UNIVERSIDAD TÉCNICA DE MANABÍ

ESCUELA DE LABORATORIO CLÍNICO

TEMA:
EXAMEN DEL FROTIS DE SANGRE PERIFÉRICA Y
CORRELACIÓN CON EL HEMOGRAMA COMPLETO

INTEGRANTES:
• CEDEÑO ZAMBRANO MAUREEN NATHALI
• CEVALLOS PALACIOS ROSA JAMILETH
• GUILLEN CRUZATTY NAOMY SAMARY
• MERA PERERO STEFANIA
• MOREIRA CALDERON JOSE MANUEL
• PIONCE ZAMBRANO ANAHIS SAHIAN
• QUIROZ GARCIA KRUSKAYA ANAHY
• RODRIGUEZ RODRIGUEZ ERICKA NOEMY
• SANCHEZ INTRIAGO LUIS FERNANDO

HEMATOLOGIA I
PARALELO “A”
GRUPO N°02
 Recolección de la muestra
• Tubos contienen acido etilendiaminotetraacético (EDTA), que produce l
anticoagulación de la sangre por quelación del calcio que es esencial para la
coagulación.
FUENTES DE LAS MUESTRAS

• Pueden hacerse frotis de sangre de excelente calidad a partir del tubo EDTA
dentro de las 2 a 3 horas de la extracción de la muestra.

• La principal ventaja de realizar los fritos a partir de tubos de EDTA es que

pueden hacerse varios portaobjetos si es necesario y no tienen que ser
preparados de inmediato

• EDTA por lo general impide la aglutinación de las plaquetas en el portaobjetos,

lo que determina que la estimación de las plaquetas sea más exacta durante la
evaluación del frotis.

• Otra fuente de sangre para los frotis son las punciones digitales y del talón.

• Si se hace el frotis de forma adecuada, la distribución y la morfología de las

células debe ser adecuadas
PREPARACIÓN DEL FROTIS
DE SANGRE PERIFÉRICA
TIPOS DE FROTIS
 TÉCNICA MANUAL EN CUÑA
Requiere por lo menos dos portaobjetos de vidrio limpios, de
alta calidad, con borde biselado y esquinas romas para obtener
buenos bordes laterales.

Se coloca una gota de sangre en un extremo del portaobjetos

El portaobjetos extensor, sostenido con firmeza con la mano

dominante a un ángulo de 30 a 45 grados, entonces se empuja
con rapidez y suavidad hacia adelante hasta el final del
portaobjetos

El movimiento debe ser preciso para una correcta distribución

de los leucocitos, y es esencial mantener una presión pareja y
suave sobre el portaobjetos, así mismo mantener el mismo
ángulo a lo largo de todo el frotis.
Características de un frotis de sangre periférica bien hecho

2. El frotis tiene forma de

1.El frotis cubre de dos
dedo, muy ligeramente 3. Se visualizan los
tercios a tres cuartas
partes de la longitud del
redondeado en el borde bordes laterales del
plumoso; no tiene forma frotis
portaobjetos.
de bala.

5. Cuando el portaobjetos
4. El frotis es parejo, sin se coloca contra la luz, la
6. Se incluyó y extendió
irregularidades, porción delgada del frotis
debe tener un aspecto en toda la gota
agujeros ni estrías
“arco iris”
TÉCNICA CON CUBREOBJETOS

Esta preparación es la excelente distribución de los leucocitos,

lo que a su vez permite obtener fórmulas más exactas

No es conveniente ni práctica.

La rotulación, el transporte, la tinción y el almacenamiento de

estas preparaciones pequeñas y frágiles plantean muchos
problemas

Esta técnica requiere que una gota pequeña de sangre se

coloque sobre un cubreobjetos limpio y que otro cubreobjetos se
coloque encima, permitiendo que la sangre se esparza por los
dos cubreobjetos

Luego se hace girar uno sobre otro para crear dos frotis
delgados, un frotis en cada cubreobjetos.
Muestras de frotis inaceptables
 PREPARACIÓN Y TINCIÓN AUTOMATIZADAS
DEL FROTIS:
Sysmex SP-1000i
Después de que el instrumento ha realizado el hemograma de la
muestra, el tubo es desplazado por la banda trasportadora.
Secado de los frotis
Independientemente de la preparacion, todos
los frotis de sangre deben secarse tan rapido
como sea posible ara eviatr los artefaactos que
produce el secado l

De acuerdo con la lectura del hematocrito, el sistema ajusta el

tamaño de la gota de sangre a usar y el ángulo y la velocidad
del portaobjetos extensor para hacer el frotis.

El portaobjetos se seca, se carga en una platina y se desplaza

hacia la posición de tinción, donde se agregan colorante y
solución amortiguadora y se enjuagan en momentos
predeterminados

Cuando la tinción esta terminada, el portaobjetos se desplaza a

un sitio de secado, y después a una zona de almacenamiento, de
donde se recoge para la evaluación microscópica.
 TINCIÓN DEL FROTIS DE SANGRE PERIFÉRICA

El propósito de teñir los frotis de sangre es simplemente hacer

que las células sean más visibles y permitir evaluar su
morfología.

El metanol presente en la
tinción fija las células al
portaobjetos
El teñido real de las células
o de los componentes
celulares no tiene lugar
hasta que se agrega la
solución amortiguadora
El azul de metileno oxidado
y la eosina forman un
complejo tiazina-eosinato,
que tiñe los componentes
neutros
La solución amortiguadora
que se agrega a la tinción
debe ser fosfato de sodio o
agua destilada envejecida.
 MÉTODOS DE TINCIÓN DE WRIGHT
Técnica manual

Los portaobjetos se colocan sobre el soporte, con el lado del

frotis hacia arriba

El colorante puede verterse directamente de la botella a través

de un filtro sobre los portaobjetos

El colorante debe permanecer sobre el portaobjetos al menos 1 a

3 minutos para fijar las células al vidrio.

Después se agrega una cantidad aproximadamente igual de

solución amortiguadora al portaobjetos

Se existe una adecuada mezcla debe aparecer un brillo metálico.

La mezcla se deja sobre el portaobjetos 3 minutos o más.

Cuando la tinción se completa, el portaobjetos se lava con un

chorro continuo, pero suave, de agua con pH neutro
 DISPOSITIVOS AUTOMATIZADOS Existen numerosos dispositivos automatizados en el mercado, en
PARA TINCIÓN DE PORTAOBJETOS general necesitan de 5-10 minutos para teñir un lote de portaobjetos.

1) una vez que el proceso de tinción ha empezados, no pueden agregarse

DESVENTAJAS portaobjetos al lote
2) las soluciones de trabajo o acuosas de tinción son estables solo durante 3 a 6
horas y por lo tanto es necesario prepararlas con frecuencia.

Estas tinciones, como su nombre lo indica, son rápidas y sencillas. Todo el

TINCIONES RÁPIDAS: proceso se hace alrededor de 1 minuto. La tinción se adquiere en botella
como colorante de Wright modificado o de Wright-Giemsa.
Características de un frotis de sangre
periférica bien teñido:
El citoplasma de los
los eritrocitos deben
un frotis de sangre neutrófilos debe ser de
tener un color
bien teñido debe ser color rosa a bronceado
anaranjado a rosa
de color rosa púrpura. con gránulos de color
salmón
violeta o lila

Los eosinófilos deben

los núcleos de los
tener gránulos
leucocitos deber ser de
refringentes
púrpura a azules.
anaranjados brillantes
 Examen del frotis de
sangre periférica
Esta revisión microscópica del
frotis de sangre es esencial
siempre que un instrumento
de análisis indique que
existen alteraciones en la
muestra.
El laboratorista evalúa el
recuento de plaquetas y de
leucocitos y la formula
diferencial, junto con la
morfología de los leucocitos,
los eritrocitos y las plaquetas.
 Examen macroscópico
El examen del frotis antes Por ejemplo, un frotis que
de colocarlo en la platina es más azul de lo normal
del microscopio a veces puede indicar que un
puede proporcionar al aumento de las proteínas
examinador indicios de sanguíneas en el paciente,
alteraciones o de pruebas como sucede en el mieloma
que necesitan repetirse. múltiple, y pueden verse
rouleaux en el frotis
Agujeros dispersos en todo
el frotis puede significar que
el paciente tiene un
Un aspecto granular del aumento de las
frotis puede indicar concentraciones de lípidos,
aglutinación de eritrocitos, y que algunos de los
como se encuentra en las parámetros del recuento
enfermedades por globular completo
criohemaglutininas. automatizado deben de ser
controlados para las
interferencias que causa la
lipemia.
 Examen microscópico
Para este examen el microscopio debe
calibrarse en forma correcta para la evaluación
del frotis de sangre. La luz debe centrarse de
manera adecuada
El condensador debe estar elevado casi por
completo y con la calibración correcta para el
aumento que se use y el diafragma debe
abrirse para permitir la entrada de una
cantidad de luz que resulte confortable para el
ojo.
 Puede evaluar la cantidad global del
frotis, el color y la distribución de las Con el objetivo de 10x es posible
células. verificar la presencia de filamentos de
Puede revisar de modo rápido el borde fibrina; si se observan, la muestra debe
plumoso y los bordes laterales para rechazarse y obtenerse otra
verificar la distribución de los leucocitos.
LA EVALUACIÓN DEL
FROTIS CON EL
OBJETIVO DE 10X O
DE BAJO AUMENTO

También puede notarse la distribución Puede realizarse un barrido rápido del

de los eritrocitos. La formación de frotis para detectar grandes celulas
rouleaux o la aglutinación de los anormales, como blastos, linfocitos
eritrocitos es fácil de reconocer con reactivos o incluso parásitos
este aumento inesperados.

Con este aumento, es fácil seleccionar la
zona correcta del frotis en la que se debe
empezar el recuento diferencial y evaluar
la morfología celular. Asimismo, puede
realizar una estimación de los leucocitos
Asimismo, puede realizar una estimación
de los leucocitos. Para ello, el evaluador
selecciona una zona en la que los
eritrocitos estén superpuestos de a 2 o 3,
pero en la que la mayoría de los
eritrocitos estén separados entre sí.

LA EVALUACIÓN DEL
FROTIS CON EL
OBJETIVO DE 40X
Por ejemplo, si después de examinar 8-10
campos se determinan que hay 4 a 5
El número de los leucocitos por campo de leucocitos por campo, la estimación del
gran aumento se multiplica por 2.000 recuento leucocitario seria de 8.000 a
para obtener una aproximación adecuada 10.000/mm³. Esta técnica puede ser muy
del recuento de leucocitos. útil para el control de calidad interno,
aunque hay errores inherentes al proceso.
 Este es el aumento más alto de la mayoría de los La evaluación de la morfología de los eritrocitos,
microscopios binoculares estándares. El recuento los leucocitos y las plaquetas y la estimación del
diferencial de leucocitos suele realizarse con un
número de plaquetas también se hacen con el
objetivo de 100x de inmersión en aceite. Para objetivo 100x de inmersión en aceite.
realizar la formula diferencial se cuentan y
clasifican 100 leucocitos para obtener porcentajes
de los tipos de leucocitos.
EXAMEN CON
OBJETIVO DE
INMERSIÓN EN ACEITE
100X.
Con este aumento los neutrófilos segmentados
pueden diferenciarse con facilidad de las formas Además de celulas reactivas o anormales y si están
en banda. Se pueden ver las inclusiones de los presentes, los eritrocitos nucleados se encuentran
eritrocitos, como los cuerpos de Howell-Jolly, y las e informan como eritrocitos nucleares/100
inclusiones de los leucocitos, como los cuerpos de leucocitos.
Dohle, si están presentes.
 El examen con este aumento es
El campo más grande de visión permite especialmente eficaz para validar o
evaluar más celulas de un modo más verificar valores del instrumento
rápido. cuando no es necesario realizar la
evaluación microscópica total del frotis.
EXAMEN CON
OBJETIVO DE
INMERSIÓN EN
ACEITE 50X.
Ciertas características celulares pueden
necesitar un aumento mayor por lo La estimulación de leucocitos también
que se evalúan mediante el puede realizarse con este objetivo, si
desplazamiento del objetivo 100x en el bien el factor de multiplicación seria
revolver para luego regresar al objetivo 3.000.
al objetivo de 50x continuando con el
recuento diferencial.
 Es necesario que las tareas recién descritas para los objetivos 100x, 40x, y 50x se realicen
en la mejor zona posible del frotis de sangre periférica, que se encuentra entre la zona
espesa, o “base” donde inicialmente se coloca la gota de sangre para extenderla, y el borde
plumoso muy delgado.

Ya en la microscopía los eritrocitos están distribuidos de modo uniforme y se encuentran

separados, con algunos que se tocan o superponen y tienen su aspecto bicóncavo (palidez
Área central).

Óptima Es inaceptable un área demasiado delgada en la que hay agujeros en el frotis y los
eritrocitos se ven planos, grandes y distorsionados.
de
evaluación
Si el área es demasiado espesa, también distorsiona los eritrocitos, que se amontonan uno
encima de otro, en pilas de monedas (rouleaux). Los leucocitos se distorsionan de forma
similar, lo que dificulta la evaluación morfológica y es probable que la clasificación sea
incorrecta.

Cuando se observa una zona adecuada de una muestra de un paciente con un recuento de
eritrocitos normal, suele haber alrededor de 200 a 250 eritrocitos por campo de inmersión
en aceite 100x.
 Realización de la fórmula de leucocitos

Una vez
seleccionada la
En la actualidad se
zona correcta, debe
realizan escasas
leerse siguiendo un
fórmulas Se cuentan 100
patrón hacia
diferenciales leucocitos y se
adelante y atrás en
manuales, debido a clasifican mediante
serpentina o en
la exactitud contadores a botón
“almena”, para
superior que tienen o los más
disminuir al mínimo
los recuentos modernos teclados
los errores de
diferenciales conectados a
distribución y
automáticos y a ordenadores.
asegurarse que
razones de costo y
cada célula se
de tiempo.
cuenta solo una
vez.
 Realización de la fórmula de leucocitos

Los Es útil para la

En otros
resultados se para examinar
laboratorios
informan la morfología
se cuentan 50
como de las células,
celulas y se
porcentajes: pero no se El método
multiplican
por ejemplo, recomienda exacto con el
los resultados
54% de para realizar que se
por 2 para
neutrófilos formulas informan
conseguir un
segmentados, diferenciales estos
porcentaje.
6% de formas por los elementos
Debe evitarse
en banda, posibles varía entre los
ya que la
28% de errores en la laboratorios
exactitud de
linfocitos, 9% distribución
esta práctica
de monocitos, celular por la
es
3% de centrifugación
cuestionable.
eosinófilos. .
Morfología
de los La morfología de los eritrocitos es una
eritrocitos. parte importante de la evaluación del
frotis de sangre, que incluye la evaluación
del tamaño (anisocitosis), el color de la
célula, la forma (poiquilocitosis) y las
inclusiones celulares.

Algunos laboratoristas usan terminología

específica para informar la morfología
anormal, como “ligera”, “moderada” o
“marcada”, o una escala de 1+ a 3+.
 Estimación de las plaquetas
En un área del frotis en la que los eritrocitos apenas se toquen entre sí, se cuenta el número
promedio de plaquetas por campo en aceite de inmersión por 20.000 es aproximadamente el
recuento de plaquetas por mm³.
Por ejemplo, contar 12-16 plaquetas por campo de
inmersión sería equivalente a cerca de 280.000
plaquetas/mm³ y se considera adecuado
En estos casos, puede usarse una
fórmula más complicada para las
En situaciones que el paciente
estimulaciones de las plaquetas:
esta anémico o tiene eritrocitosis,
las proporciones relativas de Número promedio de plaquetas x
plaquetas a eritrocitos se alteran. Recuento total de eritrocitos ÷
200 eritrocitos/campo
Una situación más grosera es
decir que si hay 7-25 plaquetas
por campo en aceite de
inmersión, el recuento de
plaquetas es adecuado, siempre y
cuando haya alrededor de 200
eritrocitos por campo.
El frotis de sangre también
incluye la evaluación de la
morfología de las plaquetas, que
comprende la granularidad y el
aspecto global.
Características de un frotis de sangre
periférica bien teñido:
El citoplasma de los
los eritrocitos deben
un frotis de sangre neutrófilos debe ser de
tener un color
bien teñido debe ser color rosa a bronceado
anaranjado a rosa
de color rosa púrpura. con gránulos de color
salmón
violeta o lila

Los eosinófilos deben

los núcleos de los
tener gránulos
leucocitos deber ser de
refringentes
púrpura a azules.
anaranjados brillantes

Resumen de los parámetros
de los leucocitos
Los parámetros relacionados con los
leucocitos del hemograma completo
son:
1.-Recuento total de los leucocitos
(leucocitos x)
Valores del recuento diferencial de
leucocitos expresados como
porcentajes: recuentos relativos.
2.-Valores del recuento diferencial de
leucocitos expresados como el número
real de cada tipo de células
3.-Morfología de los leucocitos
PASO 1: Se comienza por asegurar que el recuento de los leucocitos es
exacto.
PASO 2: Observar el recuento total de leucocitos. Cuando este se eleva, se
denomina leucocitosis; cuando este disminuye, se denomina leucopenia.
PASO 3:Examinar los recuentos diferenciales relativos para una evaluación
preliminar de las líneas celulares que están afectadas. Estos se expresan en
porcentajes.
PASO 4: Si el instrumento no los informa, los recuentos absolutos se pueden
calcular de forma sencilla mediante el recuento total de leucocitos y el valor
diferencial relativo
PASO 5: Cada línea celular debe examinarse en cuanto a las células
inmaduras. Los linfocitos jóvenes no pueden verse en sangre periférica y
pueden indicar infecciones o enfermedades malignas como la leucemia.
PASO 6: En la sección sobre morfología se informan las alteraciones del
aspecto. En caso de los leucocitos, las características morfológicas
anormales que se señalan son cambios en el aspecto celular general.
 PASO 1: Examinar la hemoglobina para determinar anemia o policitemia. La
Resumen de los concentración de la hemoglobina es un indicador más fiable de la anemia que el
parámetros de los hematocrito, debido a que este último puede estar influenciado por el tamaño de
los hematíes.
eritrocitos
PASO 2: Una vez inspeccionados los valores de hemoglobina y hematocrito y
aplicada la regla de tres, el siguiente parámetro eritrocítico que debe ser evaluado
es el VCM. Este valor proporciona el volumen promedio del eritrocito.
Los parámetros eritrocíticos son:
1.-Recuento de eritrocitos (eritrocitos PASO 3: Examinar la CHCM para evaluar cuán bien las células están plenas de
x) hemoglobina. Si el volumen corpuscular medio está por debajo del rango de
2.-Hb (g/dL) referencia, las células se denominan hipocrómicas.
3.-Hct (% o L/L) PASO 4: La amplitud de distribución eritrocítica (RDW) se determina a partir del
4.-Volumen corpuscular medio (VCM, histograma de volúmenes eritrocíticos .Cuando el volumen de los eritrocitos es
fl) variable el histograma se torna más ancho. La RDW proporciona información
5.-Hemoglobina corpuscular media sobre la presencia y grado de anisocitosis.
(HCM, pg)
PASO 5: Examinar la morfología para determinar alteraciones pertinentes. Las
6.-Concentración hemoglobínica alteraciones incluyen 1) tamaño anormal, 2) forma anormal, 3) inclusiones, 4)
corpuscular media (CHCM, % o g/dL) eritrocitos jóvenes, 5) color anormal y 6) disposición anormal.
7.-Amplitud de la distribución de los
hematíes (RDW, %)
8.-Morfología PASO 6: Examinar el restante de eritrocitos y la HCM. En un nivel práctico, el
recuento de eritrocitos no es el parámetro que se utiliza para juzgar la anemia, ya
que hay algunos tipos de anemia.
 Resumen de los
parámetros de las
plaquetas
Los parámetros plaquetarios del
hemograma completo son:
Recuento de plaquetas: (plaquetas x)
Volumen plaquetario medio (VPM, fL)
Morfología
PASO 1: El recuento de plaquetas debe ser examinado para determinar los
incrementos (trombocitosis) o disminuciones (trombocitopenia) fuera del
rango de referencia establecido.
PASO 2: Comparar el VPM generado por el instrumento con el rango de
referencia del VPM, 6,09 a 10,2 fL, y con el diámetro de plaquetas
observado en el frotis de sangre periférica. Un VPM elevado se debe
corresponder a un aumento del diámetro de plaquetas.
PASO 3: Examinar la morfología y la disposición de las plaquetas.
Aunque el VPM puede reconocer plaquetas anormalmente grandes, la
evaluación morfológica también registra esto.