UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL

FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS

CARRERA DE QUÍMICA Y FARMACIA
ANÁLISIS INSTRUMENTAL I

SEMINARIO # 3

TEMA:
MÉTODO POR ESPECTROFOTOMETRÍA DE ABSORCIÓN MOLECULAR VISIBLE PARA LA
DETERMINACIÓN DE YODURO EN MUESTRAS DE ORINA

DOCENTE:
Q.F ZORAIDA BURBANO GÓMEZ MSc

ALUMNO:
Carrión Gómez María Auxiliadora
Bacilio Arroyo María de Lourdes
Orellana Pacheco Diana Vanessa
Zamora Pérez Wilson Gustavo

PARALELO: G-1

SEXTO SEMESTRE – CICLO II 2018 – 2019

GUAYAS – GUAYAQUIL – ECUADOR
 PREPARACIÓN DE ESTÁNDARES,
OBJETIVO REACTIVOS, CURVAS DE CALIBRADO
 Demostrar la espectrometría de la PREPARACIÓN DE SOLUCIÓN
radiación de luz visible y su importancia en PATRÓN
el campo clínico para la cuantificación de
concentraciones y absorbancias de yoduro
en muestras de orina de los estudiantes de
la Universidad de los Andes mediante la Solución madre
aplicación la Ley de Lambert y Beer.

KI (25 µg/ml ) 99,5% PUREZA

Soluciones
primarias

8 soluciones KI
(0,5 - 4,0 µg/ml)
 DILUCIÓN DE BARRIDO ESPECTRAL BARRIDO ESPECTRAL
PATRONES CON O- CON BENCIDINA
FENILENDIAMINA
(OPD)
Solución patrón Solución patrón
1 frasco ámbar ( 2,5 µg/ml) KI
( 2,5 µg/ml) KI

1 ml de cada solución
patrón KI ( por
separado) Barrido espectral Barrido espectral
(OPD) 400 nm- (Bencidina) 450
650 nm nm- 700 nm
2,95 g ác
Agregar 4 ml de solución
cítrico y
de depresores
1,10g NaOH

Obteniendo máx Obteniendo máx

En 250 ml HCl 16% abb 450 nm abb 650 nm
pureza a c/u
 PREPARACIÓN DE LA CURVA DE
LECTURA DE LOS PATRONES
CALIBRACIÓN PREVIO TRATAMIENTO DE
PARA LA CURVA DE
LOS PATRONES CON CARBÓN ACTIVADO
CALIBRACIÓN
3 tubos de ensayo ( c/u
patrones)
Solución patrón (200
µl OPD 2,5 mM
1ml de patrón y 4 ml
solución depresora (c/tubo)

0,347g carbón activado 1 gota CH33COOH

2,5%

Mezclar 30 s. Vortex (VM-

1000)

Centrífuga (2700 rpm- 5 200 µL H22O22 12%

min)

Filtrar cada muestra

patrón Lectura-
espectrofotómetro
JENWAY 6310 a 450
nm
Colocar en frasco ámbar
 EQUIPO Y COMPONENTES DEL INSTRUMENTO
ESPECTRÓFOTOMETRO JENWAY 6310
 Longitud de onda de 320 a 1000nm
 Anchura de banda de 5 nm.

Muestra:  Compartimiento interior de gran

dimensión que admite cubetas de plástico de 10 a
100 mm de paso de luz.
Detector: Emplea un detector de matriz de diodos
con 124 elementos, se encuentra la elevada
velocidad de barrido con capacidad para recorrer
todo el rango de longitudes de onda de 335 a 800
Fuente de energía: Lámparas: Halógena de
nm en menos de 10 segundos. Considerándose una
tungsteno 20W, 12V modelo Visible
reacción química rápida.
Selector: Monocromador holográfico para
asegurar una alta repetitividad, con motor
de pasos para garantizar una posición Sistema de lectura: Pantalla gráficos LCD
repetitiva del monocromador.
 TRATAMIENTO DE LA LECTURAS DE LA
MUESTRA DE ORINA MUESTRA DE ORINA
TRASMITANCIA
Muestra de orina
Frasco ( muestras
 Rango: 0 a 199.9% Medir el pH (antes y
de orina)

 Resolución: 0.1% después del trat)

 Luz difusa: <0.5% Analizar muestras x 3

 Precisión fotométrica: ±2% 200 µL OPD 2,5 mM
Colocar 1 ml muestra
c/ tubo

4 ml sol depresores
1 gota CH33COOH
2,5%
0,347g carbón
ABSORBANCIA activado

Mezclar vortex 30 s

 Rango: -0.300 a 1.999A Centrifugar ( 2700

200 µL H22O22 12%

 Resolución: 0.001A rpm) - 5 min

Filtrar ( Papel filtro)

Lectura Abb . T
Colocar en frasco °ambiente.
ámbar
CURVAS DE CALIBRACIÓN CURVA DE CALIBRACIÓN
PREVIO TRATAMIENTO CON
CURVA DE CALIBRACIÓN SIN CARBÓN ACTIVADO
TRATAMIENTO DE CARBÓN
ACTIVADO

Se observa una regresión lineal de 0,99708 ,

Se realizó una curva de calibración utilizando
como cromógeno OPD 2,5 mM y 1 minuto de
tiempo para su lectura, con un resultado (R=
0,87531).
lo que proporciona mayor confiabilidad del
método a partir de una absorbancia de 0,05.
Existe linealidad entre 0,5 y 4,0 µg/mL de
concentración, estableciéndose que existe
una confiabilidad de los resultados
obtenidos en el intervalo estudiado.
 CONCLUSIÓN

Se demostró que en el estudio de

espectrofotometría de absorción molecular
visible es de vital importancia debido a la
obtención de niveles de yoduro en orina de
manera directa y no a través de medidas de
las hormonas T3 y T4, las cuales se miden
en suero. Presentando buena sensibilidad,
selectividad, linealidad en el intervalo de
concentración establecido (0,0 a 4,0
µg/mL), una altísima precisión, y una alta
confiabilidad en la metodología utilizada.
Cumpliendo con la Ley de Lambert y Beer
(Absorbancia vs Concentración),
satisfaciendo las condiciones de linealidad
del método analítico, cumpliendo los
requerimientos de un coeficiente de
determinación igual o mayor a 0,999.