EFECTOS DE GEL A BASE DE PAPAÍNA

UTILIZADO PARA LA ELIMINACIÓN DE

CARIES EN MACRÓFAGOS Y CÉLULAS DE
LA PULPA DENTAL

DANNY GERMAN PARRA MORENO

ESTUDIANTE DE REHABILITACIÓN ORAL
UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE MANIZALES
 EL GEL A BASE DE PAPAÍNA

• ELIMINACIÓN QUÍMICO-MECÁNICA DE CARIES

• PRESENTA ACTIVIDADES ANTIMICROBIANAS Y ANTIINFLAMATORIAS.

• EFECTOS SOBRE LAS CÉLULAS DE LA PULPA DENTAL Y LOS MACRÓFAGOS

SIGUEN SIENDO EN GRAN PARTE DESCONOCIDOS.
 PAPAIN
A
• ENZIMA PROTEOLÍTICA QUÉ INTERACTÚA CON
EL COLÁGENO PARCIALMENTE DEGRADADO
PRESENTE EN EL TEJIDO NECRÓTICO CARIOSO.
• ES UNA ENDOPROTEÍNA SEMEJANTE A LA
PEPSINA HUMANA
• PROPIEDADES ANTIMICROBIANAS
• ACTIVIDAD BACTERICIDA
• BACTERIOSTÁTICA
• ANTIINFLAMATORIA
• VENTAJAS COMO: CALIDAD Y ACTIVIDAD
ENZIMÁTICA
 PAPACARIE DUO

• 1975 Y EN 2002
• ACTÚA APENAS EN EL TEJIDO LESIONADO
DEBIDO A LA AUSENCIA DE UNA ANTIPROTEASA
PLASMÁTICA,
• LA Α1-ANTI-TRIPSINA,

• LA Α1-ANTI-TRIPSINA INHIBE LA DIGESTIÓN DE

PROTEÍNAS.
• DEGRADACIÓN Y ELIMINACIÓN DE LA "CAPA"
DE FIBRINA FORMADA POR EL PROCESO DE
CARIES
 OBJETIVO:

• PAPACÁRIE DUO® ACTÚA COMO INMUNOMODULADOR EN MACRÓFAGOS

ACTIVADOS POR LIPOPOLISACÁRIDOS (LPS) Y SUS EFECTOS SOBRE LAS CÉLULAS
DE LA PULPA DENTAL.
• CITOTOXICIDAD
• VIABILIDAD
• DIFERENCIACIÓN EN CÉLULAS DE LA PULPA

El éxito de la remoción de
caries químico-mecánica
• El diámetro de los túbulos varia en relación de
la distancia a la cámara pulpar
• materiales biocompatibles y que tengan
propiedades antiflamatorias ideales.
• SELECTIVIDAD DE REMOVER EL TEJIDO
CAREADO
• REDUCE LA CARGA BACTERIAL EN LA
CAVIDAD SIN REMOVER DEL TEJIDO QUE ES
CAPAZ DE REMINERALIZARSE.
• MINIMIZAR LA PERCEPCIÓN
DESAGRADABLE
• MINIMIZAR EL NUMERO DE
INTERVENCIONES
• MAXIMIZAR LA PRESERVACIÓN DE LOS
TEJIDOS DENTALES DURANTE LA
REMOCIÓN CARIOSA,
 MATERIALES Y MÉTODOS

• CULTIVO DE MACRÓFAGOS.
• MACRÓFAGOS MURINOS J774.1 SE OBTUVO DE LA AMERICAN TYPE CULTURE
COLLECTION.
• SE CULTIVARON EN MEDIO DMEM COMPLEMENTADO
• CON SUERO BOVINO FETAL AL 10% Y AL 1% PENICILINA / ESTREPTOMICINA.
• DESPUÉS DE LA FORMACIÓN DE UNA MONOCAPA, LAS CÉLULAS SE
RECOLECTARON CON RASPADORES DE CÉLULAS DE PLÁSTICO Y SE
CENTRIFUGARON A 1.500 RPM DURANTE 10 MIN A 10 ° C.
 CULTIVO DE CÉLULAS PULPARES

• SE UTILIZARON CÉLULAS DE LA PULPA DE DIENTE DE RATONES( OD-21) FUERON

MANTENIDAS EN MEDIO DE DUBELCO SUPLEMTADO CON SUERO DE BOVINO
FETAL AL 10 % Y 1% DE PENICILINA/ STRYPTOMICINA EN UNA ENCUBADORA.
EL GEL • SE PREPARÓ MEDIANTE DILUCIÓN EN SERIE EN DMEM SIN
FBS PARA OBTENER CONCENTRACIONES QUE VAN DESDE

PAPACÁR EL 0,005% HASTA EL 50%.

• CONCENTRACIONES INFERIORES AL 0,5% NO TENÍAN
IE DUO NINGÚN EFECTO SOBRE LA VIABILIDAD CELULAR Y LA
MUERTE CELULAR SUPERIOR AL 5% ERA ALTA
• AL 5% Y AL 0,5%.
• LAS CÉLULAS J774.1 SE PRE ESTIMULARON CON LPS
• POCILLO 200 ΜL DE SOLUCIONES DE PAPACÁRIE DUO® AL
0.5% Y AL 5%, CONTENIENDO O NO LPS
• SE AGREGARON A CADA POCILLO 200 ΜL DE SOLUCIÓN DE
PAPACÁRIE DUO® AL 0.5% Y AL 5%.
• SE ALMACENARON A -80 ° C.
 CITOTOXICIDAD: ENSAYO DE LACTATO
DESHIDROGENASA (LDH)

• LA CITOTOXICIDAD DE LAS SOLUCIONES DE PAPACÁRIE DUO® AL 0,5 Y AL 5% SE

EVALUÓ EN CÉLULAS DE MACRÓFAGOS J774.1 Y CÉLULAS OD-21
• MIDIENDO EL NIVEL DE LDH LIBERADO EN EL SOBRENADANTE DESPUÉS DE LA
LISIS CELULAR UTILIZANDO EL ENSAYO DE CITOTOXICIDAD NO RADIACTIVA
CYTOTOX96® (PROMEGA CORPORATION, MADISON, WI, EE. UU.).
• LA ABSORBANCIA SE MIDIÓ A 490 NM CON UN ESPECTROFOTÓMETRO
• COMO CONTROL POSITIVO, SE AÑADIÓ SOLUCIÓN DE LISIS 10 × A LAS CÉLULAS,
45 MINUTOS ANTES DE AÑADIR EL REACTIVO CYTOTOX 96®.
VIABILIDAD
CELULAR:
• LAS CÉLULAS J774.1 CON O SIN LPS, Y LAS CÉLULAS OD-21
ENSAYO SE SEMBRARON EN PLACAS DE 96 POCILLOS Y SE
COLORIMÉTRIC ESTIMULARON DURANTE 24 H CON SOLUCIONES DE
O MTT PAPACÁRIE DUO®
• DIFERENTES CONCENTRACIONES.
• DIMETILSULFÓXIDO (DMSO) COMO CONTROL POSITIVO.
• SE ELIMINARON LOS ESTÍMULOS Y SE AÑADIERON 10 ΜL
DE MTT
• DESPUÉS DE 3 HORAS DE INCUBACIÓN A 37 ° C, SE
AGREGARON 40 ΜL DE TAMPÓN DE DODECILSULFATO DE
SODIO (SDS) Y SE DETERMINÓ LA VIABILIDAD CELULAR
USANDO UN ESPECTROFOTÓMETRO SPECTRAMAX®
PARADIGM®
 EXTRACCIÓN
DE ARN,
TRANSCRIPCI
ÓN INVERSA Y • PARA EVALUAR LA ACTIVACIÓN DE LAS CÉLULAS
REACCIÓN EN J774.1 Y LA DIFERENCIACIÓN DE LAS CÉLULAS OD-21,
CADENA DE SE MIDIERON LOS NIVELES DE ARNM DE PTGS2, IL10,
TNF
LA
POLIMERASA • 24 H DESPUÉS DE LA ESTIMULACIÓN SE EXTRAJO EL
ARN.
EN TIEMPO
REAL (QRT-
PCR)
 • RESULTADOS
CITOTOXICIDAD Y MACROFAGO
VIABILIDAD CELULAR S

• LA SOLUCIÓN DE PAPACÁRIE
DUO® AL 5% FUE CITOTÓXICA
PARA LOS MACRÓFAGOS.
• 0,5%, NO SE OBSERVÓ
CITOTOXICIDAD.
• CELULAS PULPARES

• CITOTOXICO APLICADO AL
5%

• NO CITOTOXICO AL 0,5%
 CONCLUSIONES

• PAPACÁRIE DUO® EN SOLUCIÓN AL 0.5% NO FUE

CITOTÓXICO PARA LOS MACRÓFAGOS O LAS
CÉLULAS DE LA PULPA DENTAL.
• 5% REDUJO LA VIABILIDAD CELULAR Y FUE
ALTAMENTE CITOTÓXICO PARA AMBOS CULTIVOS.
• TAMBIÉN SE PROBÓ EN FIBROBLASTOS AISLADOS
DE LA REGIÓN CENTRAL DEL TEJIDO PULPAR Y NO
SE OBSERVÓ CITOTOXICIDAD
• PUEDE DEPENDER DEL GROSOR DE LA DENTINA
REMANENTE Y DE LA PERMEABILIDAD DE LA
DENTINA