Expo biología molecular

¿Quiénes la ocupan?

Los retrovirus son un tipo de virus de ARN monocatenario, lo que significa que su material genético está compuesto de
ARN en lugar de ADN. Cuando un retrovirus infecta una célula, se utiliza la retrotranscripción utiliza la transcriptasa
inversa para convertir su ARN en ADN. Este ADN viral se inserta luego en el ADN de la célula huésped, donde puede ser
transcrita y traducida utilizando la maquinaria celular normal para producir nuevas copias del virus.

Enzimas que participan y su función

1. Transcriptasa inversa
2. Integrasa
3. Proteasa

Como funciona la transcripción inversa con el VIH (PROCESO COMPLETO)

1. El retrovirus contiene ARN monocatenario envuelto en su interior y dentro de su cubierta tiene 3 proteínas
especiales de las que hablaremos más adelante.
2. Los virus con cubierta pueden entrar mediante 1 de 2 formas distintas (ya sea engañando a los receptores con
endositosis o por fusión directa)
3. EL retrovirus entrará por fusión directa, cuando la nucleocápside se encuentra dentro de la célula tiene que pasar
por la etapa de descapsidación
4. En la descapsidación la cápside se disuelve, liberándose las proteínas
contenidas
5. Una de las proteínas liberadas es la transcriptasa inversa, la cual se unirá al
ARN y lo transcribirá inversamente (De ARN a ADN) (Se leerá de la 5’ a la 3’) y
formará ADN complementario (ADNc) a partir de un primer de ARNt
6. Cabe recalcar que los retrovirus poseen 3 genes (gag, pol, env) y secuencias
únicas en sus extremos llamados (U5) y (U3)
7. La transcriptasa inversa trabajará de nuevo en el mismo ARN para hacer otra cadena de ADNc (ya que es el mismo
código puede recombinarse con otra cadena de ADNc para hacer una doble cadena de ADN)
8. Posteriormente llega la integrasa a recortar cada una de las terminaciones 3’ (Ahora serán terminaciones más
pequeñas, TERMINACIONES COHESIVAS ya que el ADN no emparejado, querrá integrarse)
9. Cabe aclarar que La ribonucleasa desintegrará en ARN que teníamos
10. Posteriormente la integrasa, integrará el ADN del VIH en el ADN hospedero, pasará por la membrana nuclear hasta
llegar al genoma (células eucariotas) FASE PROVIRUS
11. Posteriormente se transcribe el ADN, ya que la célula hospedera cree que este es el ADN normal, realizando así
ARNm viral
12. El ARNm sale del núcleo y ahora estos ARNm virales están en el citosol (citoplasma)
13. Algunos de estos se traducirán a proteínas (como las iniciales de la cápside, TRANSCRIPTASA INVERSA, INTEGRASA Y
PROTEASA, formandose en este paso)
14. Ahora si, ya tenemos todas las partes que pueden autoensamblarse en un nuevo virus
15. Los nuevos virus que se formarán tendrán el ARN, transcriptasa inversa, la integrasa y la proteasa
16. Un punto muy importante es que a estos virus les falta cubierta (Virus inmaduros)
17. Los virus no solo rompen la membrana para salir, si no que aprovechan esta misma membrana para su envoltura
18. Finalmente antes de estos virus infectar a otra célula deben madurar, entrando la proteasa en esté punto para
realizar un tipo control de calidad, ya que se asegurará que las otras proteínas sean completamente funcionales
antes de que el virus infecte a otras células.
Ya que abordamos cómo funciona la retrotranscripción de los virus a nivel del organismo en una célula viva,
conoceremos como aplicar este principio en técnicas moleculares en la investigación. Como, por ejemplo:

 Los investigadores pueden utilizar el ADNc para:

 La cuantificación del ARN (ya sea viral u otro tipo de ARN)
 Proteger la composición genética de una especie.
 Identificacion de ARNv en muestras clínicas
 Comprender el ARNm, sus proteínas y su enfoque

RT- PCR Es una técnica molecular que busca amplificar el ADN mediante ARN utilizando la técnica de transcripción
inversa seguida de la PCR:

 Se utiliza como primer un oligonucleotido de timinas

 La transcriptasa inversa transcribe el ARN en ADNc usando dNTPs (desoxinucleotidotrifosfato) del medio
 Se amplifica el ADNc mediante PCR

Esta técnica posee 2 variantes de proceso:

De un paso (forma rápida)

De dos pasos

Bibliotecas de ADNc:

Las bibliotecas de ADNc se diferencian de las bibliotecas genómicas en las siguientes formas:

 Solo tendrán secuencias para el ARNm de un tejido en particular.

 Una biblioteca genómica puede tener un clon para todos los genes de un organismo. Una biblioteca de ADNc no
lo tendrá.
 Las bibliotecas de ADNc proporcionan información sobre los niveles de expresión de ARNm.