PARCIAL 3

BIOLOGIA CELULAR DEL

CANCER
 PROFESORA ADRIANA ROJAS

DORA EMILIA FIERRO RODRIGUEZ

24-05-21
 Regulación de la metilación en H3K27
Introducción
Regulación de la expresión génica: importante para el desarrollo celular apropiado. También puede
conducir a una transformación celular inapropiada que resulta en cáncer. 
La modificación de las proteínas que envuelven el ADN es esencial para regular la expresión génica. En
muchos cánceres se han descubierto mutaciones en las enzimas que modifican estas proteínas.

La tri-metilación del 27º residuo de lisina en la histona H3 (H3K27me3), desempeña un papel

importante en el silenciamiento génico impulsado por el desarrollo y en la iniciación y progresión del
cáncer. 

La mono, di o trimetilación de un solo residuo puede alterar la afinidad de las proteínas "lectoras" por
las histonas metiladas y puede tener distintas consecuencias funcionales.

Das, P., & Taube, J. H. (2020). Regulating Methylation at H3K27: A Trick or Treat for Cancer Cell Plasticity. Cancers, 12(10), 2792. https://doi.org/10.3390/cancers12102792
Jambhekar A., Dhall A., Shi Y. Roles and regulation of histone methylation in animal development. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2020;21:59. doi: 10.1038/s41580-019-0192-5.
La metilación de H3K27

Es un contribuyente fundamental a la represión

transcripcional en muchos procesos biológicos, incluida la
impronta genómica, la inactivación del cromosoma X en
las mujeres, el mantenimiento y la diferenciación de las
células madre, el ritmo circadiano y especialmente el
cáncer. 

La preponderancia de la evidencia sugiere que EZH2 actúa

como un oncogén y su sobreexpresión aberrante y
desregulación de la función están documentadas en
múltiples variedades de tumores sólidos, incluyendo
mama, ovario, páncreas, próstata, vejiga, riñón, cerebro,
riñón, gástrico y neoplasias malignas de pulmón. 

Los reguladores epigenéticos, teniendo en cuenta su

importancia durante el mantenimiento normal de las
células madre, suelen ser secuestrados para mantener las
propiedades malignas. 

Apuntando a un papel directo del aumento de H3K27me3 en la capacidad oncogénica de EZH2, la oncogenicidad de EZH2, en modelos in vivo, se correlaciona con su actividad de
metiltransferasa H3K27. Para complicar la historia, tanto las mutaciones de ganancia como de pérdida de función en EZH2 son frecuentes en varios tipos de cáncer, incluidos linfomas,
melanoma y linfoma mielodisplásico (MDS). Las mutaciones de ganancia de función en EZH2 a menudo conducen a una enzima metiltransferasa hiperactiva, lo que da como resultado una
trimetilación extensa de H3K27, lo que promueve la restricción de la cromatina y bloquea la diferenciación celular.

Zhao Y., Garcia B.A. Comprehensive Catalog of Currently Documented Histone Modifications. Cold Spring Harb. Perspect. Biol. 2015;7:a025064. doi: 10.1101/cshperspect.a025064. 
Feinberg P.A., Koldobskiy M.A., Gondor A. Epigenetic modulators, modifiers and mediators in cancer aetiology and progression. Nat. Rev. Genet. 2016;17:284–299. doi:
10.1038/nrg.2016.13. 
Das, P., & Taube, J. H. (2020). Regulating Methylation at H3K27: A Trick or Treat for Cancer Cell Plasticity. Cancers, 12(10), 2792. https://doi.org/10.3390/cancers12102792
Un proyecto de investigación realizado en el laboratorio EPILAB del Instituto de genética humana de la PUJ en el que se analizó la expresión del ARN mensajero de
C-Myc en 230 sujetos de investigación (130 pacientes con adenocarcinoma de pulmón y 100 sujetos sanos) reportó su sobre-expresión en pacientes con cáncer de
pulmón fig 1 a. En la figura 1b se observan resultados del Western blot para C-Myc de tres sujetos control y dos pacientes con adenocarcinoma de pulmón.

Controles Ca pulmón
1 2 3 1 2

C-Myc

Actin

La expresión de C-Myc está

El Western blot confirma la
elevado en población con
presencia de C-Myc en
cáncer de pulmón comparado
población con cáncer de
con población sana, con
pulmón comparado con
diferencias estadísticamente
población sana.
significativas.
 Las figuras que encuentra a continuación (figura 2 A, B Y C) corresponden a diferentes experimentos realizados por miembros
del grupo de investigación con el fin de explicar los mecanismos epigenéticos regulatorios de C-Myc en cáncer de pulmón.
Funciones de las vías reguladoras mediadas por lncRNA en la proliferación
de células de cáncer de pulmón. 

Expresión relativa del miRNA

Expresión relativa del lnc CAT1
29Ah en pacientes con
en pacientes con
adenocarcinoma de pulmón.
adenocarcinoma de pulmón.

Se observa aumento de ln CAT1 Se observa disminución del

en los pacientes con cáncer de miRNA 29Ah en los pacientes
pulmón frente a los con adenocarcinoma de pulmón
participantes sanos. frente a participantes sanos.

Los lncRNA oncogénicos (naranja) se regulan positivamente en el cáncer de

pulmón, lo que mejora el crecimiento y la proliferación de las células del
Los ln RNA de acuerdo a lo descrito en la literatura tienen un papel dual el
cáncer de pulmón.
desarrollo y/o progresión del cáncer, en el ejercicio, el ln CAT1 al estar
Los lncRNAs supresores de tumores (violetas) están regulados a la baja en aumentado en pacientes con cáncer, podría tener un papel oncogénico.
el cáncer de pulmón, lo que inhibe la proliferación. lncRNA, ARN no
codificante largo.
 Teniendo en cuenta lo visto en clase. Utilice mínimo dos incisos de la figura 2. Para plantear una posible hipótesis del mecanismo
regulatorio de C-Myc en cáncer de pulmón.

Considera que con los datos anteriormente mostrados son suficientes para demostrar los mecanismos epigenéticos regulatorios?.

Expresión relativa del lnc CAT1 Expresión relativa del miRNA

en pacientes con 29Ah en pacientes con
adenocarcinoma de pulmón. adenocarcinoma de pulmón.

Induce modificaciones Regulación negativa de la

en la histona H3K27Me3 expresión del miRNA 29Ah.

Se observa aumento de ln CAT1

Se observa disminución del
en los pacientes con cáncer de
miRNA 29Ah en los pacientes
pulmón frente a los
participantes sanos. con adenocarcinoma de pulmón
frente a participantes sanos.
 Se realiza la clonación del ADNc de ln CAT1
Para producir retrovirus que expresen ln CAT1

1 Líneas celulares de cáncer

de pulmón humano A549,
en medio de cultivo a 37 ° C
en CO 2 al 5%. 

Transfección
2 de las células.

3
 Cultivo de células
cáncer de pulmón transfectadas con
humano A549 partículas lentivirales

Espero observar en el cultivo de células con las partículas

lentivirales cambios morfológicos celulares, y presencia de la
unión de anticuerpos anti miRNA29Ah.

Teñir las células con anticuerpos

contra microRNA29Ah y DAPI

Al realizar una qRT-PCR, espero encontrar aumento en las células tratadas con partículas lentivirales
de la expresión de miRNA29Ah frente al cultivo de células de cáncer de pulmón no tratadas.

Al hacer inmunotransferencia por Western blot, espero ver la expresión correlacionándose con lo

encontrado en los experimentos anteriores.