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Fosfatasa alcalina
p-Nitrofenilfosfato. Cintico. DGKC
Determinacin cuantitativa de fosfatasa alcalina (FAL)
IVD
Conservar a 2-8C
PRINCIPIO DEL MTODO
La fosfatasa alcalina (FAL) cataliza la hidrlisis del p-nitrofenilfosfato
(pNPP) a pH 10,4 liberando p-nitrofenol y fosfato, segn la siguiente
reaccin:
FAL
R2
Substrato
1 mmol/L
0,5 mmol/L
10 mmol/L
PREPARACIN
Reactivo de trabajo (RT):
Ref: 1001130
Disolver ( ) una tableta de R 2 Substrato en un vial de R 1 Tampn.
Ref: 1001131
Disolver ( ) una tableta de R 2 Substrato en 15 mL de R 1 Tampn.
MATERIAL ADICIONAL
- Espectrofotmetro o analizador para lecturas a 405 nm.
- Bao termostatable a 25C, 30C 37C ( 0,1C)
- Cubetas de 1,0 cm de paso de luz.
- Equipamiento habitual de laboratorio.
MUESTRAS
1
Suero o plasma heparinizado .
Suero libre de hemlisis, separado de los hematies lo antes posible.
Estabilidad: 3 das a 2-8C.
PROCEDIMIENTO
1. Condiciones del ensayo:
Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . .. . . .405 nm
Cubeta:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . 1 cm paso de luz
Temperatura constante . . . . . . . . . . . . . . . .. . . 25C / 30C / 37C
2. Ajustar el espectrofotmetro a cero frente a agua destilada o aire.
3. Pipetear en una cubeta:
RT (mL)
Muestra (L)
37C
2,64
1,33
1,00
CONTROL DE CALIDAD
Es conveniente analizar junto con las muestras sueros control valorados:
SPINTROL H Normal y Patolgico (Ref. 1002120 y 1002210).
Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia, se debe
revisar el instrumento, los reactivos y la tcnica.
Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y establecer
correcciones en el caso de que los controles no cumplan con las tolerancias.
VALORES DE REFERENCIA1
25C
30C
37C
Nios (1-14 aos)
< 400 U/L
< 480 U/L
< 645 U/L
Adultos
60 -170 U/L
73 - 207 U/L
98 - 279 U/L
Factores que pueden afectar los valores de referencia son: ejercicio, periodos
de crecimiento en nios y embarazo.
Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio
establezca sus propios valores de referencia.
CARACTERSTICAS DEL MTODO
Rango de medida: Desde el lmite de deteccin 4,26 U/L hasta el lmite de
linealidad 825 U/L.
Si la concentracin de la muestra es superior al lmite de linealidad, diluir 1/2 con
ClNa 9 g/L y multiplicar el resultado final por 2.
Precisin:
Media (U/L)
SD
CV (%)
25C
1,00
0,82
0,61
INTERFERENCIAS
El fluoruro, oxalato, citrato y EDTA inhiben la actividad de la fosfatasa
alcalina, por lo que no deben ser utilizados como anticoagulantes.
La hemlisis interfiere debido a la elevada concentracin de fosfatasa
1,2
alcalina en los hematies . Se han descrito varias drogas y otras
3,4
substancias que interfieren en la determinacin de la fosfatasa alcalina .
NOTAS
SPINREACT dispone de instrucciones detalladas para la aplicacin de
este reactivo en distintos analizadores.
BIBLIOGRAFA
1.
Wenger C. et al. Alkaline phosphatase. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V.
Mosby Co. St Louis. Toronto. Princeton 1984; 1094-1098.
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Rosalki S et al. Clin Chem 1993; 39/4: 648-652.
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Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995.
Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
PRESENTACIN
Ref: 1001130
Ref: 1001131
Cont.
20 x 3 mL
10 x 15 mL
1,2
20