DIAGNOSTICO Y

LABORATORIO DE
LAS
INMUNODEFICIENCI
AS PRIMARIAS
DRA. MAGDA CRUZADO VILLANUEVA
MEDICO PATÓLOGO CLÍNICO
DEFINICION
grupo heterogéneo de desórdenes de origen hereditario
que afectan a uno o mas componentes del sistema inmune:
• inmunidad específica de tipo celular (linfocitos T)
• inmunidad humoral (linfocitos B)
• los mecanismos de defensa no específicos del huésped
(células fagocíticas, citocinas y proteínas del
complemento).
DISTRIBUCION DE LAS IDP

• Primeros cinco años de vida (90%)

• Predominio masculino (60-80%)
• Prevalencia 1 de cada 10,000 niños nacidos vivos
• Latinoamérica predomina IDP por deficiencia de
anticuerpos
CARACTERÍSTICAS CLÍNICAS IDP

• incrementada susceptibilidad a las infecciones así como al

desarrollo de enfermedades autoinmunes y neoplasias
• Manifestaciones clínicas variadas
• Desmedro en el crecimiento y desarrollo
• Erupciones, pigmentación de la piel, anomalías esqueléticas
y del corazón
CARACTERÍSTICAS CLÍNICAS IDP

• Linfocitos B: infecciones pulmonares recurrentes,

enterovirus, meningitis viral, giardiasis gastrointestinal
• Linfocitos T: enfermedades virales y fúngicas
• Inmunodeficiencia combinada: suceptibilidad a
patógenos virales, fúngicos y bacterianos
 CLASIFICACION
OMS IDP
1.Defecto congénito del numero y función de fagocitos y otras
células del sistema inmune inmediato
2.Déficit congénito del sistema de complemento
3.Inmunodeficiencia combinada
4.Déficit predominante de anticuerpos (células B)
5.Déficit predominante de células T
6.Síndromes de inmunodeficiencia combinados
7.Inmunodeficiencias asociadas a otras enfermedades
congénitas/hereditarias
8.Inmunodeficiencia transitoria del recién nacido
 DOCE SEÑALES DE ALARMA PARA INVESTIGAR
INMUNODEFICIENCIAS PRIMARIAS (CONGÉNITAS)
ESTUDIO PRELIMINAR PRIMERA
ETAPA
• Cuadro hemático
• Velocidad de sedimentación globular
• Frotis de sangre periférica
• Electroforesis de proteínas (hipogamaglobulinemias,
agamaglobulinemias)
• Estudios microbiológicos (agente causal)
 HIPOGAMA Y AGAMAGLOBULINEMIA

• Gammaglobulina baja • Gammaglobulina ausente

Gama Gama ?

Albúmina Alfa-1 Alfa-2 Beta Gama Prot. Totales 6.0 – 8.0 g/dL
Valor % 52.0 – 65.0 2.0 – 5.0 7.0 – 13.0 8.0 – 14.0 12.0 – 23.0
Relación A/G > 1.0
Valor g/dL 3.2 – 5.2 0.1 – 0.3 0.4 – 1.0 0.5 – 1.1 0.8 – 1.8
IDP LINFOCITOS B
 PRUEBAS DIAGNOSTICAS PARA ESTUDIO
LINFOCITOS B
PRUEBAS DE SEGUNDA ETAPA:
• Cuantificación de inmunoglobulinas
o IgG, IgM, IgA : turbidimetria
o IgE: análisis inmunoenzimatico (ELISA)
• Medición de subclases de IgG
o IgG 1-2-3-4 :nefelometría
o Alteración IgG2 respuesta defectuosa a polisacáridos de
bacterias encapsuladas (streptococcus pneumoniae,
neisseria meningitidis, haemophilus influezae tipo B)
INMUNODEFICIENCIA POR DÉFICIT DE SUBCLASES DE
IGG

Normal (mg/dL) Paciente 1 Paciente 2 Paciente 3

IgG total 400 – 1,100 720 185 835

IgG 1 230 – 620 45 114 590

IgG 2 30 – 170 645 67 118

IgG 3 11 – 98 24 3 83

IgG 4 4 – 120 6 <1 44

IgA 14 – 106 69 21 < 2.0

• IgG1: Reacciona principalmente contra antígenos de polipéptidos/proteínas.

•  principal reactividad vs virus y toxinas
• IgG2: Reacciona contra antígenos de lipopolisacáridos.
•  principal reactividad vs bacterias
• IgG3: Reacciona vs antígenos de polipéptidos/proteínas (mas que IgG1)
• IgG4: Se eleva en enf alérgicas. Bloquea la respuesta mediada por IgE.
 SÍNDROME DE HIPER IGM
• Inmunodeficiencia congénita ligada al Cr X que
afecta hombres
• IgG e IgA bajos con IgM muy alto.
• Puede asociarse a neutropenia
• Neumonias por Pneumocystis carinii y
Cryptosporidium en los primeros meses de vida.

• El ligando CD40L es una proteína de membrana que

expresan principalmente los linfocitos T CD4
activados.
• Las moléculas CD40L que el linfocito T expresa en su
superficie se unen al receptor de CD40 del linfocito
B.
• En circunstancias normales esta unión induce una
señal para que el linfocito B deje de producir IgM y
produzca inmunoglobulinas IgG o IgA.[
 PRUEBAS DIAGNOSTICAS PARA ESTUDIO
LINFOCITOS B

PRUEBAS DE SEGUNDA ETAPA

• Producción de anticuerpos específicos (ELISA)
o Anticuerpos frente a vacunación con bacterias como
streptococcus ,haemophilus
• Cuantificación de linfocitos B (citometría de flujo)
o Expresan moléculas de superficie CD19 CD20 HLA-DR
o Células B inmaduras CD10
PRUEBAS DIAGNOSTICAS PARA ESTUDIO
LINFOCITOS B
PRUEBAS DE TERCERA ETAPA (IN VITRO)
• Linfocitos B activados con antígenos : generan inmunoglobulinas
detectables policlonales cuantificadas por RIA o ELISA
• Detección de proteínas BTK, BLNK, NEMO (western Blot)
(maduración, proliferación de linfocitos B)
• Análisis de polimorfismos conformacionales del DNA de cadena
Simple
 Método mas usado para la detección de mutaciones (PCR)
IDP LINFOCITOS T
PRUEBAS DIAGNOSTICAS PARA ESTUDIO
LINFOCITOS T

PRUEBAS DE SEGUNDA ETAPA

• Prueba cutánea de hipersensibilidad tardía
Correlación in vivo de la respuesta inmune celular
Inoculación intercutánea antebrazo antígeno PPD (derivado
proteico purificado mycobacterium tuberculosis)
Inmunocompetentes (prueba positiva)
Inmunodeficiencia células T (prueba negativa)
 ATAXIA TELANGECTASIA

• Síndrome complejo de anormalidades inmunológicas, endócrinas, hepáticas y cutáneas.

• Reparación de DNA deficiente por mutación del gen ATM
 ATM o gen ataxia telangiectasia mutado, es un gen localizado en el brazo largo del
cromosoma 11 humano que codifica la enzima fosfatidil inositol quinasa implicada en
la regulación de los procesos de control de la división celular y reparación de daños en
el ADN.
• Mayor predisposición a infecciones pulmonares y senos paranasales por Deficiencia de IgA
(70 % casos) o IgE (80 % casos), disfunción de Cell T, Hipogammaglobulinemia.
• Alta incidencia de neoplasias
• Ataxia cerebelar progresiva: marcha defectuosa desde los 2-8 años de edad. A menudo
acompañada de movimientos oculares rápidos (nistagmos)
 ATAXIA TELANGECTASIA
• Ataxia cerebelar progresiva: marcha defectuosa desde los 2-8 años de edad, dificultad para
iniciar movimientos musculares voluntarios. A menudo acompañada de movimientos oculares
rápidos (nistagmos), dificultad para movimientos del habla (disartria) y deglución.
• Telangiectasias cerebelares, oculares, orejas, cuello y extremidades desde los 8 años
• Timo hipoplásico.
 SÍNDROME DE DIGEORGE
• Desarrollo embriogénico defectuoso del 3° y 4° arcos faríngeos
• Timo y paratiroides (6 – 8 semana)  AUSENCIA DE TIMO
• Arco aórtico y porciones de labios y orejas (12 semana)

• Delecciones en el Cromosoma 22q11 (CATCH-22)

• Cardiacas
• Facie anormal (dismórfica con micrognatia)
• Hipoplasia o aplasia tímica
• Paladar Hendido (Cleft)
• Hipocalcemia (ausencia de paratiroides)

• Se le asociado el consumo de alcohol y la diabetes materna

 SÍNDROME DE DIGEORGE

• Tetanía y/o falla cardíaca neonatal

• 20% recuento o función de Linfocitos T
disminuida
• Los niños que sobreviven pueden adquirir
células T funcionales.
PRUEBAS DIAGNOSTICAS PARA ESTUDIO
LINFOCITOS T

PRUEBAS DE SEGUNDA ETAPA

• Recuento de linfocitos CD4 /CD8 (citometria de flujo)

Linfocitos T dos subgrupos se distinguen por la
presencia de proteínas de superficie
Linfocitos Th : superficie molécula CD4
Linfocitos T citotóxicos: molécula CD8
 PRUEBAS DIAGNOSTICAS PARA ESTUDIO
LINFOCITOS
PREUEBAS DE SEGUNDAT
ETAPA
• Recuento de otras moléculas de superficie de linfocitos T
Moléculas de adhesión: caderina, integrina, selectina, proteoglicano
Medición del receptor para el antígeno de células T (TCR)
Moléculas del complejo mayor de histocompatibilidad (MHC)
Receptores tipo Toll (TR)
Moléculas coestimuladoras CD28

• Estudio de citotoxicidad de linfocitos CD8+ y células NK

Lisan células blanco con liberación de perforinas
Cuantificación de moléculas de superficie de NK: CD16/CD56 (citometria
de flujo)
 PRUEBAS DIAGNOSTICAS PARA ESTUDIO
LINFOCITOS T
PRUEBAS DE TERCERA ETAPA
• Linfoproliferacion en cultivo
Habilidad de linfocitos de proliferar en respuesta a mitogenos
como la fitohemaglutinina (PHA)
• Cuantificación de la producción de citocinas
Cultiva células mononucleares de sangre periférica estimuladas
con un antígeno especifico
Las citocinas producidas son medidas en el sobrenadante del
cultivo
Técnicas ELISA, citometria de flujo
 PRUEBAS DIAGNOSTICAS PARA ESTUDIO
LINFOCITOS T

PRUEBAS DE TERCERA ETAPA

• Determinación de proteínas ZAP -70 y JAK3
ZAP-70: expresada en linfocitos T y células NK, selección positiva y
negativa de los timocitos
JAK3: señalización intracelular generada por citocinas, señal necesaria
complete desarrollo de linfocitos T
proteínas ZAP -70 y JAK3 se encuentran alteradas en inmunodeficiencia
combinada severa
Western blot
IDP DEFECTO CÉLULAS
FAGOCITICAS
PRUEBAS DIAGNOSTICAS ESTUDIO DE ALTERACIONES DE CÉLULAS
FAGOCITICA

• Estudio de células de inmunidad celular inespecífica: neutrófilos,

monocitos, macrófagos
• Estudio de los defectos cualitativos :
1.Valorar la integridad de mecanismos microbicidas
o Reducción de colorante nitroazul de tetrazolio (NBT) en placa o
por citometria de flujo
o Cuantificación de radicales libres de oxigeno (ROS)
:espectrofotometría o citometria de flujo
 PRUEBAS DIAGNOSTICAS ESTUDIO DE ALTERACIONES DE
CÉLULAS FAGOCITICA

o Determinación de enzimas implicadas en la síntesis de agentes

antioxidantes
Sistema enzimático NADPH oxidasa
(gp91phox,gp22phox,p47phox,p67phox)
o Evaluación de la capacidad fagocitica y destrucción intracelular de
antígenos
2. Evaluar capacidad migratoria de células fagociticas frente a un agente
especifico
o Ensayos de quimiotaxis por filtro o gel de agarosa
3. Determinar expresión de moléculas de adhesión en la superficie
o Beta2 integrina y CD18/CD11 (citometria de flujo)
 Expresión de Moléculas de Adhesión e Integrinas en sitio de inflamación: Integrinas (ICAM) y
Selectinas en la interacción leucocito-endotelio para inducir la diapédesis.

Adhesión ICAM: Moléculas de adhesión intercelular

LFA: Linphocyte Function-Associated Antigen
IL-8: Potente quimiotáctico producido por
LFA-1 (aL:b2) Fibroblastos, cell endoteliales y macrófagos.
CD11 o Integrina b-2
Unión
Integrina b-2 (CD11)
CD18
Migración
ICAM-1
(CD54)
s-LeX
E-selectina
CD11
Diapédesis

CD31
(PECAM-1) IL-8
TNFa
Quimiotáxis
. Defectos de Movilidad Celular
• Defectos de Adhesividad Leucocitaria

• Síndrome de Shachman (leucopenia/aplasia

medular, insuficiencia pancreática, ictiosis o

piel seca-escamosa, 25 % de probabilidades
de leucemia)

Estudios de Laboratorio:
• Citometría de Flujo para investigar CD18 e
Integrinas
• Análisis genéticos
Defectos en la actividad Microbicida
 Enfermedad Granulomatosa Crónica

 Déficit de Mieloperoxidasa

 Déficit de G6PD

 Deficit de Receptor de IFN-g

 Déficit de IL12 o su receptor

1. Gránulos azurófilos (o primarios) contienen mieloperoxidasa, factores bactericidas (lisozima y

defensinas), hidrolasas y proteasas neutras (elastasa, catepsina G y otras).
2. Gránulos secundarios, más grandes, que contienen lisozima, colagenasa, gelatinasa, lactoferrina,
activador del plasminogeno, histaminasa y fosfatasa alcalina.
3. Gránulos terciarios que contienen gelatinasa y catepsinas, así como, glucoproteínas insertadas en el
plasmalema.

 Se fusionan con las vacuolas fagocíticas que contienen el material ingerido

 Las bacterias no sólo se destruyen por la acción de enzimas sino también por la formación de Especies
Reactivas del Oxígeno (ROS) y Especies Reactivas del Nitrógeno (NOS) dentro de los fagosomas de los
neutrófilos
 Prueba de NBT

o Nitro Azul de Tetrazolio, de color amarillo claro, soluble en agua, que

bajo acción enzimática se convertirá en formazán, precipitado color
azul.

o En un medio soluble que contiene el azul de tetrazolio se agregan

partículas que induzcan fagocitosis y los neutrófilos aislados del
paciente. Se incuban 1h / 37°C y se observa al microscopio, la fagocitosis
y la formación del formazán.
Aspecto de una muestra normal
reductora del NBT a Formazan
Aspecto de una muestra negativa,
no reductora del NBT a Formazan
IDP CÉLULAS DEL COMPLEMENTO
PRUEBAS DIAGNOSTICAS ESTUDIOS DE ALTERACIÓN SISTEMA DEL
COMPLEMENTO

• Mecanismos de inmunidad humoral inespecífica

• 40 glicoproteínas que trabajan en cascada existen en el
plasma en forma de precursores
• Individuos con defectos heterocigotos en los genes que
codifican la glicoproteínas: asintomáticos
• Pacientes homocigotos: sintomatología típica IDP
 PRUEBAS DIAGNOSTICAS ESTUDIOS DE
ALTERACIÓN SISTEMA DEL COMPLEMENTO
Pruebas de laboratorio:
1.Cuantificación de complemento C3 C4 : nefelometría,
inmunoprecipitacion, RIA,ELISA, turbidimetria
2.Deficiencia del inhibidor C1 estereasa
3.Marcador CD 59 :regulador fisiológico de activación del
complemento
4.Técnica complemento Hemolítico 50 (CH50) : determina actividad
hemolítica de las proteínas de la vía clásica del complemento,
proteínas que median la lisis de los glóbulos rojos recubiertos de
anticuerpos
 DÉFICIT CONGÉNITO DEL SISTEMA DEL
COMPLEMENTO
Inmunodeficiencia Cromos Clínica
Déficit de C1q 1 LES-like, infecciones piógenas
Déficit de C1r 12 LES,-like infecciones piógenas
Déficit de C4 6 LES-like, infecciones piógenas
Déficit de C2 6 LES-like, vasculitis, polimiositis
Déficit de C3 19 Infecc. piógenas de repetición
Déficit de C5 9 Infecc. Neisseria, depósito inmunocomplejos
Déficit de C6 5 Infecc. Neisseria, depósito inmunocomplejos
Déficit de C7 5 Infecc. Neisseria, depósito inmunocomplejos
Déficit de C8α 1 Infecc. Neisseria, depósito inmunocomplejos
Déficit de C8β 1 Infecc. Neisseria, depósito inmunocomplejos
Déficit de C9 5 Infecc. Neisseria, depósito inmunocomplejos

Déficit de factor B 6 Infecciones por Neisseria

Déficit de factor D 19 Infecciones por Neisseria
Déficit de properdina X Infecciones por Neisseria
Déficit de inhibidor de C1 11 Angioedema hereditario
Déficit de factor I 4 Infecc. piógenas de repetición
 CAUSAS DE INMUNODEFICIENCIAS Y SU
ASOCIACIÓN CLÍNICA
Anormalidad: Sitios afectados Casos Clínicos:

Vías aéreas superiores Agamaglobulinemia (< 200 mg/dL)

Piel Hipogamaglobulinemia (< 500 mg/dL)
Linfocito B
Tracto gastrointestinal Deficiencia de IgA
Sist. Nervioso Central Inmunodeficiencia con hiper IgM
Aplasia tímica
Linfocito T Inespecíficos Candidiasis mucocutánea
Deficiencia selectiva de NK
Pulmones Enfermedad Granulomatosa
Fagocitos Piel Deficit de moléculas de adhesión :
Ganglios linfáticos CD11, CD18, CD15
Vías Respiratorias
Déficit de C3
Complemento Piel
Déficit de componentes terminales
Sist. Nervioso Central
 PRUEBAS DE
Deficiencia a estudiar
LABORATORIO
Estudio de Laboratorio
Deficiencia de IgG, IgA, IgM, IgD, IgE
Anticuerpos Subclases de IgG
Subclases de IgA
Deficiencia de Rx de Timo
Células T Intradermorreacciones
Subclases de Linfocitos
Pruebas de Linfoproliferación
Deficiencia de células Citometría Hemática-histograma
fagocíticas profesionales Prueba de Azul de Tetrazolio
Prueba de Explosión Oxidativa por
citometría de flujo
Deficiencia de Complemento C3, C4, CH50, Inhibidor de C1q
Hemolítico
Valores a observar
IgA < 5 mg/dL o elevada
IgG baja
Desbalance de subclases de IgG
o IgA
Ausencia o aumento de IgM
Anergia cutánea múltiple en
menores de 2 años de edad
Disminución de células T
Disminución de células NK
Número absoluto de neutrófilos
Reducción del NBT
Disminución de C3, C4, CH50 y/o
del Inhibidor de C1q
GRACIAS