FUNDACIÓN UNIVERSITARIA SAN

MARTÍN

Técnicas de biología molecular

Sistema CRISPR/Cas
EMILDA DUARTE
ANA MARIA CASTRILLO
ZULIBETH DAZA
WILBER RODRIGUEZ

DOCENTE JUAN LINERO

NUTRICIÓN Y DIETÉTICA
III SEMESTRE
 Sistemas CRISPR / Cas
Son sistemas inmunitarios microbianos adaptativos muy diversos utilizados por EL 90% de las arqueas y el 40%
de eubacterias para protegerse de los virus y plásmidos invasores.
Estos sistemas permiten que la célula reconozca y distinga el ADN "extraño" entrante, del ADN "propio".
Las CRISPR consisten en secuencias repetidas cortas muy conservadas separadas por
secuencias espaciadoras cortas de tamaño similar.
 Mecanismo general
Una analogía simple para entender el mecanismo CRISPR es imaginar el diseño de un arma
personalizada.
Similar a esto, una bacteria, cuando es atacada por un bacteriófago, no es consciente de ningún mecanismo
de defensa. Por lo tanto, una pequeña proteína Cas toma la parte del ADN del fago y la acerca a los loci
CRISPR, donde se integra en el sitio CRISPR.

Un crRNA (CRISPR RNA) se sintetiza a partir de

esos loci que, junto con otras proteínas, luego
reconocen la secuencia complementaria presente
en el ADN invasor del fago y la degradan.
 El mecanismo general de CRISPR funciona en tres fases distintas: adaptación, expresión y maduración e
interferencia.
El proceso de adaptación es casi similar para diferentes clases de CRISPR, pero la biogénesis y el
direccionamiento del crRNA varían entre las diferentes clases.

Fase de adaptación Fase de expresión y maduración

La adaptación es el primer paso en el proceso de
desarrollo de un arma contra el ADN invasor
extraño. Implica recoger un fragmento de ADN
invasor e integrándolo entre dos repeticiones
adyacentes en el locus CRISPR.
Una vez que la secuencia del ADN invasor se integra
en los loci de CRISPR, el locus CRISPR se
transcribe en un ARN pre-CRISPR. Los loci
CRISPR se transcriben a partir de un promotor
cadena arriba ubicado en la secuencia líder rica
en AT.

Fase de interferencia
El crRNA forma un complejo con las proteínas Cas. El crRNA del complejo crRNA-Cas hace un apareamiento
de bases con el protoespaciador del ADN invasor. Finalmente, la escisión dirigida por crRNA del ADN
invasor ocurre por las proteínas Cas en el protoespaciador, un sitio complementario a la secuencia
espaciadora de crRNA.
 Tipos de sistemas CRISPR / Cas
Se han identificado tres tipos principales de sistemas CRISPR / Cas, tipo I, tipo II y tipo III, que pueden dividirse en
varios subtipos que abarcan una considerable diversidad estructural y funcional.

Sistemas de tipo I Sistemas de tipo III

Son los sistemas más frecuentes y extendidos, que se
dirigen al ADN invasor en un cascada de manera
dependiente de Motivo adyacente Protospacer impulsado
por el complejo. El PAM es un motivo de secuencia corta
ubicado junto al protoespaciador en el ADN invasor.
Trabajar de manera independiente de PAM. La escisión de
pre-crRNA se lleva a cabo mediante la endoribonucleasa
Cas, Cas6. El crRNA maduro produce un complejo de
ribonucleoproteína con Csm en sistemas tipo III-A y Cmr en
sistemas de tipo III-B.

Sistemas de tipo II

funcionan de forma dependiente de tracrRNA y de PAM. En este sistema, el procesamiento de pre-crRNA

implica la expresión de un tracrRNA, que se empareja con las repeticiones en la transcripción de pre-crRNA. Los
dúplex resultantes se escinden en las secuencias repetidas por RNasa III en una reacción dependiente de Cas9.
CRISPR / Cas 9 y edición específica del genoma

El sistema inmunológico bacteriano CRISPR / Cas se utiliza como una plataforma

simple guiada por ARN para la edición del genoma altamente eficiente y dirigida

La tecnología de edición del genoma CRISPR aprovecha la reparación del ADN. Los
crRNA guían a las proteínas Cas9 hacia las secuencias diana, que se reconocen por su
complementariedad con el crRNA

La nucleasa Cas9 luego introduce una ruptura de doble hebra en el ADN diana.
GRACIAS