TÉCNICAS ELECTROFORÉTICAS

Y SU APLICACIÓN CLÍNICA

TM Paloma Campos Mg Ed. Sup.

2019
Arne Tiselius
Nace: 10 agosto de 1902
Muere: 29 de octubre de 1971
Nacionalidad: sueco
Profesión: químico
Creador de la electroforesis de
proteínas (tesis doctoral 1930)
Premio Nobel de Química en
1948
 Técnicas electroforéticas

 Las proteínas son moléculas cuya carga neta depende

del contenido de una serie de aminoácidos (ácido
glutámico, ac. Aspártico, lisina, arginina e histidina)
 La migración en un campos electroforético estará
dado por el tamaño de las proteínas y su carga neta
 Existen distintos soportes donde realizarla:
poliacrilamida, acetato de celulosa, agarosa, etc
 Métodos electroforéticos en el
laboratorio clínico de Inmunología

 Electroforesis de proteínas (suero, orina, LCR)

 Inmunofijación de Inmunoglobulinas (suero y
Utilidad de cada
orina) una?
 Electroforesis de Hemoglobina
 Estudio de bandas oligoclonales
 ELECTROFORESIS

 Migración y separación de proteínas por la acción de

un campo eléctrico
 Cátodo (-)
 Ánodo (+)
 ELECTROFORESIS

 Las proteínas se separan por :

 Carga eléctrica
 Tamaño

• A mayor carga, mayor movilidad

• A mayor tamaño, menor movilidad
CARGA NETA DE LAS PROTEÍNAS

 La carga neta de las proteínas depende del grado de

disociación de sus grupos funcionales ácidos y
básicos, lo que depende del pH.
 pH > pI  carga neta negativa
 pH = pI  carga neta nula
 pH < pI  carga neta positiva

 (pI: pH al cual la carga neta de la proteína es nula)

 ELECTROFORESIS EN GEL DE
AGAROSA pH 8,4 – 8,6

 Al aplicar un campo eléctrico las proteínas del suero

migrarán:

CÁTODO ÁNODO
 Electroforesis de proteínas

 Se colorean las bandas con una tinción especial

 Se realiza lectura en densitómetro que entrega una
gráfica
 Se definen las áreas bajo las curvas
 Se emite un informe de laboratorio
 IMPORTANTE: Validar con valores de Igs, IFIJ si es
necesario.
 Inmunofijación

 Técnica electroforética que consiste en realizar una

electroforesis
 Luego antisuero que permite identificar la clase de
Inmunoglobulina y tipo de cadenas livianas (kappa o
lambda)
 Altamente sensible.
 Se utiliza ante la sospecha de componente
monoclonal en la electroforesis.
 Se realiza en suero y/o orina
 Inmunofijación

 Se debe observar una banda homogénea,

concentrada y angosta para que se trate de un
componente monoclonal.
 No se lee en densitómetro. Su evaluación y análisis es
visual. (profesional entrenado)
 Siempre validarse con cuantificación de
Inmunoglobulinas y EFP
 UTILIDAD ????
 Control de calidad en técnicas
electroforéticas

 ELECTROFORESIS:
 PUNTOS CRÍTICOS:
 Cantidad de muestra. (exceso)
 pH de tampón de corrida (8,4): aceptabilidad +/- 0,1 unidad
de pH. Migración difusa o incompleta
 Conductividad tampón de corrida
 Tiempo real de migración: +/- 1 minuto del tiempo
recomendado
 Uso de suero control normal en cada corrida
 Control de calidad en técnicas
electroforéticas

 ELECTROFORESIS:
 RECOMENDACIONES:
 No utilizar más de dos veces soluciones de tampón de
corrida, de tinción y de lavado
 Tiempo de fijación, tinción y lavado: +/- 1 minuto del tiempo
recomendado
 Control de calidad en técnicas
electroforéticas

 INMUNOFIJACION:
 Cantidad de muestra (diluir más cuando sea necesario);
ej: Inmunoglobulinas en altas concentraciones.
 Incluir sueros control alterados (con presencia de CoMo)
cada 15 días para evaluar calidad de anti-sueros
 FUNCIONES DE LAS PROTEÍNAS
SÉRICAS

1. Antiproteasas: antiquimiotripsina, α1 antitripsina,

antitrombina.
2. Enzimas: factores de coagulación
3. Defensa inmune: inmunoglobulinas
4. Participación en la respuesta inflamatoria: proteína
C reactiva, complemento
5. Transporte: albúmina, ceruloplasmina
6. Hormonas: eritropoyetina
 CARACTERISTICAS DE LAS
PROTEINAS SERICAS

 Concentración en el suero humano: 6,6 a 7,8 g/dL

 La mayoría son sintetizadas en el hígado
 Anticuerpos son sintetizados en la médula ósea
 De acuerdo a sus funciones algunas de ellas se
incrementan o disminuyen en diferentes estados
fisiopatológicos.
DENSITOGRAMA
PRINCIPALES ALTERACIONES DEL
PROTEINOGRAMA
APLICACIONES DIAGNOSTICAS

 En estados fisiopatológicos agudos:

 Eventos: respuesta bioquímica (activación de
complemento) y celular (movilización de fagocitos,
síntesis de proteínas aumentadas)
 Hechos clínicos: fiebre, VHS aumentada, alfa-1 y alfa-2
globulinas aumentadas (proteínas de fase aguda),
leucocitosis (actividad fagocítica)
 Ejemplos: infecciones agudas, traumas de tipo mecánico
o químico que resulta en daño de tejido, falla cardiaca,
coma metabólico.

Alfa 1 y alfa 2
APLICACIONES DIAGNOSTICAS

 En estados fisiopatológicos crónicos:

 Por ejemplo: infecciones crónicas (tuberculosis,
brucelosis), enfermedades del tejido conectivo, alergias,
enfermedades malignas.

Albumina

Alfa 2
Beta globulinas

Gamma globulinas
(policlonal)
APLICACIONES DIAGNOSTICAS

 En enfermedades renales:
 Por ejemplo: síndrome Nefrótico (causado por DM o ETC
u otras)

• Hipoalbuminemia
• Alfa 1,beta y gamma globulinas disminuidas
• Aumento de alfa 2 globulinas
• Hipoproteinemia.
APLICACIONES DIAGNOSTICAS

 En inmunodeficiencias con hipogammaglobulinemia o

agammaglobulinemia

Marcada disminución zona gamma globulinas

 Ejemplos de Inmunodeficiencias
primarias LB

 Agammaglobulinemia ligada a X
 Deficiencia selectiva de IgA
 Sindrome de Hiper IgM (con deficiencia de IgG e IgA)
 Deficiencia selectiva de IgA

 Es la IDP más frecuente (1:600 individuos)

 IgA < 7 mg/dL, IgG e IgM normal
 Ausencia de IgA secretora
 Aumento de enfermedades respiratorias y digestivas
 Otras: AR, LE y PTI, enfermedades alérgicas
 Defecto en diferenciación de células B que expresa
IgA
APLICACIONES DIAGNOSTICAS

 En gammapatías monoclonales como mieloma

múltiple y macroglobulinemia de Waldestrom.

• Albúmina disminuida
• Aumento de la zona de gammaglobulinas
DISCRASIAS DE CELULAS PLASMATICAS
(gamapatías monoclonales)

 Proliferación de células plasmáticas y presencia de

componente monoclonal
 Epidemiología:
 13% de las enfermedades hematológicas
 Adultos mayores (promedio 70 años de edad)
Características clínicas Mieloma Múltiple
(MM)

 Definición: neoplasia de células plasmáticas que

clínicamente se caracteriza por:
 Anemia
 Hipercalcemia
 Enfermedad renal
 Lesiones óseas osteolíticas
 Elevada frecuencia de infecciones.
Frecuencia de gamapatía monoclonal

 Presencia de componente Monoclonal y/o proteína

de Bence Jones
 IgG: 50-60%
 IgA: 20%, IgD: 1-2%, IgE: raro
 Cadenas Kappa o Lambda: 15-25%
 Gamapatía biclonal: 0,5-2,5% (más frecuente IgG + IgA)
Estudio inmunológico de gamapatías
monoclonales (suero)

 Electroforesis de proteínas en suero peak

homogéneo y angosto
 Inmunofijación (IgG, IgA, IgM, kappa, lambda)
 Cuantificación de inmunoglobulinas (turbidimetría y
nefelometría*)
Recomendaciones mínimas para el diagnóstico
y tratamiento de Mieloma Múltiple (Sociedad
Chilena de Hematología) actualizado Julio 2014

 Pronostico variable:
 Sobrevida a 5 años: 23%
 20% de pacientes fallecieron antes de los 6 meses luego
del diagnóstico
 Diagnóstico MM

 Identificación y cuantificación del componente

monoclonal:
 Electroforesis de proteínas en suero y orina
 Cuantificación de Inmunoglobulinas IgG, IgA e IgM
 Inmunofijación de cadenas pesadas y livianas en suero y
orina
 Proteinuria de 24 horas
 Diagnóstico MM

 Evaluación de la infiltración medular

por células plasmáticas
 Aspirado y/o biopsia de médula ósea

 Evaluación de la enfermedad ósea:

 Serie ósea radiológica completa:
huesos largos, columna, pelvis,
cráneo, parrilla costal
 En caso de sospecha de compresión
medular se recomienda estudio por
RNM
 PET/CT
 Diagnóstico MM

 Evaluación general y factores pronósticos:

 Hemograma
 Examen completo de orina
 Creatininemia y clearence de creatinina
 Calcemia
 Albuminemia
 Lactato deshidrogenasa
 Beta 2 microglobulina
 Estudio citogenético (cariograma y FISH) de células neoplásicas si
se encuentra disponible
 Búsqueda de amiloidosis: biopsia medula ósea y/o amiloide en
grasa subcutánea (tinción rojo congo)
Criterios diagnósticos International
Myeloma Working Group (IMWG)

 Gamopatía Monoclonal de Significado Indeterminado

(GMSI)
 se requieren todos los criterios:
1. Paraproteína monoclonal en suero <3 gr/dL o en la orina <1
gr/24hr.
2. Plasmocitosis en médula ósea < 10%
3. Calcio, hemoglobina y creatinina normales.
4. Ausencia de lesiones óseas, ausencia de datos clínicos de
amiloidosis
Criterios diagnósticos International
Myeloma Working Group (IMWG)

 Mieloma múltiple asintomático:

 Se requieren los dos criterios:
1. Paraproteína monoclonal en el suero >3gr/dL y/o
infiltración plasmática de médula ósea ≥10%
2. Ausencia de síntomas o evidencias de disfunción
orgánica en relación con el mieloma (CRAB)
Criterios diagnósticos International
Myeloma Working Group (IMWG)

 Mieloma Múltiple Sintomático

 Se requieren los 3 criterios:
1. Plasmocitosis monoclonal en médula ósea > 10% o
plasmocitoma
2. Presencia de paraproteína monoclonal en el suero u
orina
3. Disfunción orgánica en relación con el mieloma (1 o
más criterios)…
Criterios diagnósticos International
Myeloma Working Group (IMWG)

 C= elevación del calcio > 1 mg/dL sobre el límite

normal o > 11,5 mg/dL
 R= Insuficiencia Renal: creatininemia > 1,96 mg/dL
 A= Anemia: Hemoglobina < 10 gr/dL o 2 gr/dL por
debajo la normalidad
 B= Lesiones líticas, osteoporosis severa o fracturas
patológicas
 Otros: Hiperviscosidad sintomática, amiloidosis,
infecciones a repetición
Etapificación (Sistema de etapificación
Internacional) ISS
Criterios de respuesta a tratamiento
(IMWG)

 Respuesta completa estricta (RCr): RC + cociente de

cadenas libres en suero normal + ausencia de células
plasmáticas clonales en médula ósea.

 Respuesta Completa (RC): Inmunofijación negativa en

suero y orina + desaparición de todos los
plasmocitomas + ≤5% de células plasmáticas en
medula ósea.
Criterios de respuesta a tratamiento
(IMWG)

 Respuesta parcial muy buena (VGPR): componente M

en suero u orina detectable por inmunofijación pero
no por electroforesis o disminución del componente
M ≥90% en suero y disminución a <100 mg en orina de
24 horas
 Respuesta Parcial (RP): disminución del componente
M ≥50% en suero y disminución ≥90% o a <200 mg en
orina de 24 horas.
Criterios de respuesta a tratamiento
(IMWG)

 Enfermedad estable: no cumple las definiciones

anteriores ni de enfermedad progresiva.
 Enfermedad Progresiva: requiere uno o más de los
sgtes:
• Aumento de ≥ 25% desde el valor inicial del componente
M en suero u orina. El aumento absoluto debe ser de ≥
0,5 g/dL en plasma y ≥ 200 mg en orina de 24 horas
• Indicadores directos de progresión de la enfermedad o
de daño de órganos blanco (CRAB)
 Tratamiento?

 Objetivos del tratamiento:

 Prolongar la sobrevida
 Retardar la progresión
 Mejorar la calidad de vida

«Se debe lograr la mayor erradicación del clon tumoral a

una toxicidad razonable»