Lic.

Julio Roberto Juárez Pernillo

quimionauta@gmail.com
http://www.quimionauta.blogspot.com
Departamento de Fisicoquímica
Primer Semestre 2010
DEFINICION: Es un método de separación basado en la
diferencia de velocidades de migración de especies cargadas
eléctricamente en una disolución amortiguadora a la que se
aplica un campo eléctrico constante. Desarrollada por Arne
Tiselius para el estudio de proteinas séricas (Nobel 1948).
Se ha hecho de uso extensivo en biociencias.
Solamente la electroforesis tiene la resolución necesaria para
distinguir polinucleótidos que difieren en 200 y 500 UMAs en
secuenciación de ADN.
TIPOS: Existen dos tipos principales de electroforesis:
•Electroforesis convencional.
•Electroforesis capilar.

ELECTROFORESIS CONVENCIONAL: Se lleva a cabo sobre

una capa delgada y plana o placa de un gel semisólido y poroso
que contiene un amortiguador acuoso. Igual que en CCF, se
pueden efectuar múltiples separaciones. Las muestras se
disponen como manchas o bandas sobre la placa y se aplica un
potencial de corriente contínua durante un periodo de tiempo
fijo. Las especies separadas se tiñen para visualizarse. Los
volúmenes separados son del orden de los μL.
ELECTROFORESIS CAPILAR: Método instrumental
fundamentado en la electroforesis convencional. Relativamente
nueva. Da lugar a separaciones de volumenes muy pequeños (de
0.1 a 10 nL), con mucha rapidez y resolución. Usa los mismos
detectores cuantitativos que la técnica HPLC, en lugar de las
tinciones de la técnica convencional. La velocidad de migración
(v), de un ion en cm/s viene dada por:

donde E es la intensidad del campo eléctrico (V/cm) y μe es la

movilidad electroforética (cm2/V s). E = V/L, donde V es el
potencial aplicado en voltios y L es la longitud sobre la que se
aplica el campo.
NUMERO DE PLATOS EN ELECTROFORESIS CAPILAR:
Por existir una única fase en la separación, N sólo depende de la
difusión longitudinal, y su expresión viene dada por:

donde D es el coeficiente de difusión del soluto en cm2/s. Se usan

potenciales elevados para mejorar la eficiencia de separación.
•Alta resolución (105 a 106 platos teóricos)-HPCE
•Requiere pequeño volumen de muestra (1-10 nl)
•Rápida separación (1 a 45 min.)
•Aplicable a todo tipo de sustancias
•Automatización
•Cuantificación (lineal)
•Reproducibilidad
•Puede acoplarse a espectrometría de masa
•Datos fundamentales
•Proteínas
•Péptidos
•Amino ácidos
•Ácidos nucleicos
•Iones inorgánicos
•Bases orgánicas
•Ácidos orgánicos
•Se utilizan altos voltajes 10-30kV.(>500V/cm; 10-20 mA)
•Moléculas positivas, negativas o neutras puede separarse.
•La separación se realiza en un tubo capilar de sílica fundida
cubierta con poliamida para darle flexibilidad.
• El tubo capilar tiene 30-100cm. De longitud y 25-100de
diámetro interno.
•Los grupos hidroxilos de la sílica se disocian dejando el tubo
con una carga negativa.
FLUJO ELECTROOSMÓTICO: Movimiento por el cual el
disolvente tamponado migra hacia el ánodo o hacia el cátodo. El
movimiento es causado por la doble capa eléctrica que se forma
en la interfase sílice/disolución. A pH mayor a 3, la pared
interna de un capilar de sílice tiene carga negativa por la
ionización de los grupos silanol de la superficie. Los cationes del
buffer se agrupan sobre la superficie negativa del capilar para
formar la doble capa eléctrica. Los cationes situados en la capa
exterior difusa de la doble capa son atraidos hacia el cátodo
negativo y como están solvatados, arrastran al resto de la
disolución con ellos.
= v/E = Q/ 6r
 Modalidad Criterio de separación Sustancias

EC de zona Densidad de carga Moléculas pequeñas,

(CZE) péptidos, proteínas,
DNA pequeño.

Electroenfoque pl Péptidos, proteínas.

Cromatografía Densidad de carga y Moléculas pequeñas,

micelar coeficiente de reparto péptidos, DNA.
electrocinética en las micelas, según la
capilar (MECC) hidrofobicidad

EC en gel Masa molecular Péptidos, proteínas,

Desnaturalizante Tamaño y densidad de DNA
No desnaturalizante carga.