Buen día

TAREA
EL MICROSCOPIO ELECTRONICO DE
BARRIDO
 
• Instrumento que permite la observación y
caracterización superficial de materiales
inorgánicos y orgánicos, entregando información
morfológica del material analizado.
 
• A partir de él se producen distintos tipos de señal
que se generan desde la muestra y se utilizan para
examinar muchas de sus características.
 
Con él se pueden realizar estudios de los aspectos
morfológicos de zonas microscópicas de los distintos
materiales con los que trabajan los investigadores de la
comunidad científica forense y las empresas privadas,
además del procesamiento y análisis de las imágenes
obtenidas. Objetivo de estas clases.
El MEB puede estar equipado con diversos
detectores, entre los que se pueden mencionar: un
detector de electrones secundarios para obtener
imágenes de alta resolución SEI (Secundary
Electron Image),
 Además ……..
• Un detector de electrones retrodispersados que permite
la obtención de imágenes de composición y topografía de
la superficie BEI (Backscattered Electron Image),
• Y un detector de energía dispersiva EDS ( Energy
Dispersive Spectrometer) permite colectar los Rayos X
generados por la muestra y realizar diversos análisis e
imágenes de distribución de elementos en superficies
pulidas, o irregulares análisis químico
Principales aplicaciones

• Geología
• Estudio de materiales
• Metalurgia
• Odontología
• Paleontología y Arqueología
• Control de Calidad
• Fibras
• Peritajes
• Medicina Forense
• Botánica, Biomedicina y Medicina
• Peritaciones Caligráficas
 MICROSCOPIO
ELECTRONICO DE
BARRIDO
.
Es un dispositivo técnico de gran utilidad para el
estudio de superficies de cualquier naturaleza .

Este microscopio focaliza el haz de electrones y

rastrea la superficie del espécimen .

Al rastrear la superficie, el haz de electrones es

absorbido por la superficie y genera una emisión
secundaria de electrones captada por el sistema
integrador y el decodificador de imagen para
proyectarla en un monitor o bien en el sistema de
registro computarizado.
El MEB nos proporcionar las siguientes ventajas :

Su gran profundidad de campo.

Las muestras pueden ser orgánicas o inorgánicas.

Una imagen tridimensional.

La posibilidad de visualizar muestras

relativamente de gran tamaño.

Una gran gama de aumentos y poder de

resolución de 10 a 20 nanómetros..
• La resolución en un M.E.B. es la mínima
distancia de discernir entre dos puntos o estructuras separadas en la
muestra observable en la imagen.
• En Barrido la resolución depende de factores como:
• Tamaño del haz, cantidad de electrones retrodispersados y de la relación
señal/ ruido.
MICROSCÓPIO ELECTRÓNICO DE
BARRIDO JEOL JSM 35CF

OBSERVACIÓN
MICROSCOPIO ELECTRONICO DE BARRIDO

• ES UN INSTRUMENTO CAPAZ DE PROPORCIONAR SÓLO UN TIPO

CONCRETO DE INFORMACIÓN, TAL COMO LOS MICOROSCOPIOS
ÓPTICOS Y EL MET.
LAS MUESTRAS A OBSERVAR PUEDEN SER
ORGÁNICAS E INORGÁNICAS.

UNA IMAGEN TRIDIMENSIONAL

VISUALIZAR MUESTRAS DE GRAN TAMAÑO

LAS VENTAJAS QUE OFRECE SON SU GRAN

PROFUNDIDAD DE CAMPO.

UN PODER DE RESOLUCIÓN DE 10 A 20 nm.

METODOLOGIA
• LA PREPARACIÓN DE LA MUESTRA REQUIERE QUE SE
CUMPLAN DOS CONDICIONES:

• QUE ESTEN SECAS .

• y QUE SEAN CONDUCTIVAS.
FILAMENTO. Es un alambre de tungsteno o hexaboruro de
lantano que al recibir energía de los cables de alta tensión, cede
electrones, los cuales se concentran en la punta de este emisor.
FILAMENTO. Es un alambre de tungsteno o hexaboruro de lantano
que al recibir energía de los cables de Alta tension, cede electrones,
los cuales se concentran en la punta de este emisor.

CILINDRO DE WEHNELT. Se encuentra rodeando al filamento, tiene

una diferencia de potencial más negativa, cuenta además con una
apertura por la que pasan los electrones. Su función es la de dirigir
y concentrar los electrones en un punto cercano al cilindro.

ANODO.
Es una placa metálica con una perforación central por donde fluyen
hacia la columna los electrones acelerados por la diferencia de
potencial existente entre este y el cátodo.
FILAMENTO. Es un alambre de tungsteno o hexaboruro de lantano que al recibir energía de los cables de alta
tensión, cede electrones, los cuales se concentran en la punta de este emisor.

CILINDRO DE WEHNELT. Se encuentra rodeando al filamento, tiene una diferencia de potencial más negativa, cuenta además
con una apertura por la que pasan los electrones. Su función es la de dirigir y concentrar los electrones en un punto cercano
al cilindro.

ANODO.
Es una placa metálica con una perforación central por donde fluyen hacia la columna los electrones acelerados por la
diferencia de potencial existente entre este y el cátodo.
 PROCESADO DE MUESTRAS
PROCESO BIOLÓGICO ( MET )

1. FIJACIÓN

 PERFUSIÓN INTRAVASCULAR Formalina 10%

Buffer PO4
 FIJACIÓN EXTERNA 48 hhrs..
 PROCESADO DE MUESTRAS
PROCESO BIOLÓGICO ( MET )

5. TETRAÓXIDO DE OSMIO OSO4 (1%) 2 cc. + BUFFER PO4 2 cc. ( 2 hrs. )

6. SOLUCIÓN BUFFER PO4 + HIELO ( 3 cambios 15 min. c/u. )

 PROCESADO DE MUESTRAS
PROCESO BIOLÓGICO ( MEB )

1. FIJACIÓN

 PERFUSIÓN INTRAVASCULAR Formalina 10%

Buffer PO4
 FIJACIÓN EXTERNA 48 hhrs..
 PROCESADO DE MUESTRAS
PROCESO BIOLÓGICO ( MEB )

5. TETRAÓXIDO DE OSMIO OSO4 (1%) 2 cc. + BUFFER PO4 2 cc. ( 2 hrs. )

6. SOLUCIÓN BUFFER PO4 + HIELO ( 3 cambios 15 min. c/u. )

DESHIDRATACION PARA MICROSCOPIA DE
 
BARRIDO
Secado de punto crítico
• Reactivo: CO2 líquido y gaseoso. 

• Objetivo:  Remoción total del agua de la muestra 

• Comentarios: Este paso se basa en lo siguiente: el CO2 a temperatura

baja es líquido y a temperatura alta es gaseoso.
• Cuando la muestra sale deshidratada por el etanol, se coloca en
el secador de punto crítico (SPC), allí, la muestra se purga con
CO2 líquido Hasta que el etanol haya sido reemplazado.
• Posteriormente se sella la cámara y se calienta hasta que
la temperatura llegue a 31ºC, de esta forma el CO2 líquido
se evapora y la muestra queda totalmente seca.
• Este procedimiento reduce de tamaño de la muestra.
Montaje de la muestra
• Objetivo Utilizado: Porta muestra
Objetivo: Colocar la muestra asegurada para permitir la
colocación en el ionizador de oro. 
Como adhiero la muestra ,
• Comentarios: Para asegurar la muestra , se utiliza una cinta
doble cara (tejidos) o carbono cemento conductivo  
Ionizador
• Elementos:  Oro, paladio o carbono 

• Objetivo: Permitir que el haz de electrones primarios

choquen contra la muestra recubierta con un material
conductor para que estas sean eléctricamente conductivas. 

• Comentarios: Este procedimiento se realiza con un rociador

o Sputter coater.
• Se coloca la muestra en la cámara, se sella y se programa el
tiempo de recubrimiento en el cual el oro cae
uniformemente, se hace vacío y automáticamente el timer
se enciende y la muestra se recubre totalmente según el
tiempo programado, aproximadamente son 2 minutos.
Entonces…..
• Cuando el tiempo ha finalizado, lentamente empieza a ingresar
aire a la cámara y de esta forma, la muestra está lista para
colocarla en el MEB.
• El metal con la muestra recubierta no se debe tocar  con los
dedos, por lo tanto es necesario utilizar pinzas.
•Obtención de imágenes 3D.
•Caracterización  estructural.
•Estudio de características morfológicas y
topográficas.
•Estudio de enfermedades del tallo piloso.
•Estudio de formación de biofilms.
•Interacción de microorganismos con células
eucariotas.
PREPARACIÓN DE MUESTRAS PARA UN MICROSCOPIO
ELECTRÓNICO DE BARRIDO

• La prepararación de muestras para un Microscopio

Electrónico de Barrido (SEM) se distingue según el tipo
de muestra que se quiere analizar. 
• Si la muestra es orgánica no conductora, primero se debe lim
piar cuidadosamente y luego debe hacerse un recubrimiento
metálico mediante la técnica del Sputtering esto para que en
la muestra haya desprendimiento de electrones y sean
captados en el SEM.
• Para una muestra inorgánica conductora
simplemente se debe limpiar la superficie con
cuidado de no dañarla para ello se usa acetona y un
aparato ultrasónico para desprender las suciedades
de la muestra por efecto cavitación
La imagen que se forma en un SEM a diferencia del
TEM donde la imagen se forma con los electrones del
haz que traspasan la muestra, en el SEM la imagen se
genera con los electrones que rebotan sobre la
superficie de la muestra. 
Estos electrones dan información sobre las características
topográficas de lamuestra.
Es decir la calidad de la imagen que se obtenga dependerá
de la capacidad que tenga la muestra para emitir electrones. 
Así que la preparación demuestras conductoras solo consiste 
en su limpieza pegado sobre el porta muestras, utilizando para
ello un pegamento especial conductor.
En el caso de muestras
no conductoras se requiere un recubrimiento por película
delgada de un elemento conductor.
La preparación de muestras es, en general, sencilla.
Los requisitos indispensables que deben cumplir son ausencia de
líquidos, es decir, la muestra tiene que estar
seca y además debe ser conductora de la corriente eléctrica. Este último
requisito se cumple en los metales pero no así en otro tipo de
materiales, por lo que para hacer a la muestra conductora se la recubre
de una capa de algún material conductor tal como el carbón o el oro.
• Este recubrimiento ha de ser suficientemente grueso
como para que circule la corriente eléctrica que se
deposita en la muestra y suficientemente delgado para
que no enmascare o tape las características superficiales
de interés.

• Un proceso muy utilizado para recubrir con películas

conductoras es el Sputtering y Evaporación Térmica.
Monturas
• Las monturas que sostienen las muestras en el SEM
pueden ser de carbón o de aluminio. 
• Vienen en distintas formas y tamaños.
• Las monturas más usadas están hechas de una aleación de Aluminio
que es seleccionado por su
fácil maquinado y donde las superficies son pulidas
primero por métodos mecánicos y luego mediante
técnicas metalográficas, se obtiene un terminado de espejo; 
• esta montura es ideal para estudios que requieren superficies
totalmente lisa
Limpiador ultrasónico: Branson 2210.
El funcionamiento de este limpiador ultrasónico se
basa en el fenómeno físico llamado
cavitación
en la cual con cuidado y a fondo limpia la superficie de sus
muestras. 
Un transductor ultrasónico conectado al
tanque de limpieza transmite una alta frecuencia de sonidos
(de 47 KHz) en la solución de limpieza.
• Durante la etapa de presión baja de cada onda sonora, burbujas diminutas se
forman y crecen.
• Durante la alta presión organizan este derrumbamiento de burbujas,
quitando la suciedad, la herrumbre y otros contaminantes.
• Esta acción de limpieza puede alcanzar cualquier superficie expuesta, aún en
grietas profundas
• Cavitación
• La cavitación o aspiración en vacío es un efecto hidrodinámico
que se produce cuando el agua o cualquier otro fluido
pasa a gran velocidad por una arista afilada
• La implosión causa ondas de presión que viajan en el líquido. 
• Estas pueden disiparse en la
corriente del líquido, pueden chocar con una superficie.
• Si la zona donde chocan las ondas de presión
es la misma, el material tiende a debilitarse
metalúrgicamente y se inicia una erosión que, además de
dañar la superficie, provoca que ésta se convierta en una
zona de mayor pérdida de presión y por ende de mayor
foco de formación de burbujas de vapor
Cintas Conductoras

• Para pegar la muestra a la montura se utilizan cintas o

pegamentos conductores, las más requeridas son las cintas
de carbón y las cintas de cobre.
• Son pegamentos de dos caras, cintas eléctricamente
conductoras fueron desarrollados para adjuntar
muestras para ser examinadas por SEM o EDS. 
• Se recomienda un producto conductor basado en carbón
para el trabajo de EDS donde es importante eliminar los
rayos X que entran en el detector del sustrato.
Cintas Conductoras De Cobre 

• Las cintas de cobre además de ser conductivas y adhesivas proveen

un fondo ideal contra el que puede observarse el espécimen. 
• El uso de cintas reduce considerablemente la cuenta de rayos X.
• Ya sea que se esté capturando imagen o analizando una muestra se
logra un efecto igual al trabajo con microscopía de campo oscuro
• Las ventajas de usar cintas de cobre son
•
• Permite la montura de muestras sin contaminación de
pintura de plata o carbón.
•
• Permite la montura de muestras altamente
porosas o absorbentes sin distorsión generada por
líquido absorbido por la muestra.
•
• Proveen buena conductividad.
Cintas Conductoras De Carbón

• Las cintas conductoras de carbón, así como es conductor
y adhesivo no tienen casi ninguna estructura
perceptible y proporciona el fondo ideal para ver su
espécimen entero. 
• El empleo de las cintas también reduce enormemente
las cuentas de rayo X de fondo,
dando a la exactitud mayor y límites de detección
inferiores para su trabajo de EDS.
Plata coloidal.

Consisten en las partículas de plata minúsculas
suspendidas en una base líquida la cual es conductora.
Es utilizado en la preparación de muestras para SEM
como pegamento cuando la muestra es orgánica
generando una conexión entre la muestra y un camino de
descarga de los electrones
• La plastilina conductora LEIT-C-PLAST
• Este material altamente conductivo y moldeable, este
plástico Es diseñado para montar especímenes grandes
en un SEM, y con mayor efectividad de agarre a la
muestra con respecto a los demás pagamentos a fin de
que las muestras se queden pegadas si las muestras
son volteadas mirando hacia arriba o hacia abajo
• Características:
• La plastilina conductora LEIT-C-PLAST 
• es muy utilizado en muchas muestras para SEM/EDS por su
• combinación de propiedades favorables:
• 1. Conductividad eléctrica alta
• 2. Plasticidad permanente
• 3. No afectado por las condiciones altas de vacío,
• también UHV "compatible“
• 4. Suficiente fuerza adhesiva
Pulverización Catódica (Sputtering).

• El proceso de pulverización catódica es principalmente un proceso de

bombardeo iónico, que consigue la deposición en fase de vapor,
sobre un sustrato de vidrio, del material
bombardeado.
En esta técnica, los iones formados en un plasma son acelerados
hacia el material que se desea depositar, mediante un campo
eléctrico.
• El alto voltaje entre el cátodo y el ánodo provoca que los iones del gas
de proceso (como el argón)golpeen el blanco con la energía suficiente
para arrancar átomos de la superficie del cátodo
mediante un proceso de transferencia de momento.
• Cuando el ión golpea la superficie del
material, transfiere parte de su energía a los átomos que lo forman, y
se produce entonces un……..
DESHIDRATACION:

Se sustituye el agua del tejido por alcohol, lo que se conoce

como deshidratación.

La deshidratación se efectúa haciendo pasar el tejido por

alcoholes de concentración cada vez mayor hasta llegar al
alcohol absoluto. De esta manera todos los lugares de la célula y
de los tejidos ocupados previamente con agua, ahora contienen
alcohol.

Este paso es otra de las facetas importantes ya que los alcoholes

remueven el agua o moléculas sueltas flotando libremente en los
espacios intermoleculares del tejido.
 PROCESADO DE MUESTRAS
PROCESO BIOLÓGICO ( MEB )
5. DESHIDRATACIÓN ASCENDENTE EN ETANOL

 10 %
 20 %
 40 %
 60 %
 80 % 20 min. c/u. + Hielo (4° C)
 90 %
 100 %
 100 %
 100 %

6. ACETONA al 100% ( 2 cambios 10 min. c/u. )

 1. DESECADO A PUNTO CRÍTICO

El agua puede ser removida por secado al aire, o secado a

pasos graduales con una menor cantidad relativa de humedad.
la alteración puede ser reducida si el agua es reemplazada por
un fluido volátil que tenga una menor tención superficial que el
agua . Hasta el momento, el método de remoción de humedad
mas eficaz es Congelado- secado a punto crítico.
 PROCESADO DE MUESTRAS
PROCESO BIOLÓGICO ( para MEB )

1. DESECADO A PUNTO CRÍTICO

 PROCESADO DE MUESTRAS
PROCESO BIOLÓGICO ( para MEB )

8. DESECADO A PUNTO CRÍTICO

Ya desecada la muestra es importante para
obtener una imagen clara en MEB ionizarla
con un baño con partículas de metal. Se
pega en un porta muestras con pasta de
plata o carbón o alguna cinta conductiva. y
después la muestra se cubre con un baño
de un metal como oro, aluminio, plata o
carbón en un ionizador de metales o en
una evaporadora de carbon.
 PROCESADO DE MUESTRAS
PROCESO BIOLÓGICO ( para MEB )

9. IONIZACIÓN
10. MONTAJE
s
Microanalisis.
• Es una técnica para determinar la composición química de elementos
analizados en un microscopio electrónico.

• Al impactarse los termo electrones en una muestra se emiten rayos x

para cada elemento químico.
• La energía emitida es captada por detectores especiales, que miden la
cantidad de energía utilizando un espectrofotómetro de energía
dispersiva (EDS).

• El microscopio electrónico equipado con un detector de rayos x del

tipo (EDS) permite detectar desde el sodio hasta elementos muy
pesados con el EDS sabemos que elementos y donde est
• El detector capta señales que se transmiten a un amplificador y de ahí
aun analizador generándose una grafica en un monitor que muestra
picos a diferentes alturas que indican la presencia relativa de los
elementos químicos en mayor abundancia
• Técnica capaz de hacer una correlación a escala fina entre el análisis
químico y la micro estructura de la muestra dentro de una región
menor de una micra de diámetro.
M.E. con E.D.S
Cristales.

Espectro de microanalisis.