Cromatografía de

intercambio iónico
Juan Camilo García Builes
Santiago Montoya Montes
 Temas:
• Historia
• ¿Qué es?
• Fases
• Principios
• Propiedades de los intercambiadores
• Etapas de la IEC
• Separación de proteínas
• Técnica típica
• Partes
• Usos
• Artículo
Historia
Los métodos iónicos se han utilizado
desde 1850, cuando H. Thompson y J. T. Way,
investigadores de Inglaterra, trataron diversas
arcillas con sulfato de amonio o carbonato en
solución para extraer el amoníaco y
liberar calcio.

En 1927 se utilizó la primera columna de zeolita mineral

para eliminar iones de calcio y magnesio que interferían en
la solución, para determinar el contenido de sulfato de
agua. La versión moderna de la IEC se desarrolló durante
la época de la guerra del Proyecto Manhattan. Se requería
una técnica para separar y concentrar los
elementos radiactivos necesarios para hacer la bomba
atómica. Los investigadores eligieron absorbentes que
pudieran cerrarse sobre elementos transuránicos cargados,
y que pudieran eliminarse diferencialmente.
 Finalmente, una vez desclasificada en
1947, la Comisión de Energía Atómica dio
a conocer la información sobre el uso de la
cromatografía de intercambio iónico para
la separación de productos de fisión
Historia nuclear. Estas técnicas pueden utilizar
nuevas resinas IE para desarrollar los
sistemas que se utilizan a menudo hoy en
día para la purificación específica de
productos biológicos y de sustancias
inorgánicas.
A principios de los años 1970, Hamish Small y sus
compañeros de trabajo en Dow Chemical Company
desarrollaron la cromatografía iónica como un novedoso
método de IEC utilizable en el análisis automatizado. La CI
utiliza resinas iónicas más débiles para su fase estacionaria, y
una nueva neutralización de stripper, o supresor de la columna
para eliminar los iones quitados que se depositan en el fondo.
Es una técnica para determinar bajas concentraciones de iones,
y es especialmente útil en estudios sobre el medio ambiente y
la calidad del agua.
¿Qué es una IEC?

En pocas palabras, la cromatografía de intercambio

iónico es un proceso que permite la separación de
iones y moléculas polares en las propiedades de
carga de las moléculas. Puede ser usada en casi
cualquier tipo de molécula cargada incluyendo
proteínas grandes, nucleótidos y aminoácidos
pequeños. La solución que debe inyectarse
normalmente se denomina "muestra", y los
componentes separados individualmente se
llaman analitos. Se emplea a menudo en
purificación de proteínas, análisis del agua o
control de calidad.
 Fases
Al empezar a efectuarla se deben tener en cuenta
sus dos fases:
 Estacionaria: Es insoluble, lleva en la
superficie cargas electrostáticas fijas que
retienen contraiones móviles que pueden
intercambiarse por iones en la fase móvil.
 
 Móvil: Es una disolución acuosa con
cantidades moderadas de metanol u otro
disolvente orgánico miscible en agua que
contiene especies iónicas en forma,
generalmente de buffer. Los iones de la fase
móvil compiten con los analitos por los sitios
activos de la fase estacionaria.
Principios
La cromatografía de intercambio iónico conserva los analitos basándose en las interacciones de Coulomb. La fase
estacionaria muestra en la superficie grupos funcionales iónicos (R-X) que interactúan con iones de carga opuesta
del analito.
Este tipo de cromatografía se subdivide a su vez en dos técnicas. La cromatografía de intercambio catiónico y la
cromatografía de intercambio aniónico:
 La cromatografía de intercambio catiónico retiene cationes cargados positivamente debido a que la fase
estacionaria muestra un grupo funcional cargado negativamente, como podría ser un ácido fosfórico.

 La cromatografía de intercambio aniónico retiene aniones usando grupos funcionales cargados positivamente,

como un catión de amonio cuaternario.

R-X+ es el analito presente en la columna, C + es el catión, A- es el anión, M+ es la muestra y B+ es el ion de la
muestra.
Propiedades de los
intercambiadores.
Iónico: Polímero que tiene grupos
cargados unidos.
Catiónico: Si un grupo está cargado
negativamente, puede intercambiar
iones positivos.
Aniónico: Si el grupo cargado es
positivo, es un intercambiador de
aniones.
 Etapas
 Equilibrio: Etapa 1
 Aplicación de la muestra y lavado: Etapa 2
 Elución: Etapa 3
 Regeneración: Etapa 4
Separación de proteínas

Las proteínas tienen numerosos grupos

funcionales que tienen tanto cargas positivas
como negativas. La cromatografía de
intercambio iónico separa las proteínas de
acuerdo con su carga neta, la cual depende de la
composición de la fase móvil. Es posible
separar varias moléculas de proteína ajustando
el pH o la concentración de los iones de la fase
móvil.
Técnica típica
Una muestra es introducida, de forma manual
o con autosampler dentro de un ciclo de
muestras de volumen conocido. una solución
acuosa tamponada conocida como fase móvil
lleva la muestra del ciclo de muestras a la
columna de cromatografía que contiene un
analito en fase estacionaria. Este analito es
típicamente una resina o matriz de gel que
consiste en agarosa o celulosa unidos
mediante enlace covalente a grupos
funcionales cargados como puede ser
una resina de intercambio catiónico.
 Partes
En el cromatógrafo se pueden encontrar
varias partes, principalmente dos:
 Una columna donde se encuentra la resina
con carga opuesta a la carga del analito al
que se requiere conocer sus valores. La
sustancia pasa por esta columna y sus
cargas serán atraídas por la resina de la
columna según su tamaño y su carga.
 La segunda es un detector de conducción
que actúa cuando la sustancia sale de la
columna, este registra una gráfica de
cómo varía la conductividad eléctrica
frente al tiempo que se tardan en pasar.
Usos o aplicaciones:

 La Cromatografía de intercambio iónico se emplea para medir los niveles

de Hemoglobina glucosilada (HbA1c).
 También sirve para detectar porfirinas (grupo prostético de las cromoproteínas que
ayuda entre muchas cosas en el cuerpo, a generar hemoglobina).
 Además de que sirve para purificar y producir agua desionizada en pequeñas
cantidades
Estos son algunos de los usos en base a la salud, aunque también se usa en la industria:
 permite el testeado cuantitativo de los electrolitos y aditivos patentados de los baños
de electro-chapado (Esto supone un avance en las pruebas de testeado cualitativo del
electro-chapado o en pruebas menos precisas de testeo de UV).
Artículo
Metodología Filtración de flujo
tangencial: La TFF
(filtración de flujo
tangencial), también
Ultracentrifugadora: La
denominada CFF (filtración
ultracentrifugadora es una
de flujo cruzado), es un
centrifugadora optimizada
método rápido y eficiente
para girar su rotor a
para la filtración y
velocidades muy elevadas,
separación de soluciones
capaces de generar una
que contienen biomoléculas
aceleración tan alta como de
o partículas como virus,
100.000 rpm o 803.000 xg g.
bacterias o material celular.

Cromatografía de
intercambio iónico
Resultados
 a) 2 buffers en el
Discusión proceso de elución, es la
absorbancia de tal
solución.
b) Cuantificación de qué
proteínas se encuentran
en estos picos.

c y d) Cuantificación de
qué partículas pasaron
por el filtro según el
tamaño y concentración.
e) Microscopía
electrónica de las
vesículas vistas en la
primera gráfica