enterobacter, Klebsiella spp, Citrobacter,
Escherichia)
Coliformes fecales (indicadores): Escherichia
coli, Streptococcus faecali
Otros microorganismos de interés:
Pseudomona aeruginosa
Bacterias aerobias.
 PROCEDIMIENTO COLIFOMES TOTALES
(MÉTODO NMP)
FUNDAMENTO: Los coliformes reagrupan ciertas especies
bacterianas pertenecientes a la familia Enterobacteriaceae, de
morfología bacilar, Gramnegativas, aerobias o anaerobias
facultativas, oxidasa negativa, no esporuladas y que fermentan la
lactosa con producción de ácido a 37ºC en 24-48 horas.
La técnica del NMP consiste en la inoculación de una muestra de
agua diluida en tubos que contienen medio de cultivo líquido
selectivo, y lo que se busca es saber si presenta algún tipo de
contaminación bacteriana.
Pruebas utilizadas:
- Prueba presuntiva
- Prueba confirmativa
 PRUEBA PRESUNTIVA

100 mL
Agua 10 mL
10 mL caldo lactosa
Primera dilución
Doble
concentración

1 mL 5 mL caldo lactosa
Segunda dilución Simple concentración

0.1 mL 5 mL caldo lactosa

Tercera dilución Simple concentración

Incubar 35-37 °C
por 24-48h
 INTERPRETACIÓN DEL
RESULTADO
Si todos los tubos (9)en la prueba
presuntiva dieran negativos, reportar:
Coliformes totales: < 3 NMP/100 mL
Coliformes fecales: Ausencia
TUBOS POSITIVO
Si el tubo presenta gas en la
campana de durham, se considera
positivo

gas

Se pasa a la prueba confirmativa

 PRUEBA
CONFIRMATIVA
La formación de gas y turbidez en el caldo lactosa son resultados
presuntivos de coliformes y es necesario realizar pruebas
confirmativa.

Resembrar cada uno de los tubos con reacción positiva a tubos con
caldos bilis verde brillante 2%, incubar los tubos resembrados a 35
ºC - 37 ºC y examinar la producción de gas en un periodo de 24 h
a 48 h.

Con el número de tubos de las pruebas confirmativas que hayan

dado reacciones positivas, calcule el número más probable de
organismos coliformes, refiriéndose a las tablas estadísticas del
NMP.
 Resultado de prueba
presuntiva
Prueba confirmativa

Tubos positivos: 3
Primera
dilución
+ + ­+ +
+ + +
Segunda
dilución Tubos positivos: 2

Incubar 35-37 ° C
+ + por 24 h

Tercera Tubos positivos: 0

dilución

Serie de números a buscar en la tabla : 320

 COLIFORMES
Para confirmar la presencia FECALES
de organismos coliformesfecales (termotolerantes),
incubar los tubos con caldo EC resembrados a una temperatura de 44,5 °C ± 0,2 °C
por 24 h ± 2 h y examinar la producción de gas.

Para confirmar la presencia de E. coli, realizar un subcultivo a partir del caldo E.coli
después de la incubación en Agar EMB.

Resultado
positivo

medio
Verde
Caldo E. coli Agar EMB
brillante Incubar a Incubar a 37⁰C
Tubo 44.5 ⁰C± 0.2 °C por 24 h
positivo
Resultado
negativo
 CUANTIFICACIÓN DE
BACTERIAS AEROBIAS
TÉCNICA VERTIDO EN PLACA
Transferir de la muestra 1mL a un tubo de ensayo que contiene 9 mL de
diluyente buffer fosfato pH 7.2 . (primera dilución ). Rotular como10 -1
Realizar una segunda dilución. (Rotular como10-2).
De la ultima dilución transferir 1 ml por duplicado a dos placas Petri vacías y
estériles, agregar medio de cultivo fundido de Caseina soja (15-18 mL),
homogenizar y dejar solidificar. Incubar las placas de 35-37°C x 24 horas.

1 1
mL mL 1
mL

1 mL

Muestra de 10-1 10-2

agua Incubar 35-37°C x 24h
 Después de la
cuantificar
incubación

30
UFC
Reportar el número de UFC/ mL
Considerando el factor de dilución

30+34=64/2=32 34 UFC

32 x 10² UFC/mL
 IDENTIFICACIÓN DE
PSEUDOMONAS
AERUGINOSA
Positivo
(presencia)

Agar cetrimide
Prueba de la
Incubar 35-37°C
oxidasa
X 24 h

Negativo
(Ausencia)
Muestra de agua
 INFORME DE ANÁLISIS

Nombre Genérico: Lote:

Nombre comercial: F,F/F.V:
Forma farmacéutica: Presentación:
Tipo de ensayo: Fecha de recepción:
Cantidad entregada al analista: Fecha de análisis:
Nombre del analista:
Método de análisis:

Ensayos a realizar Resultados Especificaciones

Coliformes totales
Coliformes fecales
Bacterias aerobias
Pseudomona
aeruginosa
Observaciones:------------------------------
Bibliografía:------------------------------------------------

Fecha de entrega:-------------- Firma del analista: ----------------------

 CONTROL DE LAVADO
EFICIENTE DE MANOS
Hisopado de manos
Humedecer el
hisopo en
agua estéril

MI
Caldo MD
Digerido
Caseína y
Soja
INCUBACIÓN
 En una gradilla colocar los tubos debidamente rotulados.
Incubar a 35-37⁰ C por 24 -48 h
Posterior a la incubación observar ambos tubos y ver si hay
evidencia de crecimiento.
Anotar los resultados.
INTERPRETACIÓN
 Si no hay evidencia de crecimiento se registra el resultado como:
negativo (-) no hay crecimiento.

P.C: Poco crecimiento

M.C: Moderado crecimiento
A.C: Abundante crecimiento
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