Característica/Tipo Fundamento Fase Fase estacionaria Parámetros cromatográficos Aplicaciones

móvil
Como medida en cromatografía sobre papel se emplea el Rf
(Retención factor), el cual se define como el cociente de
La cromatografía en papel es un proceso muy utilizado en los laboratorios
dividir el recorrido de la sustancia por el disolvente, esto
para realizar análisis cualitativos ya que pese a no ser una técnica potente no
es, la
requiere de ningún tipo de equipamiento. La fase estacionaria está constituida
distancia media desde el origen hasta el centro de la
simplemente por una tira de papel de filtro. La muestra se deposita en un
Líquido agua, un mancha
extremo colocando pequeñas gotas de la disolución y evaporando el
Cromatografía en solvente orgánico o Papel de celulosa, papel filtro. (X) dividida por la distancia que media desde el origen hasta el
disolvente. Luego el disolvente empleado como fase móvil se hace ascender Utilizada para análisis cualitativo, medición de purezas, separación de colorantes,
papel una mezcla de frente del disolvente (S).
por capilaridad. La separación se realiza en función de la afinidad de los sustancia orgánica de naturaleza no proteica, clorofila, carotenos etc.
ambos.
solutos con las dos fases, las más solubles en agua se quedarán cerca del
punto donde se aplicó la muestra, y las menos solubles en agua y más
solubles en el disolvente llegarán más lejos.

La cromatografía en capa fina se basa en la preparación de una
capa, uniforme, de un adsorbente mantenido sobre una placa de
vidrio u otro soporte. Los requisitos esenciales son, pues, un
adsorbente, placas de vidrio, un dispositivo que mantenga las
Cromatografía de capa
fina
placas durante la extensión, otro para aplicar la capa de
adsorbente, y una cámara en la que se desarrollen las placas
cubiertas. Es preciso también poder guardar con facilidad las
placas preparadas y una estufa para activarlas.
Cada compuesto tiene un Rf característico que depende del Cromatografía de soluciones con aminoácidos. Determinar el grado de pureza de un
disolvente empleado y del tipo de placa de CCF utilizada, compuesto.
pero es independiente del recorrido del disolvente.
De esta manera se puede ayudar a identificar un compuesto en
una mezcla al comparar su Rf con el de un compuesto
conocido (preferiblemente cuando se hacen elegir en la misma
Líquido. Ácido acético,
placa de CCF).
agua, metanol, benceno Gel de sílice o alúmina, papel de celulosa.
etc.

El cromatograma es la curva de elución que se obtiene en

una cromatografía y representa la señal recogida por el Se emplea para determinar masas moleculares. Para eliminar sustancias de
La cromatografía de filtración en gel es una técnica que permite
Relleno de pequeñas partículas de sílice o detector en respuesta a la concentración de analito en pequeño tamaño molecular de una muestra proteica (p.ej., las sales inorgánicas
separar moléculas en función de su tamaño molecular.
polímeros con red de poros uniforme. Entre función del tiempo o del volumen de fase móvil añadido: en un “desalado” de la muestra, eliminación del exceso de reactivos tras tratar
Cromatografía La capacidad separadora reside fundamentalmente en el gel cuya
Líquido ellos están los polímeros macromoleculares una proteína en el laboratorio, eliminación de inhibidores enzimáticos). Como
Filtración matriz consta de un gran número de esferas porosas microscópicas.
semirrígidos, los entrecruzados, las sílices aplicación referida a productos alimenticios en cromatografía por exclusión de
en gel Cada gel se caracteriza por un rango de fraccionamiento que depende
rígidas y las de “poro controlado”. tamaños: separación de ácidos grasos, determinación de glucosa fructosa y
del tamaño de sus poros.
sacarosa en zumos enlatados.

La cromatografía de intercambio iónico se lleva a cabo con

empaques de columna que tiene grupos funcionales cargados unidos
a una matriz polimérica. Los grupos funcionales enlazados
permanentemente y asociados con contraiones de carga opuesta. El
mecanismo de retención más común es el intercambio simple de los
Cromatografía de
iones de la muestra y de la fase móvil con el grupo cargado de la
intercambio
fase estacionaria.
iónico
En el caso de empaques cargados negativamente sirven para
intercambiar especies catiónicas. *Intercambio aniónico: F.E. con
carga positiva, une aniones, bien los del disolvente (F.M.) o bien los
de la muestra (de ahí la palabra intercambio). *Intercambio catiónico:
F.E. con carga negativa, une cationes, bien los del disolvente (F.M.) o
bien los de la muestra.
Los cationes inorgánicos se pueden determinar en alimentos, tales como los
alimentos dietéticos bajos en sodio, y en muestras de orina. Se pueden separar
los ácidos HCN, carbónico, silícico y bórico de los ácidos fosfórico, sulfúrico y
Líquido
Resinas de intercambio iónico. clorhídrico. Los metales que forman complejos cloruro y fluoruro. Como
(polar)
aplicaciones de la cromatografía iónica está el análisis de drogas y sus
metabolitos, sueros, conservantes de alimentos, mezclas para vitaminas,
azúcares, y preparaciones farmacéuticas.
Constante de distribución

La cromatografía de afinidad separa las proteínas (analitos) en función de su

especificidad de fijación de ligandos. Los ligandos de afinidad son moléculas
poliméricas que sirven de soporte porque están unidas covalentemente sobre
la columna cromatográfica o matriz inerte que debe de tener una estructura Separación de mezclas proteicas por su afinidad o capacidad de unión a un
de poro abierta y estabilidad en condiciones de cambio de pH, detergentes y Partículas finamente divididas de sílice o de determinado ligando. Purificación de proteínas séricas, colagenasa, lactoferrina,
Cromatografía de Líquido
agentes disocianatos, para así, retener y adsorber específicamente a las alúmina. proteínas granulares, interferón. Separación de glicoproteínas, nucleasas,
Afinidad
proteínas, la fase estacionaria es sólida. nucleótidos, catecolaminas, carbohidratos, RNA de transferencia.
Estos ligandos se clasifican según su naturaleza química o su
selectividad para la retención de analitos, esta última se clasifica en
ligandos específicos (anticuerpos) y generales (como las lecitinas).