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17/12/08

Título de la práctica:
Determinación cuantitativa de fosfatasa ácida (FAC)
Fundamento de la práctica:
Método Hillmann: La fosfatasa ácida a pH 5.0 hidroliza el α-naftilfosfato o fosfato
inorgánico a α-naftol.

α-naftilfosfato + H2O FAC α-naftol + fosfato

α-naftol + Fast Red TR Azo Dye


El α-naftol se hace reaccionar con un cromógeno diazotado formando un compuesto
coloreado con pico de absorción a 405 nm.
Materiales:
REACTIVOS
R1 Citrato sódico pH
50 mmol/L
Tampón 5,2
R2 α-Naftil fosfato 10 mmol/L
Sustrato Fast Red TR 6 mmol/L
R3 Tartrato sódico 2 mmol/L
Tartrato
R4 Ácido acético 0,5 mol/L

• Espectrofotómetro o analizador para lecturas a 340 nm.


• Baño termostatable a 25ºC, 30ºC ó 37ºC (± 0,1ºC)
• Cubetas de 1,0 cm de paso de luz.
• Equipamiento habitual de laboratorio.
• Tubos de plástico
• Suero o plasma. Estabilidad de la muestra: 7 días a 2-8ºC.

Procedimiento:

1. Preparación del reactivo de trabajo:


Disolver (→) un comprimido de R2 Sustrato en un vial de R1.
Tapar y mezclar suavemente hasta disolver su contenido.
Estabilidad: 2 días a 2-8ºC o 6 horas a temperatura ambiente.
R 3 y R 4: Listo para su uso. (R4 Incluido en Ref:1001121).
2. Revisar el programa del fotocolorímetro
3. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada o aire.
4. Pipetear en una cubeta:
FAC Total (T) FAC No
Prostátic
a (No P)
RT (mL) 1,0 1,0
R 3 (μL) -- 10
Muestra (μL) 100 100

5. Mezclar, incubar 5 minutos.


6. Leer la absorbancia (A) inicial de la muestra, poner en marcha el
cronometro y leer la absorbancia cada minuto durante 3 minutos.
7. Calcular el promedio del incremento de absorbancia por minuto (ΔA/min).
Resultados:
Las absorvancias obtenidas son las
siguientes:
Abs1= 0,809
Abs2= 0,887
Abs3= 0,958
Abs4=1,030

55,2 U/l de FAC

Delta1= 0,078
Delta2=0,071
Delta3= 0,071
Interpretación clínica de los resultados:
Las fosfatasas ácidas son enzima que
se encuentran presentes en casi todos los tejidos del organismo, siendo particularmente
altas en próstata, estómago, hígado, músculo, bazo, eritrocitos y plaquetas.
Niveles elevados de fosfatasas ácidas se encuentra en alteraciones prostáticas como
hipertrofia, prostatitis o carcinoma, en enfermedades hematológicas, óseas (enfermedad
de Paget) o hepáticas.
Niveles bajos de fosfatasa ácida no tiene significado clínico.
El diagnostico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de
laboratorio.

17/12/08
Título de la práctica:
Determinación cuantitativa de fosfatasa álcalina (ALP)
Fundamento de la práctica:
La fosfatasa alcalina (FAL) cataliza la hidrólisis del p-nitrofenilfosfato (pNPP) a pH
10,4 liberando p-nitrofenol y fosfato, según la siguiente reacción:

p-Nitrofenilfosfato + H2O ALP p-Nitrofenol + Fosfato


La velocidad de formación del p-Nitrofenol, determinado fotométricamente, es
proporcional a la concentración catalítica de fosfatasa alcalina en la muestra ensayada1,2.
Materiales:
REACTIVOS
Dietanolamina (DEA)
R1 1 mmol/L
pH 10,4
Tampón 0,5 mmol/L
Cloruro de magnesio
R2 p-Nitrofenilfosfato
10 mmol/L
Substrato (pNPP)

• Espectrofotómetro o analizador para lecturas a 340 nm.


• Baño termostatable a 25ºC, 30ºC ó 37ºC (± 0,1ºC)
• Cubetas de 1,0 cm de paso de luz.
• Equipamiento habitual de laboratorio.
• Tubos de plástico
• Suero o plasma. Estabilidad de la muestra: 7 días a 2-8ºC.

Procedimiento:
1. Preparación del reactivo de trabajo:
Disolver (→) una tableta de R2 Sustrato en un vial de R1 tampón.
Tapar y mezclar suavemente hasta disolver su contenido.
Estabilidad: 21 días a 2-8ºC o 5 días a temperatura ambiente.
2. Revisar el programa del fotocolorímetro
3. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada o aire.
4. Pipetear en una cubeta:

RT (mL) 1,2
Muestra (μL) 20

5. Mezclar, incubar 5 minutos.


6. Leer la absorbancia (A) inicial de la muestra, poner en marcha el
cronometro y leer la absorbancia cada minuto durante 3 minutos.
7. Calcular el promedio del incremento de absorbancia por minuto (ΔA/min).

Resultados:
Las absorvancias obtenidas son las siguientes:
Abs1= 0,622
Abs2= 0,706
Abs3= 0,799
Abs4=0,881

284 U/l de FAC

Delta1= 0,083
Delta2=0,093
Delta3= 0,082
Interpretación clínica de los resultados:
Las fosfatasas alcalinas son enzimas que se encuentran presentes en casi todos los
tejidos del organismo, siendo particularmente alta en huesos, hígado, placenta,
intestinos y riñón.
Tanto el aumento como la disminución de los niveles en plasma, tienen significado
clínico.
Causas más probables de aumento del nivel de FAL:
Enfermedad ósea de Paget, obstrucciones hepáticas, hepatitis, hepatotoxicidad por
medicamentos y osteomalacia.
Causas más probables de disminución del nivel de FAL:
Cretinismo y déficit de vitamina C
El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de
laboratorio.

9/1/08
Título de la práctica:
Determinación cuantitativa de Lactato deshidrogenasa (LDH)
Fundamento de la práctica:
La lactato deshidrogenasa (LDH) cataliza la reducción del piruvato por el NADH, según
la siguiente reacción:
Piruvato + NADH + H+ LDH
L-lactato + NAD+
La velocidad de disminución de la concentración de NADH en el medio determinado
fotometricamente, es proporcional a la concentración catalítica de LDH en la muestra
ensayada.
Materiales:
REACTIVOS
R1 Imidazol 65 mmol/L
Tampón Piruvato 0,6 mmol/L
R2 NADH 0,18 mmol/L
Substrato

PREPARACIÓN
Reactivo de trabajo (RT):
Disolver (→) 1 tableta de R2 en un vial de R1.
Tapar y mezclar suavemente hasta disolver su contenido.
Estabilidad: 2 días a 2-8ºC o 12 horas a temperatura ambiente (15-25ºC).
MATERIAL ADICIONAL
- Espectrofotómetro o analizador para lecturas a
340 nm.
- Baño termostatable a 25ºC, 30ºC ó 37ºC (±
0,1ºC)
- Cubetas de 1,0 cm de paso de luz.
- Equipamiento habitual de laboratorio.
Procedimiento:
1. Condiciones del ensayo: Longitud de onda: . . . .
. . . . . . . . . . . . . . . . . . .340 nm
Cubeta:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .1 cm paso
de luz
Temperatura constante . . . . . . . . . . .25ºC / 30ºC /
37ºC
2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a
agua destilada o aire.
3. Pipetear en una cubeta:

25º - 30ºC 37ºC


RT (mL) 3,0 3,0
Muestra (μL) 100 50
4. Mezclar, incubar 1 minuto.
5. Leer la absorbancia (A) inicial de la muestra, poner en marcha el cronómetro y leer la
absorbancia cada minuto durante 3 minutos.
6. Calcular el promedio del incremento de absorbancia por minuto (ΔA/min).
Resultados:
Las absorvancias obtenidas son las siguientes:
Abs1= 1,631
Abs2= 1,589
Abs3= 1,555
Abs4=1,525
341 U/l de FAC A 37ºC

VN A 37ºC 230-460 U/l Valores aceptados por el Spintrol 282-408


Interpretación clínica de los resultados:
La lactato deshidrogenasa (LDH) es una enzima, distribuida por todo el organismo
humano. Las mayores concentraciones de LDH se encuentran en el hígado, corazón,
riñón, músculo esquelético y eritrocitos.
El nivel de LDH en suero esta elevado en pacientes con enfermedades del hígado,
infartos de miocardio, alteraciones renales, distrofias musculares y anemias.
El diagnostico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de
laboratorio.

Título de la práctica:
Determinación cuantitativa de Fosfatasa ácida no prostática (FAC no prostática)
Fundamento de la práctica:
Método Hillmann: La fosfatasa ácida a pH 5.0 hidroliza el α-naftilfosfato o fosfato
inorgánico a α-naftol.
α-naftilfosfato + H2O FAC α-naftol + fosfato
α-naftol + Fast Red TR Azo Dye

El α-naftol se hace reaccionar con un cromógeno diazotado formando un compuesto


coloreado con pico de absorción a 405 nm.
Materiales:
REACTIVOS
R1 Citrato sódico pH
50 mmol/L
Tampón 5,2
R2 α-Naftil fosfato 10 mmol/L
Sustrato Fast Red TR 6 mmol/L
R3
Tartrato sódico 2 mmol/L
Tartrato
R4 Ácido acético 0,5 mol/L

PREPARACION
- Reactivo de trabajo (RT):
Ref: 1001121
Disolver (→) un comprimido de R2 Sustrato en un vial de R1.
Ref.: 1001122
Disolver () un comprimido de R2 Sustrato en 15 mL de R1. →
Tapar y mezclar suavemente hasta disolver su contenido.
Estabilidad: 2 días a 2-8ºC o 6 horas a temperatura ambiente.
- R 3 y R 4: Listo para su uso. (R4 Incluido en Ref:1001121).

CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD
Todos los componentes del kit son estables, hasta la fecha de caducidad indicada en la
etiqueta, cuando se mantienen los frascos bien cerrados a 2-8ºC, protegidos de la luz y
se evita su contaminación.
No usar los comprimidos si aparecen fragmentados.
No usar reactivos fuera de la fecha indicada.
Indicadores de deterioro de los reactivos:

- Presencia de partículas y turbidez.


- Absorbancias del Blanco (A) a 405 nm > 0,44.
MATERIAL ADICIONAL
- Espectrofotómetro o analizador para lecturas a 405 nm.
- Baño termostatable a 30ºC ó 37ºC (± 0,1ºC)
- Cubetas de 1,0 cm de paso de luz.
- Equipamiento habitual de laboratorio.
MUESTRAS
Suero. Usar suero libre de partículas y hemólisis, separado de los hematies lo antes
posible. No usar plasma.
La fosfatasa ácida en suero es muy inestable, estabilizar mediante la adición de 50 μL de
ácido acético (R4) por cada mL de muestra. Estabilidad: 7 días a 2-8ºC.
Procedimiento:
PROCEDIMIENTO

1. Condiciones del ensayo:


Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .405 nm
Cubeta:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .1 cm paso de luz
Temperatura constante . . . . . . . . . . . . . . . .. . . 30ºC / 37ºC
2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada o aire.
3. Pipetear en una cubeta:

FAC Total (T) FAC No


Prostática
(No P)
RT (mL) 1,0 1,0
R 3 (μL) -- 10
Muestra (μL) 100 100

4. Mezclar, incubar 5 minutos.


5. Leer la absorbancia (A) inicial de la muestra, poner en marcha el cronometro y leer la
absorbancia cada minuto durante 3 minutos.
6. Calcular el promedio del incremento de absorbancia por minuto (ΔA/min).

Resultados:
FAC Total- FAC no prostática= Fac prostática
55,2-30,4= 24,8 U/l
Interpretación clínica de los resultados:
Las fosfatasas ácidas son enzima que se encuentran presentes en casi todos los tejidos
del organismo, siendo particularmente altas en próstata, estómago, hígado, músculo,
bazo, eritrocitos y plaquetas.
Niveles elevados de fosfatasas ácidas se encuentra en alteraciones prostáticas como
hipertrofia, prostatitis o carcinoma, en enfermedades hematológicas, óseas (enfermedad
de Paget) o hepáticas.
Niveles bajos de fosfatasa ácida no tiene significado clínico.
El diagnostico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de
laboratorio.

12/1/09
Título de la práctica:
Determinación cuantitativa de Creatin quinasa (CK-Total)
Fundamento de la práctica:
La creatina quinasa (CK) cataliza la transferencia reversible de un grupo fosfato de la
fosfocreatina al ADP. Esta reacción se acopla con otras catalizadas por la hexoquinasa
(HK) y por la glucosa-6-fosfato deshidrogenasa (G6F-DH):
Fosfocreatina + ADP CK Creatina + ATP

ATP + Glucosa HK ADP + Glucosa-6-fosfato

Glucosa-6-fosfato + NADP+ G6F- DH 6-Fosfogluconato + NADPH + H+

La velocidad de formación de NADPH, determinado fotometricamente, es proporcional


a la concentración catalítica de CK en la muestra ensayada
Materiales:
REACTIVOS
Imidazol pH 7,0 100 mmol/L
R1 Glucosa 20 mmol/L
Tampón Acetato de magnesio 10 mmol/L
EDTA 2 mmol/L
ADP 2 mmol/L
AMP 5 mmol/L
di-Adenosina-5- 10 mmol/L
pentafosfato 2 mmol/L
NADP+ 2500 U/L
R2
Hexoquinasa (HK) 1500 U/L
Substrato
Glucosa-6-fosfato 20 mmol/L
deshidrogenasa (G6F- 30 mmol/L
DH)
N-acetilcisteína
Fosfato de creatina
PREPARACIÓN
Reactivo de trabajo (RT):
Ref: 1001050 Disolver (→) una tableta de R 2 en un vial de R 1.
Ref: 1001051 Disolver (→) una tableta de R 2 en 15 mL de R 1.
Tapar y mezclar suavemente hasta disolver su contenido.
Estabilidad: 5 días a 2-8ºC o 24 horas a temperatura ambiente (15-25ºC).
CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD
Todos los componentes del kit son estables, hasta la fecha de caducidad indicada en la
etiqueta, cuando se mantienen los frascos bien cerrados a 2-8ºC, protegidos de la luz y
se evita su contaminación.
No usar las tabletas si aparecen fragmentadas.
No usar reactivos fuera de la fecha indicada.
Indicadores de deterioro de los reactivos:
- Presencia de partículas y turbidez.
- Absorbancias del Blanco a 340 > 1,60.
MATERIAL ADICIONAL
- Espectrofotómetro o analizador para lecturas a 340 nm.
- Baño termostatable a 25ºC, 30ºC ó 37º C (± 0,1ºC).
- Cubetas de 1,0 cm de paso de luz.
- Equipamiento habitual de laboratorio.
MUESTRAS
Suero o plasma. Estabilidad: 7 días a 2-8ºC, protegida de la luz.
La actividad de la creatin quinasa disminuye un 10% tras 1 día a 2-5ºC ó tras 1 hora a
15-25ªC.
Procedimiento:
1. Condiciones del ensayo:
Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .340 nm
Cubeta:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .1 cm paso de luz
Temperatura constante . . . . . . . . . . .25ºC / 30ºC / 37ºC
2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada o aire.
3. Pipetear en una cubeta:

37ºC
25-30ºC
RT (mL) 1,0 1,0
Muestra (μL) 40 20

4. Mezclar, incubar 2 minutos.


5. Leer la absorbancia (A) inicial de la muestra, poner en marcha el cronometro y leer la
absorbancia cada minuto durante 3 minutos.
6. Calcular el promedio del incremento de absorbancia por minuto (ΔA/min).
Resultados:
Las absorvancias obtenidas han sido las siguientes:
Abs1: 0,838
Abs2: 0,850
Abs3: 0,879
Abs4:0,908

Delta1:0,012
Delta2:0,029
Delta3: 0,029
Concentración: 191U/l.
VN= 378-542 El valor no está dentro de los valores normales. La causa es que está
caducado
Interpretación clínica de los resultados:
La creatina quinasa es una enzima intracelular, distribuida por todo el organismo
humano. Su función fisiológica esta asociada con la adenosina trifosfato (ATP)
producida cuando el músculo se contrae.
El nivel de CK en suero esta elevado en pacientes con alteraciones del músculo
esquelético y en infartos de miocardio.
El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de
laboratorio.

12/1/09
Título de la práctica:
Determinación cuantitativa de Creatin quinasa (CK-Total)
Fundamento de la práctica:
La creatina quinasa (CK) cataliza la transferencia reversible de un grupo fosfato de la
fosfocreatina al ADP. Esta reacción se acopla con otras catalizadas por la hexoquinasa
(HK) y por la glucosa-6-fosfato deshidrogenasa (G6F-DH):
Fosfocreatina + ADP CK Creatina + ATP

ATP + Glucosa HK ADP + Glucosa-6-fosfato

Glucosa-6-fosfato + NADP+ G6F- DH 6-Fosfogluconato + NADPH + H+


La velocidad de formación de NADPH, determinado fotometricamente, es proporcional
a la concentración catalítica de CK en la muestra ensayada
Materiales:
REACTIVOS
Imidazol pH 7,0 100 mmol/L
R1 Glucosa 20 mmol/L
Tampón Acetato de magnesio 10 mmol/L
EDTA 2 mmol/L
ADP 2 mmol/L
AMP 5 mmol/L
di-Adenosina-5- 10 mmol/L
pentafosfato 2 mmol/L
NADP+ 2500 U/L
R2
Hexoquinasa (HK) 1500 U/L
Substrato
Glucosa-6-fosfato 20 mmol/L
deshidrogenasa (G6F- 30 mmol/L
DH)
N-acetilcisteína
Fosfato de creatina
PREPARACIÓN
Reactivo de trabajo (RT):
Ref: 1001050 Disolver (→) una tableta de R 2 en un vial de R 1.
Ref: 1001051 Disolver (→) una tableta de R 2 en 15 mL de R 1.
Tapar y mezclar suavemente hasta disolver su contenido.
Estabilidad: 5 días a 2-8ºC o 24 horas a temperatura ambiente (15-25ºC).
CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD
Todos los componentes del kit son estables, hasta la fecha de caducidad indicada en la
etiqueta, cuando se mantienen los frascos bien cerrados a 2-8ºC, protegidos de la luz y
se evita su contaminación.
No usar las tabletas si aparecen fragmentadas.
No usar reactivos fuera de la fecha indicada.
Indicadores de deterioro de los reactivos:
- Presencia de partículas y turbidez.
- Absorbancias del Blanco a 340 > 1,60.
MATERIAL ADICIONAL
- Espectrofotómetro o analizador para lecturas a 340 nm.
- Baño termostatable a 25ºC, 30ºC ó 37º C (± 0,1ºC).
- Cubetas de 1,0 cm de paso de luz.
- Equipamiento habitual de laboratorio.
MUESTRAS
Suero o plasma. Estabilidad: 7 días a 2-8ºC, protegida de la luz.
La actividad de la creatin quinasa disminuye un 10% tras 1 día a 2-5ºC ó tras 1 hora a
15-25ªC.
Procedimiento:

1. Condiciones del ensayo:


Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .340 nm
Cubeta:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .1 cm paso de luz
Temperatura constante . . . . . . . . . . .25ºC / 30ºC / 37ºC
2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada o aire.
3. Pipetear en una cubeta:

37ºC
25-30ºC
RT (mL) 1,0 1,0
Muestra (μL) 40 20

4. Mezclar, incubar 2 minutos.


5. Leer la absorbancia (A) inicial de la muestra, poner en marcha el cronometro y leer la
absorbancia cada minuto durante 3 minutos.
6. Calcular el promedio del incremento de absorbancia por minuto (ΔA/min).
Resultados:
Las absorvancias
obtenidas han sido las
siguientes:
Abs1: 0,838
Abs2: 0,850
Abs3: 0,879
Abs4:0,908

Delta1:0,012
Delta2:0,029
Delta3: 0,029
Concentración: 191U/l.
VN= 378-542 El valor
no está dentro de los
valores normales. La
causa es que está caducado
Interpretación clínica de los resultados:
La creatina quinasa es una enzima intracelular, distribuida por todo el organismo
humano. Su función fisiológica esta asociada con la adenosina trifosfato (ATP)
producida cuando el músculo se contrae.
El nivel de CK en suero esta elevado en pacientes con alteraciones del músculo
esquelético y en infartos de miocardio.
El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de
laboratorio.

12/1/09
Título de la práctica:
Determinación cuantitativa de Creatin quinasa CK-MB (CK-MB)
Fundamento de la práctica:
El anticuerpo anti CK-M inhibe completamente la actividad de la CK-MM y la
subunidad (M) de la CK-MB. La actividad de la CK-B no inhibida se determina según
la siguientes reacciones:

Fosfocreatina + ADP CK Creatina + ATP

ATP + Glucosa HK ADP + Glucosa-6-fosfato

Glucosa-6-fosfato + NADP+ G6F-DH 6-


Fosfogluconato + NADPH + H+

La velocidad de formación de NADPH, determinado fotometricamente, es proporcional


a la concentración catalítica de CK-B en la muestra ensayada CK HK DHF6G
Materiales:
REACTIVOS
R 1 Tampón Imidazol pH 6,7 100 mmol/L 20 mmol/L
Glucosa Acetato de 10 mmol/L 2 mmol/L
magnesio EDTA

R 2 Anti CK-M *Anti CK-M ADP AMP 2000 U/L 2 mmol/L 5


di-Adenosina-5- mmol/L 10 mmol/L 2
pentafosfato NADP+ mmol/L 2500 U/L 1500
Hexoquinasa (HK) U/L 20 mmol/L 30
Glucosa-6-fosfato mmol/L
deshidrogenasa (G6F-
DH) N-acetilcisteína
Fosfato de creatina

*Anti CK-M suficiente para inhibir hasta 2000 U/L de CK – MM Opcional


CK-Nac / CK-MB Suero humano Ref: 1002260
CONTROL liofilizado
PRECAUCIONES CK-NAC / CK-MB CONTROL
Todos los componentes de origen humano han resultado ser negativos para el antígeno
HBs, HCV y para el anti-HIV (1/2). Sin embargo, deben tratarse con precaución como
potencialmente infecciosos.
PREPARACIÓN - Reactivo de trabajo (RT) Disolver (→) una tableta de R 2 en un vial
de R 1. Tapar el vial y mezclar suavemente hasta disolver su contenido. Estabilidad: 8
días a 2-8ºC o 24 horas a 15-25ºC. - CK-Nac / CK-MB CONTROL Reconstituir (→) el
contenido de un vial con 2 mL de agua destilada. Tapar el vial y mezclar suavemente
hasta disolver su contenido.
Estabilidad: 3 días a 2-8ºC o 4 semanas a -25ºC – -15ºC.
CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD Todos los componentes del kit son estables,
hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta, cuando se mantienen los frascos
bien cerrados a 2-8ºC, protegidos de la luz y se evita su contaminación. No usar las
tabletas si aparecen fragmentadas. No usar reactivos fuera de la fecha indicada.
Indicadores de deterioro de los reactivos:
- Presencia de partículas y turbidez.
- Absorbancias (A) del Blanco a 340 > 1,60.
MATERIAL ADICIONAL
- Espectrofotómetro o analizador para lecturas a 340 nm.
- Baño termostatable a 25ºC, 30ºC ó 37ºC ( 0,1ºC)
- Cubetas de 1,0 cm de paso de luz.
- Equipamiento habitual de laboratorio.
MUESTRAS Suero o plasma. Estabilidad: 7 días a 2-8ºC, protegida de la luz. La
actividad de la CK-MB en el suero disminuye un 10% tras 24 horas a 4ºC o tras 1 hora a
25ºC.
Procedimiento:
1. Condiciones del ensayo:
Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . 340 nm Cubeta:. . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . .. . . . .1 cm paso de luz Temperatura constante . . . . . . . . . . . . . . . 25ºC / 30ºC
/ 37ºC
2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada o aire.
3. Pipetear en una cubeta:
RT (mL) 1,0
Muestra 40
(L)

4. Mezclar. Incubar 10 minutos.


5. Leer la absorbancia (A1) inicial de la muestra, poner en marcha el cronometro y leer
la absorbancia de nuevo a los 5 minutos (A2).
6. Calcular la diferencia de absorbancias: A= A2 – A1 .
Resultados:
Se inhibe la fracción M y queda la B (50% cardíaca). Realmente se mide la CK-B que
es la mitad de la CK-MB cardíaca.
Abs1:0,682
Abs2:0,717
Concentración: 576U/l.

Interpretación clínica de los resultados:


La CK-MB es una enzima compuesta de dos subunidades, la subunidad M expresada en
el músculo y la subunidad B, expresada en las células nerviosas. La CK-MB se
encuentra en el suero en concentraciones bajas, se incrementa como consecuencia de un
infarto de miocardio y después desciende a niveles normales. Puede incrementarse, más
raramente, en traumatismos del músculo esquelético. El diagnóstico clínico debe
realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.
14/1/09
Título de la práctica:
Estudio completo del semen (ahora se irá mencionando cada una de las técnicas
utilizadas, a continuación se mostrarán los resultados y las fotografías de todas las
muestras de semen analizadas en el aula).

Título de la práctica:
Examen macroscópico
Material
Tubo graduado
Pipeta Pasteur, chupete.
Papel indicador universal de pH
Procedimiento:
Los parámetros que se van a estudiar varían con el tiempo, por lo cual deberán valorarse
a la recepción de la muestra del mismo modo que la motilidad.
Licuefacción. Al recibir la muestra generalmente se ha
completado.
Volumen . Se mide vaciando la muestra completamente en
un tubo de centrífuga graduado y leyendo directamente el
volumen ocupado por la misma.
Viscosidad. Se evalúa introduciendo la punta de una pipeta
Pasteur en la muestra y observando la longitud del
filamento que se forma al retirarla. Si este excede los 2 cm
de longitud, la viscosidad está aumentada. También puede
apreciarse cuando se vierte el semen desde el recipiente de
recogida al tubo graduado observando si cae gota a gota,
en cuyo caso será normal.
Aspecto y color.
pH . Se realiza con papel indicador, introduciendo un fragmento en la muestra y
comparando con la escala de colores,
Aglutinación espontanea de los espermatozoides, Se observa la presencia de
aglutinación visible.

Título de la práctica:
Estudio de la movilidad en cámara de contaje
Material
Cámaras
Pipetas
Portaobjetos, cubreobjetos
Tampón PBS (Si se requiere) Microscopio
Técnica
La muestra debe estar totalmente licuada (dejar unos 30 minutos a temperatura
ambiente) luego mezclar bien.
Preparación de la muestra.
•Colocar 10u1 de muestra entre porta y cubreobjetos para observar la
concentración espermática y ver si se precisa diluir la muestra.
•Si
la concentración espermática estimada es muy elevada, diluir con
PBS, agitar la mezcla y anotar la dilución efectuada (vol. muestra : vol.
PBS). Las diluciones más usuales son:
50:50 50:200
50:100 50:250
50:150 50:300.

Si la concentración de espermatozoides es muy baja (1 o 2 espermatozoides por campo)


se colocan 500 μL de la muestra en un Eppendorf y se centrifuga a 3500 RPM 5
minutos. Se decanta el sobrenadante y se homogeneiza el botón celular.
Llenado de la cámara.
•Depositar 5 μL de muestra licuada en las zonas de carga (1 ó 2) de la
cámara.
•Permitir el llenado por capilaridad. Retirar el exceso de muestra de
la zona de carga después de haberse llenado totalmente la cámara. La
muestra esta lista para el análisis 10 segundos después del llenado y
permanece estable al menos 30 minutos a temperatura ambiente.
Determinación de la motilidad
•Contar los espermatozoides móviles N1 de las celdillas y registrar
ese número
•Contar en las mismas celdillas sólo los espermatozoides inmóviles
N2.
•Sumar el número de móviles e inmóviles para obtener el valor N (n°
espermatozoides contados)
% de motilidad (M) = (N1 / N ) x 100
También debe hacerse un estudio cualitativo de la motilidad clasificando los
espermatozoides móviles según presenten movilidad activa (avanzan) o pasiva (se
mueven pero no avanzan).

Título de la práctica:
Test de la vitalidad
Fundamento
Esta técnica consiste en añadir a la muestra de semen eosina, sólo los espermatozoides
muertos se colorean debido a la alteración de su membrana que la hace permeable al
colorante, mientras que los vivos permanecerán sin teñir. Opcionalmente puede añadirse
nigrosina que proporcionará el contraste adecuado para facilitar la observación.
(Técnica de Williams — Pollack)
Material
Portaobjetos
Extensores
Tubo Ependorff
Pipetas Pasteur, chupetes
Microscopio
Reactivos
Eosina al 0, 5% en suero fisiológico
Nigrosina al 0,10% en suero fisiológico
Aceite de inmersión
Técnica
• Se coloca en un Ependorff una gota de líquido seminal y una gota de eosina. Se
mezcla y se espera 1 minuto. .
• Se añade una gota de solución de nigrosina . Se homogeneiza y se espera 1
minuto.
• Se extiende la muestra con ayuda de un extensor haciendo un frotis fino.
• Se deja secar y se observa con objetivo de inmersión o con 40x. Se observan
varios campos microscópicos y se realiza un recuento sobre 100
espermatozoides teniendo en cuenta que:
Rojos espermatozoides vivos
Blancos Espermatozoides muertos

Título de la práctica:
Recuento de espermatozoides en cámara Cellvision
Fundamento
El cálculo del número de espermatozoides en la muestra seminal puede realizarse de
forma automática con contadores electrónicos o manualmente. El método manual es
similar al recuento de células sanguíneas y consiste en que después de la licuefacción
del semen, los espermatozoides pueden contarse en un hemocitómetro tras la dilución
inicial de la muestra.
Material
Cámara de Neubauer o Celivision
Pipeta cuentaglóbulos, boquilla, tubo aspiración. Placa Petri
Microscopio
Cubeta linfática
Técnica
La muestra debe estar totalmente licuada.
Llenado de la cámara.
• Depositar 5 μL de muestra licuada ,diluida o no, en las zonas de carga
(1 ó 2) de la cámara
• Permitir el llenado por capilaridad. Retirar el exceso de muestra de la
zona de carga después de haberse llenado totalmente la cámara. La
muestra esta lista para el análisis 10 segundos después del llenado y
permanece estable al menos 30 minutos a temperatura ambiente.
Cálculo de la concentración
• Seleccionar aleatoriamente un campo para el análisis que esté cerca
del centro de la placa.
• Contar los espermatozoides y el número de celdillas contadas . Anotar
ambos datos. Se recomienda contar de 100 a 200. Hay que tener en
cuenta que la seguridad para la determinación de la concentración es
proporcional al número de celdillas contadas.
• Obtener la media del n° de espermatozoides por celdilla
Aplicar la fórmula:
Concentración de espermatozoides ( C )= N x F (millones/ml)
N=nº de espermatozoides
F= factor de calibrado obtenido anteriormente para es microscopio y objetivo

Título de la práctica:
Fórmula espermática (Espermiocitograma)
Fundamento
El conocimiento de las características morfológicas de los espermatozoides es
fundamental para valorar el potencial fecundativo de una muestra, junto con el número
total de espermios y su motricidad. La morfología del espermatozoide se valora
mediante recuentos diferenciales de los tipos de espermatozoides morfológicamente
normales y anormales en extensiones teñidas. También se observan las células de
espermiogénesis que pueden aparecer.
Material
Portaobjetos y cubreobjetos
Extensores
Microscopio
Reactivos
Alcohol metilico
Solución de May Grumwald
Solución de Giemsa
Agua de phi 7,2 Aceite de inmersión
Técnica
• Extensión de la muestra. Sobre un portaobjetos de forma similar a la de un
frotis sanguíneo. Si el recuento es bajo, se hará una extensión más gruesa que
asegure suficientes formas para el recuento
• Fijación, Se cúbre la extensión con alcohol metílico durante 5 minutos,
renovando el alcohol, fuera necesario y se deja secar al aire o en estufa a 37 °C.
• Tinción. May Grumwald-Giemsa (examen de rutina)

Cubrir la preparación con solución May-Grümwald durante 4 minutos.


Diluir con la misma cantidad de gotas de agua de pH 7,2 durante 4 minutos.
Decantar y lavar con agua destilada suavemente.
Cubrir la extensión con una dilución de Giemsa diluido (3 gotas de colorante por ml. de
agua de pH 7,2) durante 12 minutos
Lavar
Dejar secar al airé.
• Observación Se deben estudiar con el objetivo de inmersión al menos 200
espermatozoides y registrar el porcentaje de formas anormales encontradas de cada tipo.
Además, se observará la presencia de hematíes, leucocitos y células espermáticas.
Resultados obtenidos
Informe
Se registran los porcentajes de espermatozoides normales y anormales, y dentro de estos
últimos se especifica el tipo de anomalía encontrada y su proporción (anomalías en
cabeza, cuello y cola). También se informa de la presencia de células de
espermiogénesis y teratógenas, células sanguíneas, de descamación y de cualquier otro
tipo que se puedan observar

A continuación se expresan todos los resultados obtenidos en tablas, cada tabla


corresponde a una de las técnicas descritas anteriormente:

Examen macroscópico:
Nº Licuefacción Volumen Color Viscosidad Filancia pH
Muestra (completa o
no)
140101 totalmente 3 ml. blanquecino Gota a Normal 8-9
gota
190101 totalmente 2,4 ml. blanquecino Gota a Normal 8-9
gota
190102 totalmente 2,5 ml. Blanco-gris Poca No 9
presenta
210101 totalmente 2,7 ml. blanquecino Poca No 8
presenta
260101 totalmente 2,4 ml. blanco aumentada Normal 8

020201 totalmente 2 ml. blanquecino normal Menos 8


de 1 cm.
Movilidad
Nº A B C D
Muestra
140101 24% 6% 10% 60%

190101 93% 3% 0% 4%

190102 71% 17% 4% 8%

210101 79% 11% 5% 5%

260101 68% 17% 7% 8%

020201 72% 14%. 8% 6%


Test de vitalidad
Nº Muestra Vivos Muertos

140101 62% 38%

190101 73% 27%

190102 65% 35%

210101 80% 20%

260101 87% 13%

020201 77% 23%.

Recuento de espermatozoides en cámara


Nº Muestra Recuento

140101 28.500.000

190101 2.700.000

190102 48.300.000

210101 58.500.000

260101 98.300.000

020201 109.600.000

Fórmula espermática
Nº Normales A. A. A. Cola
Muestra cabeza Segmento
140101 75% 15% 3% 7%

190101 92% 5% 1% 2%

190102 84% 12% 4% 0%

210101 81% 11% 5% 3%

260101 88% 10% 2% 0%

020201 95% 4%. 1% 0%

A continuación se presentan algunas fotografías tomadas en el aula de las muestras


de semen analizadas:
Muestra 140101:
Muestra 190101 y 190102:
Muestra 210101:
Fotos semen 260101:
Muestra de semen 020201:
30/01/09
Título de la práctica:
Determinación cuantitativa de fosfatasa ácida (FAC)
Fundamento de la práctica:
La α-amilasa hidroliza el 2-cloro-4-nitrofenil-α-D-maltotriósido (CNPG3) a 2-cloro-4-
nitrofenol (CNP) y forma 2-cloro-4-nitrofenil-α-D-maltoside (CNPG2), maltotriosa
(G3) y glucosa (G), según la siguiente reacción:
10 CNPG3 Amilasa 9 CNP + 1 CNPG2 + G3 + G

La velocidad de formación de 2-cloro-4-nitrofenol, determinado fotométricamente, es


proporcional a la concentración catalítica de α-amilasa en la muestra ensayada.
Materiales:
REACTIVOS
MES pH 6,0 100 mmol/L
CNPG3 2,25 mmol/L
Cloruro sódico 350 mmol/L
R
Acetato cálcico 6 mmol/L
Tiocianato potásico 900 mmol/L
Ácida sódica 0,95 gr/L
PREPARACIÓN
Reactivo listo para su uso.
CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD
Todos los componentes del kit son estables, hasta la fecha de caducidad indicada en la
etiqueta, cuando se mantienen los frascos bien cerrados a 2-8ºC, protegidos de la luz y
se evita su contaminación. No usar reactivos fuera de la fecha indicada.
Una vez abierto el reactivo es estable 60 días, si se cierra inmediatamente después de su
uso y se conserva a 2-8ºC.
Indicadores de deterioro de los reactivos:
- Presencia de partículas y turbidez.
- Absorbancias del Blanco a 405 > 0,50.
MATERIAL ADICIONAL
- Espectrofotómetro o analizador para lecturas a 405 nm.
- Baño termostatable a 37ºC (Nota 1).
- Cubetas de 1,0 cm de paso de luz.
- Equipamiento habitual de laboratorio(Nota 2).
MUESTRAS
- Suero o plasma, separado lo antes posible de los hematies. Como anticoagulante se
recomienda la heparina.
- Orina, ajustar el pH aproximadamente a 7,0 antes de conservar.
Estabilidad: 1 mes a 2-8ºC.
Procedimiento:
1. Condiciones del ensayo: Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .405 nm
Cubeta:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .1 cm paso de luz
Temperatura constante . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 37ºC
2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada.
3. Pipetear en una cubeta:
Suero o plasma Orina
R (mL) 1,0 1,0
Muestra 20 10
(μL)

4. Mezclar, incubar 30 segundos.


5. Leer la absorbancia (A) inicial de la muestra, poner en marcha el cronometro y leer la
absorbancia cada minuto durante 3 minutos.
6. Calcular el promedio del incremento de absorbancia por minuto (ΔA/min).

Resultados:
Las absorvancias obtenidas son las siguientes:
Abs1= 0,136
Abs2= 0,161
Abs3= 0,193
Abs4=0,216

Delta1= 0,025
Delta2=0,032
Delta3=0,023

Concentración= 105 U/l

Rango de Spintrol: 154-220


Interpretación clínica de los resultados:
La α-amilasa (AMS) es una enzima que ayuda a digerir el glucógeno y el almidón. Se
produce principalmente en las glándulas salivales y el páncreas exocrino. Su
determinación se realiza principalmente para diagnosticar o controlar enfermedades del
páncreas como pancreatitis crónica o aguda. Puede reflejar también enfermedad de la
vesícula biliar, algunos problemas gastrointestinales y otros trastornos.
El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de
laboratorio.

30/01/09
Título de la práctica:
Determinación cuantitativa de bilirrubina
Fundamento de la práctica:
La bilirrubina se convierte en azobilirrubina mediante el ácido sulfanílico diazotado
midiéndose fotométricamente. De las dos fracciones presentes en suero, bilirrubin-
glucurónido y bilirrubina libre ligada a la albúmina, sólo la primera reacciona en medio
acuoso (bilirrubina directa) precisando la segunda la solubilización con cafeína para que
reaccione (bilirrubina indirecta). En la determinación de la bilirrubina indirecta se
determina también la directa, correspondiendo el resultado a la bilirrubina total.
La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de bilirrubina
presente en la muestra ensayada.
Materiales:
REACTIVOS
R1 Ácido sulfanílico 30 mmol/L
Ácido clorhídrico 400 mmol/L
R2 Sodio nitrito 50 mmol/L
R3 Cafeína 100 mmol/L
Opcional BILIRUBIN CAL Ref:1002250
PREPARACIÓN
Todos los reactivos están listos para su uso.
CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD
Todos los componentes del kit son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la
etiqueta del vial, cuando se mantienen los viales bien cerrados a 2-8ºC, protegidos de la
luz y se evita la contaminación durante su uso.
No usar reactivos fuera de la fecha indicada.
Indicadores de deterioro de los reactivos:
- Presencia de partículas y turbidez.
- Desarrollo de color en el R 2.
MATERIAL ADICIONAL
- Espectrofotómetro o analizador con cubeta para lecturas a 540 nm.
- Cubetas de 1,0 cm de paso de luz.
- Equipamiento habitual de laboratorio.
MUESTRAS
Suero o plasma libre de hemólisis. Proteger de la luz.
Estabilidad de la muestra: 4 días a 2-8ºC o 2 meses a –20ºC.

Procedimiento:
1. Condiciones del ensayo: Longitud de onda: . . . . . . . . . . .
. . . . . . . . . . . . 540 nm
Cubeta:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. .1 cm paso de luz
Temperatura . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 15-25ºC
2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua
destilada.
3. Pipetear en una cubeta:

B. Total B. Directa Blanco


R 1 (μL) 200 200 200
R 2 (gotas) 1 1 --
ClNa 9 g/L (mL) -- 2,0 2,0
R 3 (mL) 2,0 -- --
muestra / 200 200 200
Calibrador (μL)

4. Mezclar e incubar exactamente 5 minutos a 15-25ºC.


5. Leer la absorbancia (A).
Resultados:

Concentración día 4/2= 1,67 mg/dl.


Concentración día 6/2 (suero patológico)= 1,67 mg/dl VN hasta 2,8 mg/dl
Concentración día 11/2=1,29 mg/dl.
Rango de Spintrol Normal= 1,33-1.91 mg/dl.

Interpretación clínica de los resultados:


La bilirrubina se origina por la degradación de la hemoglobina.
Es transportada del bazo al hígado y se excreta en la bilis.
La hiperbilirrubinemia es el resultado de un incremento de la bilirrubina en plasma.
Causas más probables de la hiperbilirrubinemia:
Bilirrubina Total: Aumento de la hemólisis, alteraciones genéticas, anemia neonatal,
alteraciones eritropoyéticas, presencia de drogas.
Bilirrubina Directa: Colestasis hepática, alteraciones genéticas y alteraciones hepáticas.
El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de
laboratorio.

16/2/09

Título de la práctica:
Determinación cuantitativa de urea

Fundamento de la práctica:
La ureasa cataliza la hidrólisis de la urea, presente en la muestra, en amoníaco (NH3) y
anhídrido carbónico (CO2). El amoníaco formado se incorpora al α-cetoglutarato por
acción de la glutamato deshidrogenasa (GLDH) con oxidación paralela de NADH a
NAD+:
Urea + H2O + 2 H+ Ureasa 2 NH3 + CO2

2 NH3 + α-Cetoglutarato + NADH GLDH H2O + NAD+ + L-


Glutamato

La disminución de la concentración de NAD+ en el medio es proporcional a la


concentración de urea de la muestra ensayada-

Materiales:
R 1 Tampón TRIS pH 7,8 α- 80 mmol/L 6 mmol/L
Cetoglutarato
R 2 Enzimas Ureasa Glutamato 3750 U/L 6000 U/L
deshidrogenasa 0,32 mmol/L
(GLDH) NADH
UREA CAL Patrón primario acuoso de Urea 50
mg/dL

• Espectrofotómetro o analizador para lecturas a 505 nm.


• Cubetas de 1,0 cm de paso de luz.
• Micropipetas (10-1.000 μl.)
• Tubos de plástico
• Suero o plasma heparinizado: No usar sales de amonio o fluoruro como
anticoagulantes.
• Orina: Diluir la muestra al 1/50 con agua destilada. Mezclar. Multiplicar el
resultado obtenido por 50 (factor de dilución); Evitar el crecimiento bacteriano,
manteniendo el pH < 4.
La urea es estable 5 días a 2-8ºC.

Procedimiento:
1. Revisar la programación en el fotocolorímetro.
2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a aIire.
3. Pipetear en una cubeta:

Blanco Patrón Muestra


R (mL) 1,0 1,0 1,0
Patrón -- 10 --
(μL)
Muestra -- -- 10
(μL)
4. Mezclar y leer las absorbancias a los 30 s (A1) y a los 90 s (A2).
Resultados:
Se ha obtenido un valor de 151 mg/dl.
Los valores del spintrol aceptados van entre 111-153 mg/dl.

Interpretación clínica de los resultados:


La urea es el resultado final del metabolismo
de las proteínas; se forma en el hígado a
partir de su destrucción.
Puede aparecer la urea elevada en sangre
(uremia) en dietas con exceso de proteínas,
enfermedades renales, insuficiencia cardiaca,
hemorragias gástricas, hipovolemia y
obstrucciones renales.
El diagnóstico clínico debe realizarse
teniendo en cuenta todos los datos clínicos y
de laboratorio.
Valores normales:
Suero: de 15 a 45 mg/dL (2.49-7.49 mmol/L)
Orina: de 20 a 35 gr/24 horas Estos valores son orientativos.
La técnica se ha realizado correctamente y los resultaos obtenidos son fiables.

Título de la práctica:
Determinación cuantitativa de ácido úrico
Fundamento de la práctica:
El ácido úrico es oxidado por la uricasa a alantoína y peróxido de hidrógeno (2H2O2)
que en presencia de peroxidasa (POD), 4-aminofenazona (4-AF) y 2-4 Diclorofenol
Sulfonato (DCPS) forma un compuesto rosáceo:

Ácido úrico + 2H2O + O2 Uricasa Alantoína + CO2 + 2H2O2

2H2O2 + 4-AF + DCPS POD Quinonaimina + 4H2O

La intensidad de quinonaimina roja formada es proporcional a la concentración de ácido


úrico presente en la muestra ensayada
Materiales:
• Reactivo
R 1 Tampón Fosfatos pH 7,4 2-4 50 mmol/L 4 mmol/L
Diclorofenol Sulfonato
(DCPS)
R 2 Enzimas Uricasa Peroxidasa 60 U/L 660 U/L 200 U/L
(POD) Ascorbato 1 mmol/L
oxidasa 4 -
Aminofenazona (4-AF)
URIC ACID CAL Patrón primario acuoso de Ácido úrico
6 mg/dL

• Cubetas de 1,0 cm de paso de luz.


• Equipamiento habitual de laboratorio.
• Tubos de plástico
• Suero o plasma1: Estabilidad 3-5 días a 2-8ºC y 6 meses a –20ºC.
• Orina (24 h): Estabilidad 3 días a temperatura ambiente a pH > 8. Diluir la
muestra al 1/50 en agua destilada. Mezclar. Multiplicar el resultado obtenido por
50 (factor de dilución); Si la muestra es turbia, calentarla a 60ºC 10 min. para
disolver los precipitados de urato y ácido úrico. No refrigerar.

Procedimiento:
1. Revisar el programa del fotocolorímetro
2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada.
3. Pipetear en una cubeta:

Blanco Patrón Muestra


RT (mL) 1,0 1,0 1,0
Patrón (L) -- 25 --
Muestra (L) -- -- 25
4. Mezclar e incubar 5 minutos a 37ºC o 10 min. a temperatura ambiente.
5. Leer la absorbancia (A) del Patrón y la muestra, frente al Blanco de
reactivo. El color es estable como mínimo 30 minutos.
Resultados:
Se obtuvo un resultado de 5,16 mg/dl en suero normal, el rango de valores que ofrece la
marca es de 4,02- 5,42 mg/dl. Por lo tanto el resultado obtenido está dentro de esos
límites.

Interpretación clínica de
los resultados:
El ácido úrico y sus sales
son el producto final del
metabolismo de las
purinas. En una
insuficiencia renal
progresiva hay una
retención en sangre de
urea, creatinina y ácido úrico. Niveles altos de ácido úrico son indicativos de patología
renal y generalmente se asocia con la gota.
El diagnostico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de
laboratorio.
Los valores considerados como normales para este parámetro por spinreact son:
Suero o plasma:
Mujeres 2,5 - 6,8 mg/dL 149 – 405
mol/L
Hombres 3,6 - 7,7 mg/dL 214 – 458
mol/L
Orina: 250 - 750 mg/24 h 1,49 -
4,5 mmol/24 h

11 y 16 de enero
Título de la práctica:
Determinación cuantitativa de creatinina
Fundamento de la práctica:
El ensayo de la creatinina esta basado en la reacción de la creatinina con el picrato
alcalino descrito por Jaffé. La creatinina reacciona con el picrato alcalino formando un
complejo rojizo. El intervalo de tiempo escogido para las lecturas permite eliminar gran
parte de las interferencias conocidas del método. La intensidad del color formado es
proporcional a la concentración de creatinina en la muestra ensayada

Materiales:
REACTIVOS
R 1 Reactivo Pícrico Ácido pícrico 17,5 mmol/L

R 2 Reactivo Hidróxido sódico 0,29 mol/L


Alcalinizante
CREATININE CAL Patrón primario acuoso de
Creatinina 2 mg/dL

PRECAUCIONES R1(Ácido pícrico):Corrosivo (C): R35: Provoca quemaduras


graves. R2(NaOH): Irritante (Xi): R36/38: Irrita ojos y la piel. S26: En caso de contacto
con los ojos, lavar de inmediato con abundante agua y acudir al medico. S37/39: Usar
guantes adecuados y proteger cara y ojos. S45: En caso de accidente o malestar, acudir
inmediatamente al médico.
PREPARACIÓN Reactivo de trabajo (RT): Mezclar volúmenes iguales de R 1
Reactivo Pícrico y de R 2 Reactivo Alcalinizante. Estabilidad del reactivo de trabajo: 10
días a 15-25ºC.
CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD Todos los componentes del kit son estables,
hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta, cuando se mantienen los frascos
bien cerrados a 2-8ºC, protegidos de la luz y se evita su contaminación. No usar
reactivos fuera de la fecha indicada.
Indicadores de deterioro de los reactivos:
- Presencia de partículas y turbidez.
- Absorbancia (A) del Blanco a 492 nm 1,80.
MATERIAL ADICIONAL
- Espectrofotómetro o analizador para lecturas a 492 nm.
- Cubetas de 1,0 cm de paso de luz.
- Equipamiento habitual de laboratorio.
MUESTRAS
- Suero o plasma heparinizado1.
Estabilidad de la creatinina: al menos 24 horas a 2-8ºC.
- Orina: Diluir la muestra al 1/50 con agua destilada. Mezclar. Multiplicar el resultado
obtenido por 50 (factor de dilución)
Estabilidad de la creatinina: 7 días a 2-8ºC.

Procedimiento:
1. Condiciones del ensayo:
Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . 492 nm (490-510) Cubeta:. . . . . . . . . . . . . . . . . . .
. . . . .. .1 cm paso de luz Temperatura. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 37ºC / 15-25ºC
2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada.
3. Pipetear en una cubeta:

Blanco Patrón Muestra


RT (mL) 1,0 1,0 1,0
Patrón -- 100 --
(Nota1,2)
(L)
Muestra -- -- 100
(L)

4. Mezclar y poner en marcha el cronómetro.


5. Leer la absorbancia (A1) al cabo de 30 segundos y al cabo de 90 segundos (A2) de la
adición de la muestra.
6. Calcular: A= A2 – A1 .

Resultados:
En suero:
B- 0,000
S- 0,011
M pat- 0,103
Concentración: 3,77 mg/dl. VN pat.= 2,71- 3,89 mg/dl.
B- 0,000
S- 0,017
M pat.$- 0,235
Concentración: 4,92 mg/dl.
En orina:
3,51 mg/dl.

Interpretación clínica de
los resultados:
El ácido úrico y sus sales
son el producto final del
metabolismo de las
purinas. En una
insuficiencia renal
progresiva hay una
retención en sangre de
urea, creatinina y ácido úrico. Niveles altos de ácido úrico son indicativos de patología
renal y generalmente se asocia con la gota.
El diagnostico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de
laboratorio.
Los valores considerados como normales para este parámetro por spinreact son:
Suero o plasma:
Mujeres 2,5 - 6,8 mg/dL 149 – 405
mol/L
Hombres 3,6 - 7,7 mg/dL 214 – 458
mol/L
Orina: 250 - 750 mg/24 h 1,49 -
4,5 mmol/24 h

Resultado de las tiras de proteinograma patológico:

QM- 16% 0,022


LDL-25% 0,034
VLDL-39% 0,025
HDL-18% 0,024
Título de la práctica:
Estudio del sedimento de orinas de hospital

Fundamento de la práctica:
El estudio del sedimento urinario comprende la investigación, hallazgo e interpretación
de una serie de elementos o estructuras, del más variado origen y composición, que
aparecen suspendidas en la orina y que proporcionan ayuda para el diagnóstico y
evolución de las enfermedades renales, del aparato genitourinario, así como otras que
puedan repercutir en la alteración de la formación de la orina.

Materiales:
• Muestra de orina fresca
• Centrífuga
• Tubos de centrífuga
• Pipeta Pasteur
• Portaobjetos
• Cubreobjetos
• Microscopio

Procedimiento:
Siempre que sea posible, la muestra debe examinarse antes de transcurridas 3-4
horas desde su recogida ya en algunas estructuras presentes (células, cilindros, etc.) se
lisan fácilmente.
Obtención del sedimento:
1. Homogeneizar bien la muestra.
2. Colocar unos 10 mL de orina, en un tubo de centrífuga (preferiblemente
de fondo cónico).
3. Centrifugar a 2.000 r.p.m. durante 5 minutos.
4. Decantar "completamente" el sobrenadante.
5. Resuspender el sedimento residual.
6. Montar una preparación "en fresco" del sedimento (una gota entre porta y
cubreobjetos).Es muy importante evitar la formación de burbujas.
7. Observar, sin demora, al microscopio (40x) con intensidad lumínica
media y condensador a media altura.

Resultados:
Se presentan las fotografías junto al junto al informe del citómetro y las tiras reactivas.

Este estudio se ha llevado a cabo los días 27-2, 4-3,6-3,9-3 y 18-3

27/2/09
4/3/09
6/3/09
18/3