CUADERNO DE

PRÁCTICAS
 1º FUNDAMENTOS TEÓRICOS

Una cámara de Neubauer o hemocitómetro es un instrumento utilizado en medicina ybiología

para realizar el recuento de esporas y células en un medio líquido, que puede ser; un cultivo
celular, sangre, orina, líquido cefalorraquídeo, líquido sinovial, etc.

Esta cámara de recuento está adaptada al microscopio de campo claro o al de contraste de

fases. Se trata de un portaobjetos que tiene dos zonas ligeramente deprimidas en cuyo

fondo se ha marcado con la ayuda de un diamante una cuadrícula de dimensiones

conocidas. Se cubre la cámara con un cubreobjetos que se adhiere por simple tensión

super cial (en especial una vez que se haya añadido la muestra líquida).

En las cámaras de Neubauer, existen una subdivisión en 9 cuadrantes, de los cuales

resultan de utilidad solo los 4 cuadrantes laterales de L1, L2, L3 y L4 (para el conteo de

los leucocitos) y el cuadrante central (H total, que se subdivide a su vez en H1, H2, H3,

H4 y H5 para el conteo de los hematíes (eritrocitos).

Los eritrocitos son un tipo de glóbulo sanguíneo (célula de la sangre) que se produce en la
médula ósea y se encuentra en la sangre. Los eritrocitos contienen una proteína llamada
hemoglobina, que transporta oxígeno desde los pulmones a todas las partes del cuerpo. El
número de eritrocitos en la sangre es uno de los componentes de una prueba llamada recuento
sanguíneo completo (RSC), que se usa para determinar la presencia de afecciones como la
anemia, la deshidratación, la desnutrición y la leucemia. También se llama glóbulo rojo, GR y
hematíe.

Para efectuar el recuento de hematíes, la sangre total anticoagulada con EDTA se diluye

en una proporción de 1/200, con un diluyente isotónico que evite la lisis de los hematies.

El diluyente más utilizado es el líquido de Hayem. Este es una solución para hematología
compuesta por sales, las cuales hacen que la solución tenga el grado de isotonía necesario para
que los eritrocitos se mantengan completos, mientras que los leucocitos se lisan por acción de la
concentración de la solución al penetrar en el núcleo.

2º MATERIALES

- Cámara de Neubauer

- Cubreobjetos

- Microscopio

- Papel de ltro

- Guantes

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- Muestra de sangre

- Gradilla

- Pipeta de 100-1000μl (naranja)

- Pipeta de 0,5-10μl (roja)

- Puntas de Micro-pipetas

- Líquido de Hayem

- Tubo de eppendorf

- Una gota de agua

3º PROCEDIMIENTO

En primer lugar homogeneizamos la sangre anticoagulada moviéndola con movimientos poco

bruscos. Hacemos la disolución 1:200 con la ayuda de la pipeta de 100-1000μl, colocamos una
punta transparente y ponemos la medida de 995μl y introducimos la pipeta en el líquido de
Hayem y echamos el contenido en un tubo de eppendorf, seguidamente cogemos la pipeta de
0,5-10μl , colocamos su punta, ponemos la medida 5μl y cogemos la sangre que rápidamente
echaremos en el tubo eppendorf.

Tiramos las puntas contaminadas a un contenedor del laboratorio y volvemos a homogeneizar la

disolución del tubo.

Colocamos en cubreobjetos (que es más grueso que los que se usan

habitualmente) encima de la cámara de Neubauer y para que este no se
nos mueva, nos mojamos el dedo meñique y lo pasamos por la
esquinas, esto hace que el cubre se “pegue” a la cámara. Conectamos el
microscopio, bajamos la platina y colocamos la cámara.

Tomamos 10μl de la muestra ya diluida con ayuda de la pipeta de

0,5-10μl y depositemos con suavidad en la parte central de la cámara de
recuento. Apoyamos la punta de la pipeta en el lateral inferior del
cubreobjetos y trata de introducir la muestra poco a poco para evitar que
se formen burbujas o se desborde.

Una vez que tenemos la muestra lista para observar en el microscopio

con la platina ya subida y con el objetivo azul x40 enfocamos
correctamente hasta que seamos capaces de hacer el recuento, que
esto se efectúa en el cuadrado primario central, en concreto se cuentan 5
cuadrados secundarios: las 4 esquinas y 1 de los centrales. Para evitar contar repetidamente los
mismos eritrocitos, solo se cuentan los que están contenidos dentro del cuadrado y los que están
en contacto con sus líneas de demarcación

superior o derecha.

4º OBJETIVO

El objetivo de esta práctica es aprender a utilizar la cámara de Neubauer correctamente y saber

contar los eritrocitos desde el microscopio.

5º RESULTADOS

 6º INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

En la primera foto contamos un total de 101 eritrocitos, en la segunda 112, en la tercera 136, en
la cuarta 102 y en la última 93.

Al aplicar la fórmula RBC/μl= Número de hematíes contados en los 5 cuadrados x104

RBC/μl= (101+112+136+102+93)×(104 )

RBC/μl= 5440000

5,44x106/μl

¿Cómo se hace el conteo de eritrocitos?

Hay que contar todas las células que están dentro de cada cuadrado mediano y aquellas que
están tocando los lados superior y derecho de dicho cuadrado (aunque estén parcialmente fuera).
Siguiendo este criterio, en la gura se contarían las células en color verde, y no se contarían las
células en color rojo.

7ºPREGUNTAS

• ¿Has realizado el contaje de eritrocitos viables, no viables o totales? ¿Por qué

Hicimos el contraje de eritrocitos totales, porque no hemos teñido la sangre analizada.

• Si únicamente quisieras contar los eritrocitos viables ¿qué tendrías que hacer?
Explica justi cadamente tu respuesta.
Teñir la muestra y homogeneizarla.

• ¿Qué ocurriría si el líquido de dilución no fuese isotónico?

Una célula en ambiente hipotónico se hincha con el agua y puede explotar, esto haría que no
pudiéramos observar correctamente la muestra, en cambio, cuando los glóbulos rojos están en
una solución hipertónica, para igualar concentración liberan agua, quedándose «secos», lo que
provoca su muerte.

8º FOTOS

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 IDENTIFICACIÓN DE FASES MITÓTICAS EN

CEBOLLA

1º FUNDAMENTOS TEÓRICOS

Uno de los postulados de la teoría celular nos dice que todas las células vienen

de células preexistentes. Por lo que las células se originan de otras células por

división celular. En el caso de las células procariotas el proceso de división

celular que se lleva a cabo es la sión binaria. En el caso de las células eucariotas se conocen
dos procesos de división celular, la mitosis y la meiosis. La mitosis produce células hijas con el
mismo complemento cromosómico que la célula original, siendo un proceso que en el caso de
los organismos unicelulares es un mecanismo de reproducción. Para los organismos
pluricelulares la mitosis es una forma de producir células somáticas nuevas. La meiosis es un
proceso de división celular que reduce a la mitad el complemento cromosómico y es utilizado por
los organismos para la formación de gametos.

En las plantas superiores el proceso de formación de nuevas células ocurre en regiones de

crecimiento conocidos como los meristemos. Estas se encuentran mayormente en la punta de los
tallos o de las raíces, por lo que concentraremos nuestro estudio en la raíz de la cebolla. La
cebolla (Allium cepa) es una buena planta para el estudio de la mitosis ya que germinan
fácilmente y desarrollan raíces que crecen rápidamente.

El ciclo celular consiste en una secuencia de eventos en la vida de una célula y se compone de
dos etapas principales: interfase y mitosis. La etapa de no-división de la célula se conoce como
la interfase y se caracteriza porque el núcleoestá intacto y es fácilmente visible. En el interior del
núcleo pueden identi carse la cromatina y el nucleolo. Es durante la interfase que las células
llevan a cabo procesos relacionados al mantenimiento de su homeostasis. La mitosis, etapa de
división celular, se divide en cuatro fases fácilmente identi cables; profase, metafase, anafase y
telofase. En la célula que está en profase temprana observarás que la red de cromatina comienza
a condensarse para formar los cromosomas. También observarás que la membrana nuclear no
está completa porque ya había comenzado a desaparecer. En la profase tardía ya se ven
formados los cromosomas y desaparece por completo el nucleolo y la membrana

nuclear. Se puede ver el huso mitótico formado. En la metafase observarás que los cromosomas
están bien condensados y se encuentran todos alineados en el plano ecuatorial. En esta fase se
pueden contar los cromosomas, las células de Allium cepa tienen 16 cromosomas. En la anafase
verás que los cromosomas han migrado hacia los polos y ha desaparecido parte del huso
mitótico. En la telofase ya se observan las dos células hijas. El citoplasma se divide cuando se

forma la placa celular, ésta sólo se forma en la célula vegetal. Se ha reorganizado el núcleo de la
célula y pueden verse la membrana nuclear y el nucleolo.

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 2º MATERIALES

- Microscopio óptico

- Pinzas

- Bisturí

- Portaobjetos

- Cubreobjetos

- Etanol

- Taza

- Mechero

- Guantes

- Azul de metileno

- Vaso de precipitados

- Cebolla

3º PROCEDIMIENTO

Desarrollo de la práctica:

En primer lugar con la ayuda de un bisturí cortamos una parte del extremo de la raíz (2-3 cm) y
un cacho de piel de cebolla que previamente el profesor había puesto a remojo 3-4 días en un
vaso de precipitados lleno de agua sujeto con uno o dos palillos.

En una taza echamos etanol y sumergimos estas raíces durante 5-10 minutos, una vez pasado el
tiempo con ayuda de unas pinzas la sacamos y la ponemos sobre un porta , mientras,
aplastamos la raíz con un cubre.

Una vez aplastada la muestra la teñimos con azul de metilano, vertiendo sobre esta con ayuda de
una pipeta unas gotas, esperamos un par de minutos y retiramos el tinte sobrante con una pipeta
y agua, una vez limpia nuestra muestra la secamos pasándola por el mechero.

Colocamos el cubre y la visualizamos al microscopio.

Hicimos los mismos pasos con la piel y comparamos los resultados vistos en la raíz y en la capa
interna de la cebolla.

Nuestras muestras se vieron muy bien usando el objetivo azul (x40) pero teñimos mucho la piel de
la cebolla y se nos hizo complicado lograr enfocar la muestra pero con ayuda de Pablo logramos
verla bien, lo que mi compañera y yo estábamos haciendo mal era colocar la platina muy cerca
del objetivo y eso hacía que no se lograra ver en condiciones.

4ºOBJETIVO

Identi car las diferentes fases metóticas de la Cebolla e identi car si se ve más en la raíz o en la
piel de la cebolla.

5º RESULTADO

Se debería ver más divisiones en la raíz que en la piel de la cebolla.

6ºPREGUNTAS

1.¿Por qué los cromosomas se tiñen de morado?

Para poder ver los los cromosomas con un microscopio, es necesario teñirlos. Cuando se los
tiñe, los cromosomas parecen tiras con "bandas" claras y oscuras.

2.¿Observaste más células en división en la raíz o en las capas internas de la

cebolla? ¿Es esto coherente? ¿Por qué?
En la raíz de la cebolla, ya que en esta se observa nítidamente la separación entre células
adyacentes (límites intercelulares) debido a la presencia de la pared celular (de celulosa) por fuera
de la membrana celular. La mayoría de estas células están en interfase. En cambio,las células de
la epidermis de cebolla son de forma alargada y bastante grandes. La membrana celular
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 celulósica se destaca muy clara, teñida por el colorante. Los núcleos son granates y visibles, en
el interior de los mismos se puede llegar a percibir granulaciones, son los nucléolos.

3.Busca información: ¿Cómo se consiguen en los estudios de cariotipado de

humanos que nuestras células estén en división?
El primer paso para realizar el análisis del cariotipo de un individuo es tomar muestras de alguno
de sus tejidos. Normalmente se toma una muestra de sangre, pero también es posible hacer el
cariotipo de muestras de médula ósea.Una vez obtenida la muestra, realizaremos un cultivo
celular en el medio adecuado.

A partir de estos cultivos celulares, se obtienen células en división. Esto es muy importante,
porque los cromosomas sólo son visibles durante la división celular, también conocida como
mitosis. Si se tomasen muestras de células que se encuentran fuera de la mitosis, su ADN estaría
en forma de cromatina y no se podría ver ninguna anomalía numérica o estructural. Para evitar
esto, las células son tratadas con colchicina, un compuesto que detiene la mitosis en cierto punto
de la metafase, lo que hace que las células queden en una especie de división paralizada para
siempre.

Una vez obtenidas las muestras de los cultivos celulares, se tiñen con tintes especí cos para
ácidos nucleicos, que tiñen de diferente forma cada región de los cromosomas, dependiendo de
su composición en cuanto a bases nitrogenadas. Esto hace posible que los cromosomas se
puedan ver correctamente en el microscopio, a la vez que permite distinguir diferentes bandas en
el ADN.

Una vez teñidas, las muestras son fotogra adas bajo el microscopio y los cromosomas son
ordenados por tamaño y colocados junto a sus homólogos. De este modo, se obtendría un
cariograma

7ºFOTOS

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 IDEOGRAMA HUMANO

1º FUNDAMENTOS TEÓRICOS

El conjunto de cromosomas de un individuo constituye su cariotipo. En 1956 Tjio y

Levan demostraron que el cariotipo humano está formado por 46 cromosomas, o lo

que es igual,23 parejas. Para estudiar los cromosomas humanos se cultivan linfocitos

y mientras se están dividiendo se tratan con colchicina, que interrumpe las mitosis en

metafase, que es el momento más adecuado para observar los cromosomas. Después

se someten a una solución hipotónica para que se hinchen y dispersen, y por último se

tiñen con orceína acética y se fotografían a través del microscopio.

Los cromosomas se diferencian por su tamaño y por su forma; en 1960 un grupo de

expertos acordó ordenar los cromosomas humanos de mayor a menor tamaño, y

dentro del mismo tamaño, por la posición del centrómero. Se clasi can después en 7

grupos designados por las letras A a G. Un idiograma es la representación

esquemática del tamaño, forma y patrón de bandas de todo el complemento

cromosómico, los cromosomas se sitúan alineados por el centrómero, y con el brazo

largo siempre hacia abajo.

Análisis cromosómico
Prácticamente todos los análisis citogenéticos de rutina se realizan sobre preparaciones
cromosómicas que se han tratado y teñido para producir un patrón de bandas especí co de cada
cromosoma. Esto permite la detección de cambios sutiles en la estructura de los cromosomas. El
tratamiento de tinción más común se llama bandeo G. Se dispone de otras técnicas de tinción
que ayudan a identi car anomalías especí cas. Una vez que se han obtenido las preparaciones
de cromosomas metafásicos teñidos, pueden examinarse al microscopio. Típicamente, se
observan y se cuentan entre 15 y 20 células, con un análisis completo de al menos 5 de ellas.
Durante un análisis completo, cada cromosoma se compara críticamente banda por banda con
su homólogo. Es necesario examinar tantas células para poder detectar un mosaicismo, con
signi cado clínico (véase más abajo).

Tras el análisis al microscopio, se toman imágenes de aquellas células en metafase que tengan
mejor calidad, bien mediante fotografía o por digitalización de imagen computerizada. Los
cromosomas pueden entonces disponerse en pares de acuerdo con su tamaño y su patrón de
bandas, constituyendo así un cariotipo. Éste permite al analista citogenético examinar aún más
en detalle cada cromosoma en busca de cambios estructurales. Se hace entonces una
descripción por escrito del cariotipo, de niendo así el análisis cromosómico.

Cromosomas normales
Las células somáticas humanas  normales tienen 46 cromosomas:
22 pares de cromosomas homólogos o autosomas (los
cromosomas 1 a 22) y dos cromosomas sexuales. A esto se le
llama el número diploide (2n). Las mujeres tienen dos cromosomas
X (46,XX) mientras que los varones tienen un X y un Y (46,XY). Las
células germinales (óvulo y espermatozoide) tienen 23
cromosomas: una copia de cada autosoma más un solo
cromosoma sexual. A esto se le llama el número haploide (n). Se
hereda de cada progenitor un cromosoma de cada par autosómico
y un cromosoma sexual. Las madres sólo pueden aportar un
cromosoma X a sus hijos e hijas, mientras que los padres pueden
aportar bien un X (a sus hijos) o bien un Y (a sus hijas).

Anomalías cromosómicas
Aunque las anomalías cromosómicas pueden ser muy complejas,
hay dos tipos básicos: numéricas y estructurales. Ambos tipos
pueden darse simultáneamente. 

Las anomalías numéricas implican la pérdida o la ganancia de uno

o varios cromosomas completos, y pueden afectar tanto a
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 autosomas como a cromosomas sexuales. Las células que han perdido un cromosoma presentan
monosomía para ese cromosoma, mientras que aquéllas con un cromosoma extra muestran
trisomía para el cromosoma implicado. Generalmente, la pérdida de cromosomas en un individuo
tiene mayor repercusión que la ganancia, aunque ésta también puede tener consecuencias
graves. Casi todas las monosomías autosómicas llevan a la muerte poco después de la
concepción y sólo unas pocas trisomías permiten llegar al nacimiento. La anomalía autosómica
numérica más frecuente es el síndrome de Down o trisomía 21. Los individuos con trisomía en los
cromosomas 13 o 18 pueden también sobrevivir hasta el nacimiento, pero están más
severamente afectados que aquéllos con síndrome de Down. Curiosamente, los individuos con
una condición llamada triploidía, en la cual hay una copia extra de todos los cromosomas (69 en
total), pueden ocasionalmente sobrevivir hasta el nacimiento, aunque habitualmente mueren
durante el periodo neonatal. 

Otra regla general es que la pérdida o ganancia de un autosoma tiene consecuencias más graves
que la de un cromosoma sexual. La anomalía de cromosomas sexuales más común es la
monosomía del cromosoma X (45,X) o síndrome de Turner. Otro ejemplo bastante común es el
síndrome de Klinefelter (47,XXY). Aunque hay variaciones considerables dentro de cada
síndrome, los individuos afectados a menudo llevan vidas bastante normales. 

En ocasiones, un individuo porta un cromosoma extra que no se puede identi car por su patrón
de bandas; a éstos se les llama cromosomas marcadores. La introducción de las técnicas FISH
ha sido de gran ayuda en la identi cación de estos cromosomas marcadores.

Las anomalías estructurales implican cambios en la estructura de uno o varios cromosomas.

Pueden ser increíblemente complejas, pero para el propósito de esta discusión nos centraremos
en tres de los tipos más comunes:

•Las deleciones implican la pérdida de material de un solo cromosoma. Habitualmente los

efectos son graves, puesto que hay pérdida de material genético.

•Las inversiones tienen lugar cuando se dan dos cortes dentro de un mismo cromosoma,
el segmento intermedio gira 180° (se invierte) y se vuelve a unir, formando un cromosoma que
estructuralmente tiene la secuencia cambiada. Normalmente no hay riesgo de problemas para el
individuo si la inversión es de origen familiar (es decir, se ha heredado de uno de los
progenitores). Hay un riesgo algo mayor si es una mutación de novo (nueva), debido a que
posiblemente se haya interrumpido alguna secuencia clave de un gen. Aunque el portador de una
inversión puede ser completamente normal, tiene un riesgo ligeramente mayor de producir un
embrión con un desequilibrio cromosómico. Esto se debe a que un cromosoma invertido tiene
di cultad para emparejarse con su homólogo normal durante la meiosis, lo que puede conducir a
un entrecruzamiento desigual que producirá gametos con derivados cromosómicos
desequilibrados.

•Las translocaciones suponen el intercambio de material entre dos o más cromosomas. Si

una translocación es recíproca (equilibrada) el riesgo de problemas para el individuo es similar al
de las inversiones: normalmente nulo si es familiar y ligeramente mayor si es de novo. Sí surgen
problemas cuando una translocación, a partir de un progenitor equilibrado, conduce a gametos
que no contienen ambos productos de la translocación. Cuando tal gameto se combina con un
gameto normal del otro progenitor, el resultado es un embrión desequilibrado que es
parcialmente monosómico para un cromosoma y parcialmente trisómico para el otro.

Las anomalías numéricas y estructurales se pueden dividir a su vez en dos categorías principales:
constitutivas, aquéllas con las que se nace, y adquiridas, las que surgen como cambios
secundarios a otras enfermedades, tales como el cáncer.

A veces se encuentran personas que tienen tanto líneas celulares normales como anormales. A
estos individuos se los denomina mosaicos y en la inmensa mayoría de los casos la línea celular
anormal tiene una anomalía cromosómica numérica. Los mosaicos estructurales son muy poco
frecuentes. El grado en el cual un individuo resulta afectado clínicamente depende habitualmente
del porcentaje de células anormales. Un análisis citogenético de rutina incluye típicamente el
examen de al menos 15 o 20 células, con el n de descartar cualquier mosaicismo clínicamente
signi cativo. 

Éstas son sólo algunas de las anomalías más comunes que se encuentran en un laboratorio de
citogenética. Puesto que el número de posibilidades anormales es casi in nito, se debe preparar
al analista citogenético para detectar e interpretar cualquier anomalía cromosómica que pueda
tener lugar.

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 2º MATERIALES

- Tijeras

- Papel

- Pegamento

- Folios con los cromosomas

3º PROCEDIMIENTO

Obtenemos el cultivo el cual vamos a observar, le hechamos Colchicina que

esto hace el sacri cio celular y se queda en metafase con los cromosomas
alineados. Los observamos y ordenamos de forma que queden:

4º OBJETIVO

El objetivo de esta prácticas es averiguar el cariotipo de tres individuos diferentes para ver si
presentan alguna anomalía cromosómica provocando un síndrome.

5º RESULTADOS

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 6º INTERPRETACIÓN DE RESULTADO

INDIVIDUO 1

• Sexo: Varón
• Anomalía cromosómica: Ninguna
• Síndrome: Ninguna

INDIVIDUO 2

• Sexo: Mujer
• Anomalía cromosómica: Ninguna
• Síndrome: Ninguna

INDIVIDUO 3

• Sexo: Varón
• Anomalía cromosómica: Trisomía 21
• Síndrome: Síndrome de Down

¿Qué es la Trisomía 21 o Síndrome de Down?

El síndrome de Down es una afección en la que la persona tiene un cromosoma extra. Los
cromosomas son pequeños “paquetes” de genes en el organismo. Determinan cómo se forma el
cuerpo del bebé durante el embarazo y cómo funciona mientras se desarrolla en el vientre
materno y después de nacer. Por lo general, los bebés nacen con 46 cromosomas. Los bebés
con síndrome de Down tienen una copia extra de uno de estos cromosomas: el cromosoma 21.
El término médico de tener una copia extra de un cromosoma es ‘trisomía’. Al síndrome de Down
también se lo llama trisomía 21. Esta copia extra cambia la manera en que se desarrollan el
cuerpo y el cerebro del bebé, lo que puede causarle tanto problemas mentales como físicos.

Aun cuando las personas con síndrome de Down pueden actuar y verse de manera similar, cada
una tiene capacidades diferentes. Las personas con síndrome de Down generalmente tienen un
coe ciente intelectual (una medida de la inteligencia) en el rango de levemente a moderadamente
bajo y son más lentas para hablar que las demás.

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Algunas características físicas comunes del síndrome de Down incluyen:

• Cara aplanada, especialmente en el puente nasal

• Ojos en forma almendrada rasgados hacia arriba

• Cuello corto

• Orejas pequeñas

• Lengua que tiende a salirse de la boca

• Manchas blancas diminutas en el iris del ojo (la parte coloreada)

• Manos y pies pequeños

• Un solo pliegue en la palma de la mano (pliegue palmar)

• Dedos meñiques pequeños y a veces encorvados hacia el pulgar

• Tono muscular débil o ligamentos ojos

• Estatura más baja en la niñez y la adultez

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