Análisis Instrumental:

Turbidimetría y Nefelometría
TURBIDIMETRÍA
TURBIDIMETRÍA
 ¿Qué es?

Cuando un haz de luz golpea una

partícula en suspensión, una parte de la
luz es reflejada, otra absorbida, otra
desviada y el resto es transmitida.

La turbidimetría es una técnica analítica

que mide la reducción de la intensidad de
la luz en su paso a través de una
suspensión, a causa de las partículas
presentes en ésta, y cuantifica la luz
residual transmitida.
 ¿En qué consiste?

La turbidimetría se fundamenta en la medición de la intensidad de la radiación lumínica que se

transmite a través de un medio constituido por partículas que manifiestan cierta dispersión, las
cuales poseen un índice de refracción distinto al de la suspensión donde se encuentran.

Esta técnica se utiliza para cuantificar la turbidez que posee una solución, basándose en medir los
efectos que ejerce esta propiedad sobre los procesos de dispersión y transmisión de la radiación
lumínica. A mayor turbiedad es menor la cantidad de luz transmitida.

La manera en que la muestra suspendida en el medio interfiere con la luz está relacionada con el
tamaño, la forma, la composición de las partículas en la suspensión y la longitud de onda de la luz
incidente.

La turbidimetría posee ciertas ventajas, por ejemplo: cortos tiempos de análisis, simplicidad
experimental, costos reducidos (con relación a otros procesos), ausencia de daño a la muestra y
eliminación de la necesidad de calibrar.
 Ventajas y desventajas

• La turbidimetría posee ciertas ventajas, por ejemplo: cortos tiempos de análisis, simplicidad
experimental, costos reducidos (con relación a otros procesos), ausencia de daño a la muestra y
eliminación de la necesidad de calibrar.

• este método tiene como desventaja que, con grandes cantidades de sólidos disueltos en la
muestra, se produce una dispersión múltiple que limita la cantidad de luz que recibe el
detector.13 A elevadas concentraciones de sólidos suspendidos, se deben emplear métodos de
medición alternativos, tales como los de absorción.
 ¿Por qué es importante medir la turbidez?

La turbidez se define por la Organización Internacional de Normalización

(ISO), como la reducción de la transparencia de un líquido causada por la
presencia de partículas no disueltas de material distinto al propio líquido.

Al ser un indicador de apariencia óptica, ocasionado por la dispersión y

absorción de la energía lumínica a través del líquido, la turbidez solo puede
ser medida usando técnicas ópticas.

Se fundamenta en la relación de la intensidad de la luz incidente y de la luz

dispersada por el medio, mediante la ley de Lambert-Beer en la que la
turbidez es proporcional a la concentración de partículas.

El grado de dispersión de la luz (o turbidez de la solución) es proporcional al

número de partículas que se encuentran a su paso, lo cual depende de la
cantidad de analito presente en la muestra.
 Instrumentos para turbidimetría:
Turbidímetro:

El turbidímetro portátil TB1 permite la medición, en forma simple y

precisa, de la turbidez de muestras acuosas, indicando la misma
directamente en unidades
nefelométricas (NTU). Utiliza un LED infrarrojo como fuente lumínica.
Hacen del mismo un instrumento único y de absoluto interés para los
usuarios del sector de análisis de aguas. La medición de turbidez es
realizada según el método analítico internacional ISO 7027, cuyas
especificaciones permiten una elevada reproducibilidad de los valores
medidos.
Espectrofotómetro:

La turbidez también puede estimarse con instrumentos como el espectrofotómetro, que

mide la disminución de la luz transmitida debido al bloqueo causado por partículas.

Pudiendo determinar la concentración de la solución en base a la ley de Lambert-Beer

Colorímetro de Duboscq

Colorímetro de tipo Duboscq para determinar la

concentración de una sustancia disuelta al comparar el color
de la disolución con un patrón.

Consta de dos cilindros transparentes y móviles donde se

introducen la disolución a estudiar y la de referencia. Se hace
pasar luz, a través de ambas muestras, para luego refractarla
mediante prismas a un tubo con lentes.

Se observa, mediante filtros, la absorción del haz de luz por

cada muestra y se regula el espesor de líquido atravesado
por la luz hasta que ambas disoluciones muestren el mismo
color.

Aplicando la ley de Lambert-Beer se puede calcular la

concentración de la sustancia analizada.
 Aplicaciones:

Esta técnica de medición posee una gran cantidad de aplicaciones, entre las que destacan
la detección de contaminantes en forma de trazas en una variedad de muestras y la
estimación de las dimensiones de las partículas en diversos fluidos.

Además, la turbidimetría es empleada en el campo de la biología para cuantificar las

células presentes en determinadas soluciones, y en la observación de cultivos
microbiológicos para la fabricación de fármacos antibióticos.

En el área de la química que estudia el diagnóstico de tipo clínico, se utiliza el método de

inmunoturbidimetría en la estimación de las estructuras proteicas de tipo sérico que no
pueden ser detectadas mediante otras técnicas clínicas.

Por otro lado, la turbidimetría es empleada en el control de la calidad del agua para estimar
la cantidad de partículas suspendidas en aguas de origen natural, al igual que en el agua
de las corrientes de procesamiento.
En bioprocesos

Durante el registro y control de los procesos fermentativos,

se necesita una estimación rápida del crecimiento
bacteriano, para lo cual se han desarrollado métodos
turbidimétricos que permiten medir la absorbancia de las
bacterias en el cultivo. Para determinar el crecimiento
microbiano, se toma una muestra del caldo de fermentación
y se mide la absorbancia de la muestra con un
espectrofotómetro a una longitud de onda constante. La
medición de la densidad óptica con un espectrofotómetro
es un modo rápido y fácil para obtener la curva de
crecimiento de dicho microorganismo.
En la Medición de Turbidez para la Calidad del Agua

La turbidez del agua es uno de los parámetros más importantes

en la calidad del agua de consumo humano. Un agua turbia no
solamente tiene un impacto estético negativo para el
consumidor, la turbidez es también un indicativo de una mayor
probabilidad de contaminación microbiológica y por compuestos
tóxicos, que se adhieren a la materia dispersa en el agua. Y,
consecuentemente, indica también una mayor dificultad para la
desinfección efectiva del agua.

La ISO 7027-2016 se usa para la metodología de la medición de

turbidez en agua y establece como única fuente de luz para la
medición de la turbidez la fuente de luz Infrarroja a 860 nm.

Según la OMS (Organización Mundial para la Salud), la turbidez

del agua para consumo humano no debe superar en ningún
caso las 5 NTU, y estará idealmente por debajo de 1 NTU. Los
sistemas filtrantes, de las plantas de tratamiento del agua para
consumo humano deben asegurar que la turbidez no supere 1
NTU* (0.6NTU para filtración convencional o directa).
Determinación de sulfatos por turbidimetría:

Para esto se toma un cierto volumen de muestra y se le agrega alguna sal que cause la
formación de partículas de precipitado. En el caso de determinación de sulfatos por el
método turbidimétrico se agrega a un volumen de muestra, solución de cloruro de bario. El
bario en presencia de sulfatos precipita como sulfato de bario BaSO4, formando flóculos que
causan un cierto grado de turbidez en la solución y este grado de turbidez es proporcional a
la concentración de sulfatos presentes. El grado de turbidez se mide en un nefelómetro o
turbidímetro en unidades NTU's (Neophelometric Turbidity Units ó Unidades Neofelometricas
de Turbidez).
 Detección de endotoxinas mediante el ensayo de LAL, Método Turbidimétrico

El lisado de amebocitos de Limulus es útil para la detección de

endotoxinas ya sea en materias primas o en productos
terminados de las industrias farmaceúticas y de alimentos, entre
otras, y también es usado con fines investigativos. Este ensayo
puede ser llevado a cabo de manera cualitativa, semi-cuantitativa
o cuantitativa, según sea necesario.

El análisis cualitativo por el método de Gel-Clot es el más

sencillo y barato, pues no requiere ningún equipo para detectar la
formación del gel, que indica la presencia de endotoxinas

Otros métodos más costosos, pero a la vez más precisos son los
colorimétricos y turbidimétricos. Siendo el método cinético
turbidimétrico quizás el más utilizado, ya que requiere el uso de
equipos al igual que el colorimétrico, pero no es necesaria la
adición de ningún reactivo desarrollador de color.
 Uso del inmunoturbidimetría para la cuantificación de
IgA, IgG e IgM en suero humano

La determinación de inmunoglobulinas IgA, IgG e IgM contribuye significativamente

al diagnóstico de diversas enfermedades por inmunodeficiencias y enfermedades
infecciosas crónicas y agudas entre otras.

La prueba inmunoturbidimétrica, para la determinación cuantitativa de

inmunoglobulinas A, G y M en suero humano, se basa en la reacción entre cada
inmunoglobulina y su anticuerpo específico. Esta reacción produce un complejo
antígeno anticuerpo insoluble que genera una turbidez medible por fotometría a
365 nm. La cantidad de inmunocomplejos formados es proporcional a la
concentración de inmunoglobulina presente en la muestra
 ¿Cómo diferenciar la turbidimetría y la nefelometría?

Hay dos métodos para medir la turbidez de una muestra, la turbidimetría y la

nefelometría. Son dos técnicas complementarias que se utilizan para el análisis
cuantitativo de disoluciones coloidales, emulsiones, humos o nieblas.

Turbidimetría:
• Aplicable cuando la dispersión es suficientemente grande (concentración alta de
partículas).
Nefelometría:
 Preferible para concentraciones bajas de partículas, ya que la dispersión es menor y
la disminución de intensidad del haz incidente es pequeña.
NEFELOMETRÍA
La nefelometría es un procedimiento analítico que se basa en la dispersión de
la radiación que atraviesan las partículas de materia.
Cuando la luz atraviesa un medio transparente en el que existe una
suspensión de partículas sólidas, se dispersa en todas direcciones y como
consecuencia se observa turbia.
Cuando una partícula en suspensión es alcanzada por un haz de luz, existe una
porción de la luz que se refleja, otra porción es absorbida, otra desviada y el resto se
transmite. Es por esto que cuando la luz golpea un medio transparente en el cual
exista una suspensión de partículas sólidas, la suspensión se observa turbia.
Las mediciones nefelométricas son más
adecuadas para medir muestras cuya
concentración de partículas es baja, lo que
da a lugar a una débil dispersión de la luz.
La intensidad depende de: el número de
partículas suspendidas, su tamaño, su forma,
los índies refractivos de la partícula y del
medio dispersante, y la longitud de onda de
la radiación dispersada.
En el procedimiento generalmente sólo se consideran 3 factores:

 La concentración: Cuanto mayor sea el número de partículas,

mayor es la dispersión.

 Tamaño de la partícula: Factores como el pH, la velocidad y orden

de la mezcla, concentración de los reactivos, duración del estado de
reposo y la fuerza iónica.

 Longitud de onda: generalmente las muestras se iluminan con luz

blanca, pero si están coloreadas, se debe escoger una porción del
espectro electromagnético en la que la absorción del medio se
reduzca al mínimo.
 • Cuando la luz atraviesa un medio transparente en el que existe
una suspensión de partículas sólidas, se dispersa en todas
¿En que se basa un direcciones y como consecuencia se observa turbia.
Nefelómetro?
• La turbidez es la propiedad óptica de una muestra que hace
El nefelómetro es un que la radiación sea dispersada y absorbida más que
instrumento utilizado para medir transmitida en línea recta a través de la muestra. Es ocasionada
partículas suspendidas en una por la presencia de materia suspendida en un líquido.
muestra líquida o en un gas.

• La dispersión no supone la pérdida neta de potencia radiante,

sólo es afectada la dirección de la propagación, la intensidad de
la radiación es la misma en cualquier ángulo.
• A. Fuente de radiación: En nefelometría es de vital
importancia disponer de una fuente de radiación con una
gran potencia lumínica.
• B. Sistema Monocromador: Este sistema está ubicado
entre la fuente de la radiación y la cubeta, para que de esta
manera se evite la incidencia sobre la cubeta de radiaciones
con diferentes longitudes de onda en comparación con la
radiación deseada.
• C. Cubeta de lectura: Es un recipiente generalmente
prismático o cilíndrico, y puede tener diferentes tamaños. En
éste se encuentra la solución en estudio.
• D. Detector: El detector se encuentra situado a una distancia
específica (generalmente muy cerca de la cubeta) y es el
encargado de detectar la radiación dispersada por las
partículas de la suspensión.
• E. Sistema de lectura: Generalmente se trata de una
máquina electrónica que recibe, convierte y procesa datos,
que en este caso son las medidas obtenidas del estudio
realizado.
Fuentes de error

Toda medición está sometida a un porcentaje de error, que principalmente está

dado por:

• Cubetas contaminadas
• Interferencias
• Compuestos fluorescentes
• Conservación de los reactivos
• Fluctuaciones en la potencia eléctrica
Aplicaciones

• Generalmente, nefelometría y turbidimetría se utilizan en el análisis de la calidad

química del agua para determinar la claridad y para el control de los procesos de
tratamiento.
• Estos métodos pueden ser también apropiados para ensayos cuantitativos que
usan complejos antígeno-anticuerpo o para medir la cantidad de proteínas en
fluidos.
• Las medidas turbidimétricas y nefelométricas ocupan una posición destacada en
los laboratorios clínicos. Se han aplicado para la determinación de
inmunoglobulinas, proteínas del complemento, proteínas de fase aguda,
proteínas de coagulación entre otras.
 ¿En que se diferencia con la turbidimetría?

• La elección entre uno de ambos métodos reside en la

dispersión de luz, si es extensa, es apropiado aplicar la
turbidimetría, en cambio si es mínima es apropiada la
nefelometría. De la nefelometría se obtienen mejores
resultados, porque determina concentraciones de pocas
partes por millón (ppm), con una precisión de 1 al 5%.

• La nefelometría se basa en la medición de radiación

dispersa, en cambio la turbidimetría, en la medición de la
intensidad de un haz disminuido.

• El instrumento usado en la nefelometría, el nefelómetro se

asemeja al fluorímetro. En cambio en turbidimetría se
utiliza el turbidímetro que es un fotómetro de filtro.
 Factores para la elección entre turbidimetría y nefelometría
• Intensidad de la radiación transmitida o dispersada con la intensidad de la radiación procedente de
la fuente. La mejor elección cuando la muestra contiene pocas partículas dispersantes es la
nefelometría. La turbidimetría es buena cuando las muestras contienen grandes concentraciones de
partículas dispersantes.
• Tamaño de las partículas dispersantes. En la nefelometría la intensidad de la radiación dispersada a
90º es mayor si las partículas son bastante pequeñas para que se produzca una dispersión
Rayleigh. Si las partículas son mayores la intensidad de la dispersión disminuirá. En turbidimetría la
señal consiste en la disminución relativa de la radiación transmitida, por lo que el tamaño de las
partículas dispersantes es menos importante.