MEDIOS DE CULTIVO

Microbiologia industrial
 1.- CULTIVO DE MICROORGANISMOS

•El cultivo de microorganismos consiste en proporcionarles las condiciones

físicas, químicas y nutritivas adecuadas para que puedan multiplicarse de forma
controlada.
•Toda célula viva requiere consumir nutrientes que le permitan realizar los
procesos metabólicos necesarios para su supervivencia.
•

•MEDIOS DE CULTIVO
•Es la mezcla adecuada de nutrientes que permiten el crecimiento de los
microorganismos, células o plantas.
 2.- REQUERIMIENTOS QUIMICOS
El medio de cultivo debe tener una composición tal que provea al
microorganismo los nutrientes que le aporten energía y elementos químicos
para la síntesis de sus constituyentes celulares.
La composición media de un microorganismo es: (% p/p): C = 46,5; H = 6,94; 0
= 31,0 y N = 10,85, fósforo (3%), azufre (1%) y elementos traza como: Fe, K,
Mg, Mn, Co, Mb, Cu y Zn.
El ión K actúa como coenzima y probablemente actúa como catión en la
estructura aniónica de varios componentes celulares.
El ión Mg es esencial para la estabilidad de los ribosomas y actúa como
cofactor en numerosas reacciones del metabolismo.
Tanto el K como el Mg se incorporan a los medios en forma de sales como
fosfato y sulfato.
 Disponibilidad de los componentes

•Aparte de su presencia en el medio de cultivo, los nutrientes deben estar

disponibles para ser usados por la célula (en forma asimilable).
• Así, el C debe estar en forma de carbono orgánico para los heterotrofos y
como CO2 para los autotrofos, el N en forma de NH4, de NO3- o de NO2- o en
forma de aminoácidos; el P en forma de PO43-; el S como aminoácidos
sulfurados o como SO42-, etc.
•Con el objeto de controlar su concentración y prevenir la precipitación de los
iones metálicos, puede ser necesario quelar el ion mediante algún agente
quelante como el EDTA. (OEA, 2006).
 Fuentes de Macronutrientes

- CO2 Carbohidratos, azúcares,

Fuente de
- Compuestos proteínas, aminoácidos,
carbono orgánicos lípidos, ácidos grasos,
glicerol

Fuente de - Inorgánica NH4, NO3-, N2

nitrógeno - Orgánica Proteínas, peptonas, aa,
bases púricas y
pirimídicas, urea
Fuente de - Inorgánica Fosfatos
fósforo - Orgánica Esteres del ácido fosfórico

Fuente de - Inorgánica Sulfuros y sulfatos

azufre - Orgánica Aminoácidos sulfurados,
vitaminas
 Requerimientos de Oxigeno

•Según los requerimientos de oxigeno, los microorganismos son:

•Aerobios
•obligados: requieren oxígeno (21%). Ej. Bacillus, hongos, Acetobacter aceti,
etc.
• microaerofílicos: requieren niveles menores (5-10%). Ej. Azospirillum.

•Anaerobios
•obligados: no toleran O2, mueren en su presencia. Ej. Methanobacterium,
Clostridium.
•facultativos: no requieren O2, pero el desarrollo es mejor con O2. Ej. E. coli,
Saccharomyces cerevisiae.
•aerotolerantes: no son sensibles al oxígeno (crecen en ausencia o
presencia de oxígeno de hasta 8%). Ej. Enterococcus faecalis.
 TIPOS DE MEDIOS
•A.- Según la naturaleza de sus constituyentes.

•Definidos cuando su composición química se conoce totalmente. Se usan en

laboratorio para trabajos de investigación.
•Complejos No se conocen los componentes ni las cantidades exactas
presentes, y están compuestos por mezclas de extractos de materiales
complejos (extracto de levadura, extracto de carne, etc.).
•
 ….Tipos de medios
•B.- Según la consistencia del medio.

•Medios Liquidos, si no se añaden agentes gelificantes.

Son útiles para promover el crecimiento celular (Caldo de
cultivo)
•Ejm. caldo lactosado para coliformes.
•Medios sólidos. si se añade un agente solidificante no
consumible por los microorganismos (normalmente agar).
Se usan para obtener colonias aisladas del m.o de interés.
• El crecimiento se observa en la superficie de placa o pico
de flauta. Agar al 1-2%

•Medios semisólidos (agar al 0.7%) para poner de

manifiesto la movilidad de la bacteria
•Siembra con aguja, y se observa si la bacteria presenta
turbidez móvil en el tubo.
•Ejplo. Agar SIM (para verificar la movilidad, producción de
indol y de sulfuro de hidrógenotubo), Agar LIA (lisina hierro-
Lisien iron agar).
•c.- Según el uso

•Medios de laboratorio.
•Pueden ser medios definidos o complejos.
•Se usan para:
•Desarrollo de m.o (reproducción)
•Conservar m.o
•Aislar m.o.

•Medios industriales.
•Generalmente son medios complejos y se desarrollan a partir de subproductos
industriales como; melazas de caña o remolacha, suero de leche, licor del maíz.
Etc.
•Se usan para:
•Producción de biomasa.
•Producción de metabolitos
•d.- Según la función.
•Generales, Es un medio altamente enriquecido que permite el crecimiento de todo tipo de
microorganismos. Ejemplo: Agar nutritivo, caldo nutritivo
•Selectivos cuando favorecen el crecimiento de ciertos microorganismos mientras suprimen el de
otros. Ejemplo Agar sabouraud (para hongos y levaduras), que usa un antibiótico, como
cloranfenicol, para impedir el crecimiento de bacterias. Caldo selenito, el selenito de sodio inhibe
la flora Gram positiva y la mayoría de la flora entérica excepto Salmonella.

•Diferenciales. Capaz de distinguir dos m.o por su crecimiento diferencial en el mismo, usando las
propiedades metabólicas de ambos en presencia de un determinado nutriente y de un indicador
que evidencia por ejemplo, un pH ácido en su entorno. (Agar LIA: se utiliza para distinguir las
bacterias que son capaces de lisar carboxilato y / o producir SH2 de las que no pueden)

•Selectivo-diferenciales cuando combinan las dos características anteriores (por ejemplo, el agar
de MacConkey para aislar bacilos Gram negativos y entéricos.
 MEDIOS DE LABORATORIO
•Pueden ser sintéticos o complejos, y sus constituyentes son:

•a. Fuentes de carbono

•1.1. Carbohidratos.
•Monosacáridos. Dextrosa.
•Oligosacáridos. Lactosa (suero de leche), Sacarosa. Dextrina.
•Polisacáridos. Almidón. agar
•1.2. alcoholes.
•Glicerol. Etanol. Metanol
•1.3. Lípidos
•1.4. Hicrocarburos.
b. Fuentes de nitrógeno.

•Inorgánicos: Nitratos, Sales de amonio

•Orgánicos. Peptonas. Digeridos, extractos.

•1) Peptonas. Obtenidas por hidrólisis ácida o enzimática de fuentes proteicas

como carne, pescado, caseína, gelatina, harina de soja, algodón, girasol, etc.
•Representa una fuente fácilmente asequible de nitrógeno y carbón, pues los
aminoácidos y péptidos presentes en la peptona, son mas fáciles de asimilar.
•Mediante ajuste de la relación enzima-sustrato y variando tiempo de hidrólisis es
posible variar el tamaño de la cadena de polipéptidos.
•2) Extracto. Se obtiene por extracción acuosa y concentración posterior de una
fuente rica en nutrientes: Extracto de carne, extracto de levadura (obtenida
mediante autólisis o plasmólisis de la levadura, es básicamente una mezcla de
aminoácidos, péptidos, vitaminas solubles en H2O y carbohidratos), etc.
 c. Micronutrientes

•Macronutrientes. En cantidades de gr/l. C, O2, H2, N2, P, S, K, Na, Ca, Mg

•Micronutrientes. oligoelementos, en mg/l o µg/l

•Son activadores enzimáticos. Fe, Cu, Zn, Mn, Mo, Co, B.
•Sales: NaCl, KH2PO4, NH4(SO4), MnSO4, ZnSO4, CaCl2.

•Con respecto a los micronutrientes se distinguen 2 categorías:

•a) Los que son frecuentemente esenciales para el crecimiento como Ca, Mn,
Fe, Co, Cu y Zn y
•b) los que son raramente esenciales como B, Na, Al, Si, Cl, V, Cr, Ni, As, Se,
Mo, Sn, I.
 d. Suplementos
Compuestos que inhiben o favorecen el crecimiento de algunos microorganismos.

d.1. inhibidores.
•Antibióticos: penicilina, estreptomicina, cloranfenicol. Ejm. Agar sabouraoud.
(Contiene cloranfenicol), e inhibe a bacterias.
•Fungicidas: fungizona, amphotericina (inhibe mohos y levaduras).
•Metales pesados: Agar sulfito-bismuto. Contiene Bi y colorante verde brillante e
inhiben a bacterias Gram (+) y mayoría de Gram (-), excepto a salmonella.
•Compuestos orgánicos inhibidores: Agar salmonella-shigella. Contiene altas
concentraciones de sales biliares y citrato de sodio que inhibe a las Gram (+) y mayoría
de gram(-) incluyendo coliformes, excepto salmonella y shigella.

•D.2.- factores de crecimiento.

•Compuestos orgánicos que se suministran en bajas concentraciones.
•No son sintetizados por los m.o que se desea favorecer, pero son necesarios para su
desarrollo. Vitaminas, aminoácidos, ácidos grasos.
•Los aminoácidos y vitaminas del grupo B como tiamina, riboflavina, ácido pantotético,
niacina, etc., que representan para muchas bacterias y levaduras factores esenciales en
los medios sin los cuales no se produce crecimiento celular. La mayor parte de las
vitaminas son constituyentes de co-enzimas.
 ….Suplementos
d.3. Colorantes e indicadores.
•Indicadores de la reacción del medio. Indicadores del potencial de oxido-
•Verde malaquita: reducción.
•pH muy ácido: amarillo Azul de metileno: Medio oxidante: azul,
•pH =2 : verde Medio reductor: incoloro
•pH = 11.5: azúl
•pH = 14: incoloro Indicadores selectivos.
•Rojo-fenol. Verde malaquita, cristal violeta: inhiben
•pH = 7.8: azúl bacterias gram(+)
•pH =7.8: púrpura. Colorantes básicos: Ejplo. Agar Mc-Conkey.
•pH = 7.4: rojo Contiene sales biliares y cristal violeta que
•oH = 7.0: naranja inhibe a las gram(+)
•pH =6.5: amarillo. Agar EMB. Para determinación de
•Para indicar producción de acidos; coliformes fecales. Contiene eosina y azul
láctico, cítrico, acético. de metileno que inhiben gram(+) y facilita el
•Rojo neutro desarrollo de enterobacterias.
•Rango de pH: 6.8-8.0 (rojo a amarillo)
•Azul de bromotimol
•Rango de pH: 6-7.6 (amarillo a azul).
Particularidades de los medios de laboratorio.
•Para la preparación de medios solidos, el agar es el agente solidificante mas
empleado. Se licúa completamente al hervir el agua y se solidifica a 40 grados.
Con algunas excepciones no tiene efecto sobre el crecimiento de las bacterias
y no es atacado por las que crecen en él.
•La fuente de nitrógeno: la forma más extendida de aportar N, es utilizar
peptona.
•En el caso de medios sintéticos hay concentraciones definidas como:
•Agar McConkey …. 50 g/l
•Agar nutritivo ……. 20 g/l
•Agar LIA …………. 32 g/l
•Agar TSI …………. 65 g/l
•Agar EMB ………. 36 g/l
 Ejemplos: Medios
General: Agar nutritivo Selectivo: Agar Sabouraud
•El agar nutritivo es un medio de cultivo •Medio para la detección y
usado como rutina para todo tipo de aislamiento de hongos.
bacteria. •Composición por Litro:
•El agar nutritivo contiene normalmente •Digesto pancreático de
(p/v): caseína- 5g
•0,5 % de peptona; •Peptona de tejido digestivo -5
•0,3 % de extracto de carne/extracto de g
levadura; •Dextrosa -40g
•1,5 % de agar; •Agar- 15g
•0,5 % de cloruro de sodio; •cloranfenicol
•agua destilada;
•pH casi neutro (6,8) a 25 °C.
•El caldo nutritivo se hace exactamente
igual, excepto por la omisión del agar.
 Ejplo: medio selectivo-diferencial

•Agar Mac Conkey.

•Este medio es selectivo contra Gram (+) debido al violeta cristal y a muchas Gram (-)
debido a las sales biliares (agentes tensoactivos que desorganizan muchas membranas
externas).
•En cambio las enterobacterias, están adaptadas a soportar las sales biliares en su habitat
natural (el intestino de vertebrados superiores) y pueden crecer en este medio.
•Acción diferencial. Los microorganismos capaces de fermentar lactosa producen una
caída de pH, junto con una absorción del colorante, apareciendo en la colonia el color rojo
(del rojo neutro), las colonias de m.o que no fermentan lactosa permanecen incoloras.
 Agar Eosina Azul de Metileno (EMB)
•La presencia de los colorantes eosina y azul de
metileno inhibe el crecimiento de la flora Gram
positiva; y permiten diferenciar a los Gram
negativos e indican cuales fermentan la lactosa.
•Las bacterias fermentadores de lactosa dan
colonias de un color violeta.
•Las colonias de Escherichia coli se distinguen por
ser regulares con un brillo metálico verde.
•Las colonias de Klebsiella son siempre mucosas,
grandes y ligeramente rosadas.
•Los no fermentadores de lactosa dan colonias
incoloras sin producir mayor modificación en el
medio a simple vista
 Agar KIA: Kliger Iron Agar
•Es un medio que permite evidenciar la habilidad de los
bacilos Gram negativos, para fermentar glucosa o lactosa,
así como su habilidad de producir SH2.
•La peptona de carne y la tripteína, aportan los nutrientes
adecuados para el desarrollo bacteriano. La lactosa y la
glucosa son los hidratos de carbono fermentables. El
tiosulfato de sodio es el sustrato usado para la producción
de ácido sulfhídrico, el citrato de hierro y amonio, es la
fuente de iones Fe 3+.
•El rojo de fenol es el indicador de pH.
•Por fermentación de azúcares, se producen ácidos, que
se detectan por medio del indicador rojo de fenol, el cual
vira al color amarillo en medio ácido.
•El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrógeno el
que reacciona luego con una sal de hierro
proporcionando el típico sulfuro de hierro de color negro.
 PREPARACION DE MEDIOS SINTETICOS

Se pueden preparar:
•A partir de sus constituyentes básicos, o por rehidratación de medios.
•PASOS:
•1. Rehidratación: Usar agua destilada.
•Se añade el agar al agua a Tº ambiente, se deja embeber unos minutos, se
agita y se calienta a 98-100 ºC hasta disolución total.
•En medios con azúcares, un excesivo calentamiento lleva a caramelización.
•Los medios agarizados con pH<5 son muy delicados porque la acidez sumada
al calor hidroliza las moléculas de agar, haciéndose el medio friable y
quebradizo.
•2. Secado de las placas.
•Para obtener colonias bien aisladas sembrar sobre placas cuya superficie no
esté húmeda.
•Poner la placa boca abajo (con el medio colgando), y se coloca la tapa de la
placa abajo.
 Preparación

•3- Esterilización (121 ºC, 15 min.)

•El tiempo de esterilización requerido, para tubos de ensayo de 18 x 50 mm es
12-14 min y para tubos de 38 x 200 mm, es 15-20 min. Para Erlenmeyers de 2 L.
es 30-35 min, y para 125 ml es de 12-14 min.

•Medios con componentes grasos, enfriar en agitación para no formar grumos.

•Los medios con azúcares se esterilizan mejor por debajo de 118 ºC (116 ºC,
30’), para evitar caramelización.
•4. Almacenamiento de medios deshidratados
•Almacenados bajo condiciones óptimas tienen caducidad de 3 a 5 años.
•Una vez abierto el bote no usar mas de 6 meses.
•Deben permanecer en armario cerrado, sin luz, humedad o calor (incluso de
lámparas y estufas).
•Conviene lugar fresco, pero no en refrigerador, porque condensaría agua.
•Una vez preparado y esterilizado se debe almacenar entre 2 y 8 °C, a menos
que el medio requiera alguna condición diferente.
 MEDIOS INDUSTRIALES

•Se usan siempre medios complejos.

•Es conveniente considerar tres fases:
•diseño
•formulación y
•optimización de los mismos.
 a. Diseño del medio
•Consiste en la elección de los componentes necesarios para lograr el
crecimiento y la formación de productos deseados.
•Tener en cuenta:
•Requerimientos nutricionales del m.o.
•Aspectos específicos del proceso
•Disponibilidad de las materias primas.
Materias primas fundamentales
•Las materias primas más importantes son: fuentes de carbono y de nitrógeno.
•Las fuentes de carbono.
•En un bioproceso industrial uno de los mayores costos es la fuente de carbono, que
representa el 50% de la economía del proceso. Un medio de cultivo industrial, debe ser
económico y con atos rendimientos de productos (Montoya et al, 1999).
• Se pueden emplear algunos subproductos de procesos industriales como fuentes de
nutrientes para el crecimiento microbiano, como la melaza, que es una fuente rica de
carbono
•
•Las fuentes de nitrógeno de naturaleza inorgánica más comunes, son el amoníaco o
las sales de amonio. Las orgánicas pueden ser: peptonas o extractos. (OEA, 2006)

•Así para la producción de renina a partir de Mucor miehei, se utiliza el suero de leche,
que posee alto contenido de lactosa y proteínas que lo hacen una buena fuente de
carbono y nitrógeno; la cáscara de papa y la harina de maíz, son posibles fuentes de
nitrógeno. (Osorio et al 2009)
-Requerimientos específicos.

•En algunos procesos existe la necesidad de otros agregados, que son

requerimientos específicos del proceso considerado.
•Un ejemplo es el caso de precursores que constituyen la base de una
molécula que debe ser sintetizada por el microorganismo, como el ácido fenil
acético para la penicilina.
•Otro ejemplo es, el agregado de sulfato, en el proceso de fermentación
alcohólica, que favorece la formación de glicerol.

•Un proceso que usa sales de amonio como fuente de nitrógeno, generalmente
implica descensos de pH, lo que obliga al agregado de agentes "buffer" como
mezclas de fosfatos o de carbonato de calcio o el agregado periódico de
soluciones alcalinas.
•La producción de ácido cítrico debe considerar la influencia negativa que
para el proceso tiene un exceso de hierro en su composición.
 b. Formulación
•Consiste en establecer las concentraciones de cada componente.
•Las cantidades requeridas de cada componente, se determinan en base a la
composición del microorganismo a ser empleado. (OEA, 2006)
 c. Optimización

•Pueden ocurrir situaciones en las cuales sea imperativo la optimización de los

medios de cultivo, como:
•1) No existencia de información respecto a coeficientes de rendimiento de
macro y micro elementos.
•2) Existencia de limitaciones nutricionales ocultas (microelementos y factores
de crecimiento).
•3) Ensayo de sustancias estimulantes, activadoras e inhibidoras del
crecimiento y formación del producto.
•4) Empleo de fuentes nutricionales no convencionales.

•La metodología más elemental consiste en realizar experimentos, en los

cuales se varía la concentración del componente a ensayar manteniéndose
constante las concentraciones de los demás ingredientes. (OEA, 2006)
 d. Esterilización
•Se hace para evitar el desarrollo de microorganismos competidores, y permitir el
cultivo del microorganismo deseado. (OEA, 2006)
•Además de esterilizar los medios, se debe conservar al máximo su calidad
nutriente.
•En medios definidos puede haber pérdida importante de Mg, K, amonio, Na y
fosfatos por precipitación de sales poco solubles como MgNH4PO4, MgKP04 y
MgNaPO4.
•Autoclavar las sales de Ca y Mg aparte de PO4.
•Los aminoácidos(triptofano, glutamina, asparragina) y factores de crecimiento
(tiamina, riboflavina y piridoxina) son muy lábiles al calor.
•Es aconsejable disolverlas separadamente en pequeños volúmenes de H2O y
luego esterilizarlas por filtración.
 Caso aplicativo: Cultivo de Levadura panera
•Antes se usaba la levadura de cerveza como leudante.
•Primera planta de producción. Holanda, 1780 (proceso Dutch) era anaerobio con Yx/s del
4 al 6%.
•El proceso aerobio (viena), mejoró el rendimiento, al 12-22% (1846). luego se mejoro a
rendimiento, a 50-60% del teórico.
•Los procesos actuales, con melazas de remolacha o de caña pueden alcanzar rendimientos
cercanos al 100% del teórico.
•Requerimientos nutricionales.
•Fuentes de carbono y energía: Glucosa y sacarosa.
•El N como: NH4, urea, sales de amonio, ó mezclas de aminoácidos. (Nitrato o nitrito no
pueden ser asimilados).
•Macroelementos indispensables: P(ácido fosfórico), Mg, S, y Zn se agregan como sulfatos. El
MgSO4 se suele incorporar a razón de 1 g de la sal heptahidratada y el Zn como 10 mg del
sulfato tetrahidratado por Kg de melaza.
•Requiere 200 ug de Zn, 75 ug de Fe y 12-15 ug de Cu por litro de medio para crecimiento
óptimo.
•Biotina: 100 ug/ 100 g de azúcar.
•El ácido pantoténico, y tiamina aumenta la actividad fermentativa de la levadura.
Composición de la melaza de caña y remolacha
 Medio de producción

•La materia prima elemental es la melaza de remolacha o de caña o ambas en

conjunto. (Sacarosa es el azúcar predominante en ambas)
•Los orgánicos no azúcares en la melaza de caña son: gomas solubles y
ácidos orgánicos sobre todo aconítico y compuestos nitrogenados.
•En melaza de remolacha los orgánicos no azúcares son: betaína, ácido
glutámico y algunos ácidos orgánicos como láctico, málico, acético y oxálico.
•En las cenizas predomina en ambas melazas el K.
•Mayor % de fósforo y biotina en melaza de caña que en remolacha.
•Mayor % de Ca, y compuestos nitrogenados asimilables en la remolacha.
•Los fabricantes prefieren, si tienen disponibilidad, utilizar mezclas de ambas.

•Las melazas se utilizan generalmente diluidas al 50%.

•Componentes extraños (que pueden afectar el rendimiento): algunos
pesticidas, como lindane, aldrin, heptaclor, dieldrin, etc.
•Si se utiliza solo melaza de remolacha es indispensable agregar biotina
 MEDIOS Y METODOS PARA CULTIVOS ANAEROBIOS
•La mayoría de bacterias anaerobias Sistema anaerobios de laboratorio
requieren para su crecimiento vitamina
K y hemina.

•Sistemas de incubación en
anaerobiosis.
•Los más comunes son las cámaras de
anaerobiosis.
•Eliminación del oxigeno: se puede
conseguir por:
•Se inyecta CO2 y nitrógeno a la
estufa, pues muchos anaerobios
necesitan cantidades pequeñas de
CO2 para crecer mejor.
•Reacciones de formación de H2, y
posterior reacción con el oxigeno.
Sistemas de anaerobiosis por
hidrógeno.
•El oxigeno residual se elimina
promoviendo su reacción con el
Hidrógeno, con catalizador
Paladio. La reacción da agua.
•Se coloca un sobre conteniendo
borohidrato sódico, que en
presencia de agua liberan H2 y
CO2.
•NaBH4 + 2H2O → NaBO2 + 4H2
•Se monitorea el ambiente
anaerobio con papel indicador de
azul de metileno o de resarzurina.
• El azul de metileno pierde color
en presencia de oxigeno.
•Tambien se puede mantener
anaerobiosis con bicarbonato
sódico y ácido cítrico.
 Sistemas microareofilos.
•Los microaerófilos necesitan cierta
concentración de CO2 y O2 en la
atmósfera.
•Esto se consigue, utilizando sobres
comerciales generadores de
atmósferas microaerófilas.
•Existen medios microaerobios
como, MICROAEROBAC
(Diatomita, Fierro, Ácido Cítrico y
Carbonato de Sódio), que cuando
se activa produce dentro de un
recipiente cerrado de 2,5 l una
atmósfera de 5 a 15% de O2 y de 5
a 10% de CO2.
•También se puede crear una
atmosfera similar con el encendido
de una vela.
CONSERVACION DE CULTIVOS MICROBIANOS
Método de conservación a largo plazo
- Conservación por congelación (temperaturas inferiores a 0
o
C. Se basa en la paralización del metabolismo celular por
la disminución del agua disponible, y disminución de la
actividad microbiana.
- Se usan crioprotectores: Minimizar daños durante la
congelación.
- Limitar la formación de hielo (tasa de congelación). Por
Glicerol, Dimetilsulfóxido (DMSO), Ácido glutámico, Glucosa,
Sacarosa, Meso inositol, Lactosa, Leche Descremada, etc.
- Conservación por liofilización (Es un método de
conservación a largo plazo)
Métodos Alternativos
- Conservación por transferencia periódica. En cultivos de
laboratorio, la cepa se debe transferir periódicamente, ya que
los nutrientes se consumen, y el agar se seca (repicado). El
proceso es repetido a intervalos que garanticen la obtención
de un cultivo fresco antes de la pérdida del viejo.)
- Conservación por suspensión en agua destilada
 MEDIOS DE CULTIVO PARA CÉLULAS
ANIMALES
•El suero fetal de ternera es la mayoría de las veces aplicable.
•El suero contiene diversos factores esenciales para el metabolismo y
proliferación celular, incluyendo factores de iniciación, proteínas ligadoras,
factores de unión y compuestos de peso molecular bajo.

•Hay medios sintéticos como: MEM, DMEM, GMEM, RPMI, y BME (medio basal de
Eagle). Este ultimo contiene ocho vitaminas B, los diez aminoácidos esenciales,
además de cistina, tirosina, y la glutamina, y es ampliamente utilizado en el
cultivo de células de mamíferos.

•Las células se cultivan y mantienen a una apropiada temperatura en un

incubador celular.
MEDIOS DE CULTIVO PARA CÉLULAS VEGETALES
•La biotecnología vegetal es una estrategia tecnológica, para
mejorar la producción de alimentos. (Calva y Pérez, 2005).
•La reproducción asexual de plantas por cultivo de tejidos es
posible debido a que, algunas células vegetales son capaces
de desarrollar un nuevo individuo completo, sin necesidad de
fusión de células sexuales.
•Los meristemos están compuestos por células no
diferenciadas que tienen la capacidad de dar lugar a todos los
tejidos vegetales.
•Además, las células vegetales crecidas en condiciones
asépticas sobre medios de cultivo adicionados con hormonas
vegetales, pueden dividirse dando una desdiferenciación
celular acompañada de crecimiento tumoral, que da lugar a una
masa de células indiferenciadas denominada callo, la cual bajo
las condiciones adecuadas es capaz de generar órganos o
embriones somáticos (Sagretin, 2010).
•El cultivo in vitro consiste en tomar una porción de una planta (a la que se
denomina explanto, como por ej. una hoja o segmento de ella, segmento de
tallo, meristemo, embrión, nudo, semilla, antera, etc.) y colocarla en un medio
nutritivo estéril (usualmente gelificado, semisólido) donde se regenerarán una o
muchas plantas.
•La formulación del medio cambia según se quiera obtener un tejido
desdiferenciado (callo), crecer yemas y raíces, u obtener embriones somáticos
para producir semillas artificiales.

•Las fuentes de carbono más utilizadas son: sacarosa, glucosa, fructosa,

maltosa y lactosa.
•La fuente más importante de nitrógeno, son los nitratos, a veces se
suplementa con sales amónicas.
•Algunas especies de células necesitan nitrógeno orgánico en forma de
aminoácidos.
•En la mayoría de los cultivos de células vegetales son necesarias hormonas
vegetales: auxinas, y citoquininas. (Calva y Perez, 2005).
•Figura 7. Cultivo de células y
órganos vegetales. A partir de un
explanto se pueden establecer
cultivos de células para producir
compuestos de interés, o para obtener
embriones somáticos y semillas
artificiales, entre otras aplicaciones.
•La introducción de transgenes, es
posible efectuar en las células
obtenidas de los callos. Estos genes
foráneos pueden proporcionar a la
planta características y capacidades
nuevas, por ejemplo mayor y más
rápido crecimiento, rendimiento,
productividad, mejores frutos y
semillas, resistencia a pestes y
enfermedades, tolerancia a calor, frío,
sequía y salinidad.

•Adaptado de “Biotecnología”. Muñoz,

2006
 REFERENCIAS
•Segretín María Eugenia. Los cultivos celulares y sus aplicaciones II (cultivos de células
vegetales). INGEBI-CONICET - Dpto. FBMyC, FCEyN-UBA. Buenos Aires, Argentina. 2010.
•Calva Calva Graciano y Pérez Vargas Josefina. Cultivo de células y tejidos vegetales: fuente
de alimentos para el futuro. Revista Digital Universitaria UNAM, 2005, México. Volumen 6
Número 11 ISSN: 1067-6079.
•Calva C., Rios L. (1999). Cultivo de callos y acumulación de metabolitos secundarios. En:
Rodríguez V. R., Calva C. G., Ramos R. E. G., Salazar M. A. (Eds.) Aspectos aplicados de la
biotecnología. pp 267-301.
•Montoya D, Sierra J, Silva E , Buitrago G, Ramos J. Optimización de un medio de cultivo
industrial para la fermentación acetobutilica (abe). Revista colombiana de biotecnología . 1999.
•Muñoz de Malajovich, M. A. Biotecnología. Editorial Universidad Nacional de Quilmes. 2006.
•Osorio Adriana, Gómez Natalia, Sánchez Claudia. Evaluación de diferentes fuentes de carbono
y de nitrógeno para la producción de renina a partir del moho Mucor miehei . Rev. Fac. Ing.
Univ. Antioquia N.° 45 pp. 17-26. Septiembre, 2008.
•OEA. Organización de los Estados Americanos . Microbiologia Industrial. Departamento de
Educación, Cultura, Ciencia y Tecnología. 1889 F Street N.W. Washington, D.C. 20006, USA.
2006.