CULTIVO DE

MICROORGANISMOS
DOCENTE: Dra. CARLA YANETH PARRA POMA
Integrantes:
• MIGUEL WILDER QUISPE MARAZA
• LUZ SANDRA PONCE CONDORI
• ANALI HERHUAY TITO
• CALLISAYA RICALDI YESICA YOKO
• JIMENA KIARA BECERRA CCALLATA
• RODRIGO VALENCIA VARGAS
• YESSICA CHOQUEHUANCA SANGALLI
 INTRODUCCIÓN
• El cultivo es el proceso de
proliferación de microorganismos.
• Los microorganismos en
proliferación producen replicas de si
mismos los microrganismos
requieren energía metabólica.
• Factores que deben controlarse
durante la proliferación
 NECESIDADES PARA
EL CRECIMIENTO
La mayor parte del peso seco de los
microorganismos es materia orgánica que contiene
elementos como carbono, hidrógeno, nitrógeno,
oxigeno, fósforoy azufre. Además, se necesitan
iones inorgánicos como potasio, sodio, magnesio,
calcio y cloruro para facilitar los procesos
enzimáticos y mantener los graadientes químicos a
través de la membrana celular. En su mayor parte,
la materia orgánica.
 FUENTES DE ENERGIA METABOLICA
Los tres mecanismos principales para generar energía metabólica y para
que el microorganismo se desarrolle debe utilizarse al menos uno de
ellos.

 La fermentación
 La respiración
 La fotosíntesis
 LA FERMENTACIÓN
• Fosforilación del sustrato mediante un intermediario metabólico
fosforilado.
• Debido a que la fermentación no están acompañadas por un cambio en el
estado general de oxidación – reducción del sustrato fermentable, la
composición elemental de la fermentación debe ser idéntica a la de los
sustratos.
• Ejemplo: fermentación de glucosa produce ácido láctico.
 LA RESPIRACIÓN
• Reducción química de un oxidante a través de transportadores de
electrones
• Establecimiento de la fuerza motriz protónica a través de la
membrana bacteriana.
• El reductor puede ser orgánico o inorgánico, y el oxidante a menudo
es oxígeno gaseoso.
 LA FOTOSÍNTESIS
• Reducción de un oxidante a través de transportadores de electrones
mediante energía luminosa absorbida por pigmentos en la
membrana.
• Creación de reductor y oxidante por técnicas fotoquímicas.
• Las plantas y algunas bacterias pueden hacer del agua un reductor
para el dióxido de carbono.
 CONCLUSIÓNES
• Las tres fuentes de energía metabólica son esenciales para el
desarrollo de los microorganismos
• Cada mecanismo tiene características y procesos específicos
• La comprensión de estos procesos es fundamental para el estudio y
aplicación de la microbiología.
NUTRICIÓN
Fuentes de carbono
• Los microorganismos autótrofos, seres vivos que no necesitan nutrientes
orgánicos para su desarrollo. Otros microorganismos autótrofos son los
quimiolitótrofos, que utilizan sustratos inorgánicos como hidrógeno y
tiosulfato como reductor y dióxido de carbono como fuente de carbono.

• Los microorganismos heterótrofos requieren carbono orgánico para su

desarrollo; éste debe encontrarse en una forma que puedan asimilar. Por
ejemplo, el naftaleno proporciona todo el carbón y energía necesarios para
el desarrollo de micro organismos heterótrofos respiratorios, pero muy
pocos mi croorganismos poseen la vía metabólica necesaria para la
asimilación de naftaleno.
 Fuentes de nitrógeno
• El nitrógeno es un constituyente importante de las proteínas, ácidos nucleicos y otros compuestos, y constituye casi 5% del
peso seco de una bacteria típica. El nitrógeno inorgánico molecular (N2 ), es muy prevalente pues constituye casi 80% de la
atmósfera terrestre. Es un compuesto muy estable, principalmente porque se requieren altas cantidades de energía de
activación para romper su triple enlace entre ambos átomos de nitrógeno

• El producto terminal de todas las vías para la asimilación de nitrógeno es la forma más reducida del elemento, el amoniaco
(NH3 ). Cuando se cuenta con NH3 , se difunde hacia el interior de la mayor parte de las bacterias a través de conductos
transmembrana como gas disuelto NH3 + en lugar de formar ion amonio (NH4 + ). La capacidad de asimilar N2 en forma
reducida como NH3 , proceso denominado fijación de nitrógeno, es una propiedad singular de las células procariotas y muy
pocas bacterias son capaces de desdoblar el triple enlace entre ambos átomos de nitrógeno.

• La mayor parte de los microorganismos pueden utilizar NH3 como única fuente de nitrógeno; muchos microorganismos
poseen la capacidad de producir NH3 a partir de aminas (R—NH2 ) o a partir de aminoácidos (RCHNH2 COOH). La
producción de NH3 por desaminación de aminoácidos se denomina amonificación. El amoniaco se introduce en la materia
orgánica por vías bioquímicas que incluyen al glutamato y glutamina. Muchos microorganismos poseen la capacidad de
asimilar nitrato (NO3 − ) y nitrito (NO2 − ) mediante la conversión de estos iones en NH3 . Tales procesos se conocen como
reducción de nitratos por asimilación y reducción de nitritos por asimilación, de manera respectiva. Estas vías para la
asimilación difieren de las vías utilizadas para catabolizar nitratos y nitritos. Las vías catabólicas utilizadas por
microorganismos emplean estos iones como aceptores terminales de electrones en la respiración. Algunas bacterias autótrofas,
son capaces de convertir NH3 a N2 gaseoso bajo condiciones anaerobias; este proceso se conoce como desnitrificación.
FUENTES DE NITRÓGENO EN LA NUTRICIÓN MICROBIANA
Fuentes de azufre
• El azufre es un componente de muchas sustancias orgánicas de las células.
Forma parte de la estructura de varias coenzimas y se encuentra en las
cadenas laterales de cisteinil y metionil de las proteínas. Las plantas o
animales no pueden utilizar el azufre en su forma elemental.
• La mayor parte de los microorganismos pueden utilizar sulfato como fuente
de azufre, al reducir el sulfato al nivel de ácido sulfhídrico (H2 S). Algunos
microorganismos pueden asimilar H2 S de manera directa del medio de
cultivo, pero este compuesto puede ser tóxico para muchos de ellos.
Fuentes de fósforo

• El fosfato (PO4 3-) es necesario como componente del ATP, ácidos

nucleicos y coenzimas como NAD, NADP y fl avinas. Además,
muchos metabolitos, lípidos (fosfolípidos, lípido A), componentes de
las paredes celulares (ácido teicoico), algunos polisacáridos
capsulares y algunas proteínas sufren fosforilación. El fosfato siempre
se asimila en forma de fosfato inorgánico libre (Pi ).
Fuentes de minerales

• El magnesio (Mg2+) y el ion ferroso (Fe2+) también se encuentran en derivados de porfirina: el magnesio
en las moléculas de clorofila, el hierro como parte de las coenzimas de los citocromos y peroxidasas. Mg2+ y
K+ son esenciales para la función e integridad de los ribosomas.
• El calcio es necesario como constituyente de las paredes celulares de bacterias grampositivas, aunque es
indispensable para las bacterias gramnegativas.
• Durante la elaboración de un medio para el cultivo de la mayor parte de los microorganismos, es necesario
proporcionar fuentes de potasio, magnesio, calcio y hierro, por lo general en sus formas iónicas (K+ , Mg2+,
Ca2+ y Fe2+). Son necesarios muchos otros minerales.
• La captación de hierro, que forma hidróxidos insolubles a pH neutro, es facilitada en muchas bacterias y
hongos por la producción de sideróforos, compuestos que tienen la capacidad de generar y favorecer su
transporte en forma de complejo soluble. Los sideróforos determinados por plásmidos desempeñan una
función importante en la capacidad de invasión de algunos patógenos bacterianos). Los mecanismos de
captación de hierro dependientes de sideróforos y de no sideróforos por las bacterias.
Factores de crecimiento

• Es un compuesto orgánico que debe contener la célula a fin de desarrollarse, pero que es incapaz de
sintetizar. Los microorganismos de vida libre deben ser capaces de sintetizar complejos vitamínicos que
actúan como precursores de coenzimas. Cada uno de estos compuestos esenciales se sintetiza por una
secuencia de reacciones enzimáticas; cada enzima se produce bajo el control de un gen específico.
• Cuando un microorganismo sufre una mutación genética que da origen a la falla en una de estas funciones
enzimáticas, la cadena se rompe y ya no se elabora el producto terminal. El microorganismo debe obtener
el compuesto de su entorno: el compuesto se transforma en un factor de crecimiento para el
microorganismo
• Los compuestos involucrados se encuentran y son esenciales en todos los microorganismos; las diferencias
en cuanto a necesidades reflejan las distintas capacidades de síntesis. Algunas especies no requieren
factores de crecimiento, en tanto que otras perdieron durante su evolución la capacidad de sintetizar hasta
30 a 40 compuestos esenciales y por tanto necesitan obtenerlos de su medio ambiente.
 FACTORES AMBIENTALES
QUE AFECTAN EL CRECIMIENTO
Un medio de cultivo debe contener los nutrientes para
el microorganismo que se cultivará; tales factores
incluyen pH, temperatura y aireación, que deben ser
controlados con cuidado. Se utiliza un medio de cultivo
líquido; al medio de cultivo puede añadirse agar o gel
de sílice. El agar es un polisacárido extraído de algas
marinas que es singular para el cultivo microbiano por
su resistencia a la acción microbiana y porque se
disuelve a 100 °C pero no forma placas de gel hasta que
se encuentra por debajo de 45 °C; las células pueden
suspenderse en el medio de cultivo a 45 °C; éste debe
enfriarse con rapidez hasta que adquiera la consistencia
de gel, sin lesionar a las células.
 NUTRIENTES
Describe cada tipo de nutriente, además se presenta una lista de
sustancias apropiadas. En general, debe suministrarse lo siguiente:
1)donadores y aceptores de hidrógeno: casi 2 g/L.
2) fuente de carbono: casi 1 g/L.
3) fuente de nitrógeno: casi 1 g/L; 4) minerales: azufre, fósforo, casi 50
mg/L de cada uno y oligoelementos, 0.1 a 1 mg/L de cada uno; y 5) factores
de crecimiento: aminoácidos, purinas y pirimidinas, casi 50 mg/L de cada
uno y vitaminas, 0.1 a 1 mg/L de cada uno.
Para muchos microorganismos, un compuesto simple (como un
aminoácido) puede actuar como fuente de energía, de carbono y
nitrógeno; otras requieren compuestos separados para cada uno de estos
elementos. Si los materiales naturales para medios no sintéticos tienen
deficiencias de algún nutriente particular, deben complementarse.
 Concentración de iones
hidrógeno (pH)
La mayor parte de los microorganismos (neutrolófilos)
proliferan mejor en un pH de 6 a 8, aunque algunas
formas (acidófilos) encuentran su cifra óptima con pH
de 3; otros (alcalófilos) tienen un pH óptimo de hasta
10.5. Los microorganismos regulan su pH interno pese
a la amplia gama de cifras de pH externo mediante el
bombeo de protones hacia el interior o al exterior de la
célula. Los microorganismos acidófilos mantienen su
pH interno en casi 6.5 sobre un pH externo de 1 a 5; los
microorganismos neutrolófilos mantienen un pH
interno cercano a 7.5 con intervalos externos de pH de
5.5 a 8.5; los microorganismos alcalófilos mantienen
un pH interno de casi 9.5 sobre intervalos externos de
9 a 11. El pH interno es regulado por un grupo de
sistema de transporte de protones en la membrana
citoplasma.
 TEMPERATURA
La temperatura es uno de los factores más relevantes en el crecimiento de
los microorganismos. Todos los microorganismos necesitan de una
temperatura que se designa temperatura óptima o ideal.
Si la temperatura a la que los microorganismos son expuestos baja o aumenta, el
crecimiento será más lento. Por encima de la temperatura máxima o por debajo
de la mínima el crecimiento para, pero no siempre ocurre la muerte de los
microorganismos. Las temperaturas muy elevadas (las utilizadas en la cocción
de los alimentos) permiten destruir gran parte de los microorganismos. La
temperatura del músculo inmediatamente después del sacrificio es relativamente
alta (aproximadamente 37°C), temperatura ideal para el desarrollo de las
bacterias mesófilas (entre 25 y 40°C). Una vez obtenidas los canales éstas son
refrigeradas y en los procesos posteriores de corte, almacenamiento y
comercialización se continúa con la cadena de frío. Por ello, es común encontrar
microorganismos contaminantes psicrófilos (requieren temperaturas entre 10 y
30°C. Los más comunes pertenecen a los géneros Pseudomonas, Achromobacter
y Flavobacterium y se encuentran frecuentemente  en carnes frescas sometidas a
temperaturas de refrigeración.
Aireación

Microorganismos aeróbicos.
microorganismos son
anaeróbicos facultativos.
microrganismos anaeróbicos
estrictos.
Microaerofilos.
Anaerobios aerotolentes.
O
 CONCENTRACION
IONICA Y PRECION
OSMOTICA
HALOFILOS MINAN OSMOFILOS
LA MAYORIA DE LAS BACTERIAS SON CAPACES
DE TOLERAR ALTAS VARIACIONES DE PRECION
OSMOTICA EXTERNA Y DE FUERZA IONICA
REGULADA POR EL TRANSPORTE ACTIVO DE
IONES DE K HACIA EL IMTERIOR DE LA CELULA
CONCENTRACIONES IONICAS EXTERNAS
EXTRECION COMPENSADORA DE
PUTRESCEINA, UNA POLIAMINA ORGANOCA
CON CARGA POSITIVA.
PUTRECEINA TRANPORTADORA, CON UN
PEQUEÑO CONSTO EN LA CONCENTRACION
OSMOTICA
 MEDIOS DE
CULTIVO
Es un conjunto de componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo
de los microorganismos. Macronutrientes. Micronutrientes o elementos traza.
El objetivo son estas tres:
 AMPLIFICACION DE UN CLON BACTERIANO DEFINIDO
Las bacterias has evolucionado – crecen en ambientes específicos (E.coli) utilizada en
amplificación génica de rutina y la producción de proteínas. Crecen con muy pocas
restricciones. Otros organismos – ( Legionella pneumophila) son exigentes, para estos
organismos complicados, el pH, la temperatura y la aireación son fáciles de replicar. los
nutrientes presentes constituyen el mayor problema.
Una bacteria podría necesitar un extracto de tejido hospedero.
ESTUDIO MICROBIOLOGICO DE MUESTRAS NATURALES
• puede contener muchos microambientes diferentes y cada uno proporciona un
nicho para diferentes especies. El cultivo de una muestra de material bajo cierto
grupo de condiciones permitirá que un grupo selecto de formas produzca
colonias, pero podría ocasionar que se pasen por alto muchos otros tipos.
• Por tal razón, se acostumbra cultivar las muestras utilizando diversos medios de
cultivo con diferentes condiciones de incubación.
• No es irracional utilizar seis u ocho medios de cultivo y condiciones de cultivo
diferentes si se van a identificar la mayor parte de las formas presentes.
• Cada tipo de microorganismo debe tener la posibilidad de proliferar, por ello se
utilizan medios sólidos para evitar el aglomeramiento de colonias.
. AISLAMIENTO DE UN MICROORGANISMO EN PARTICULAR
Separación de un determinado microorganismo del resto.
Una pequeña muestra de tierra, si se manipula de manera apropiada, permite el
cultivo de diferentes tipos de microorganismos en cada microentorno presente.
• Para la tierra fértil( húmedos, aireados, ricos en minerales) cientos o
miles de tipos de bacteria pueden ser aislados.
• significa que pueden aislarse cientos o incluso miles de tipos
bacterianos, lo cual se lleva a cabo al seleccionar el tipo deseado.
• 1 g de tierra se inocula en un frasco de medio de cultivo líquido que
se elaboró con el fin de favorecer el crecimiento de un tipo de
microorganismo, como bacterias aerobias fijadoras de nitrógeno
(azobacterias).
• METODO. cultivo enriquecido : Cuando el cultivo se ha desarrollado
por completo, el porcentaje de azobacterias en la población total se
habrá incrementado en gran medida.
 AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS EN CULTIVOS PROPIOS

• En ambientes naturales (polvo, dedos, ambiente, etc.), los

M. O. Se encuentran en poblaciones mixtas, si queremos
estudiarlos, identificarlos necesitamos tenerlos como
cultivos puros.
• CULTIVO PURO: Cultivo de una sola especie. Contiene una
sola clase de M. O.
• Una clase de M. O. --- Identificación de características ---
tecnicas de aislamiento
 CARACTERÍSTICAS DE LOS MEDIOS REPRESENTATIVOS UTILIZADOS
PARA CULTIVAR BACTERIAS.

MEDIOS DE CULTIVO.

• AGAR SANGRE ( Medios no selectivos)

CNA. (Medio selectivo)
colistina, acido nalidixico.
• AGAR CHOCOLATE (Medios no selectivos)
• AGAR SALES DE GLUCOSA (no selectivo ni diferencial)
• AGAR MACCONKEY (Medio selectivo)
• AGAR NUTRIENTE (no selectivo ni diferencial)
• AGAR THAYER-MARTIN (selectivo)
 A. CULTIVO EN PLACA.

B. DILUCION.