Qu es la ESPECTROFOTOMETRIA de

MASAS?

La Espectrometra de Masas es una

poderosa tcnica microanaltica usada
para
identificar
compuestos
desconocidos,
para
cuantificar
compuestos conocidos, y para elucidar
la estructura y propiedades qumicas
de molculas.

LOS INICIOS DE LA ESPECTROSCOPIA DE MASAS

El estudio de la espectrometra de
masas comenz alrededor del ao
1886 cuando Goldstein descubri
los iones positivos
Sigui tomando forma con W. Wien
que consiguio analizar los iones por
defleccin magntica en 1898.
En 1901 W. Kaufmam consigui
analizar los rayos catdicos usando
campos elctricos y magnticos
paralelos.

En 1912, J. J. Thomson ideo el primer

espectrmetro de masas ( estaba interesado
en medir la relacin masa-carga del electrn)
En 1918 y 1919, A. J. Dempster y F. W. Aston
construyeron los primeros instrumentos
capaces de actuar como un espectrmetro de
masas.

VENTAJAS:

Los lmites de deteccin que son, para

muchos elementos, tres rdenes de
magnitud ms sensibles frente a los
mtodos pticos.
Espectros notablemente ms sencillos,
generalmente nicos y con frecuencia
fcilmente interpretables.
Capacidad
para
isotpicas atmicas.

medir

relaciones

DESVENTAJAS:

El coste del instrumento es de dos a

tres veces el de los instrumentos
pticos atmicos.
La deriva del instrumento puede ser
del orden del 5 o 10%/hora.
Contiene
unas
interferencias.

determinadas

Qu informacin proporciona la
espectroscopia de masas?
La composicin elemental de las muestras: de
esta se encarga la espectrometra de masas
atmico.
La composicin de las molculas inorgnicas,
orgnicas y biolgicas.
La composicin cualitativa y cuantitativa de
mezclas complejas.
La estructura y composicin de superficies
slidas.
Las relaciones isotpicas de tomos en las

Fundamentos de Espectroscopia de masas:

La
espectrometra
de
masas
se
fundamenta en la separacin de
partculas moleculares o atmicas por su
diferencia de masa.
En
espectrometra
de
masa,
las
molculas son convertidas en iones de
tal forma que se las pueda dirigir y
manipular por aplicacin de campos
elctricos y magnticos.

El proceso de la espectrometra
de
masas
comprende
bsicamente cuatro etapas:
Ionizacin de la muestra.
Aceleracin de los iones por un campo elctrico.
Dispersin de los iones segn su masa/carga.
Deteccin de los iones y produccin de la
correspondiente seal elctrica.

Ionizacin de la muestra:
La ionizacin de la muestra se consigue
por bombardeo mediante electrones (e-)
segn el proceso:
M + e- M+ + 2e-

Aceleracin de los iones por un campo

elctrico:
Convertimos una fraccin significativa de
los tomos formados en la ionizacin de la
muestra en un flujo de iones,
generalmente positivos y de carga nica.
La velocidad que adquieren viene regida
por la formula:
v = [2eV/m]
Donde V es el potencial aplicado, e la
carga del electrn y m la masa.

Cuando las partculas aceleradas se someten

a la accin de un campo magntico (H)
describen una trayectoria circular de radio r
alrededor de este campo, desarrollando una
fuerza centrfuga mv2/r, la cual es igual a la
fuerza de atraccin del campo Hev.
De esto deducimos que el radio es igual a:
r = (2Vm/H2e)

Dispersin de los iones segn su

relacin masa/carga
Basndonos en la ecuacin anterior podemos
calcular la relacin m/e que es:
m/e = H2.r2/2V
Dado que la mayora de los iones formados
en la segunda etapa tienen una sola carga y
que el resto de parmetros se mantienen
constantes, la relacin m/e suele ser la masa
del in.

Deteccin de los iones y produccin de

la correspondiente seal elctrica
El ordenador al que est conectado el
aparato recoge las distintas seales y las
reproduce en forma de espectrograma,
formato de fcil interpretacin

Instrumentacin en espectroscopia de masas:

El espectrmetro de masas es un
instrumento que permite analizar con
gran
precisin
la
composicin
de
diferentes elementos qumicos e istopos
atmicos, separando los ncleos atmicos
en funcin de su relacin masa-carga
(m/z).

Componentes bsicos de un espectrmetro de masa

Bsicamente un espectrmetro de masas

costa esencialmente de las siguientes
partes:
Sistema de entrada de muestras.
Cmara de ionizacin.
Acelerador.
Analizadores.
Detector.

Sistema de entrada de muestras:

En el sistema de entrada de muestras,
un micromol o menos de muestra se
convierte al estado gaseoso por
calentamiento a unos 400C y se
introduce lentamente en la cmara de
ionizacin.
La finalidad del sistema de entrada es
permitir la introduccin de una muestra
representativa en la fuente de iones con
la mnima perdida de vaco.

En los espectrmetros de masas ms

modernos encontramos diferentes tipos de
sistemas de entrada:
Sistemas indirectos de entrada: es el
sistema ms clsico y el ms simple, en el
cual la muestra se volatiliza externamente y
se introduce en la regin de ionizacin que
esta a baja presin.
El sistema de entrada es normalmente de
vidrio para evitar posibles prdidas por
adsorcin.

Entrada por sonda indirecta: los

lquidos y los slidos no voltiles se
pueden introducir en la regin de
ionizacin mediante un soporte para
muestra o sonda, el cual se inserta a
travs de un cierre de vaco.
El sistema de cierre se utiliza para
controlar la cantidad de aire que entra
despus de la insercin de la sonda en la
regin de ionizacin.
Las sondas tambin se usan cuando la
cantidad de muestra es limitada ya que se
pierde mucha menos cantidad.

Sistemas de entrada cromatogrficos

y de electroforesis capilar: es un tipo
de sistema de entrada especial, se usa
cuando al espectrmetro de masa va
acoplado a un sistema de cromatografa
de gases o de lquidos de alta eficacia o a
columnas de electroforesis capilar que
permiten la separacin y determinacin
de
los
componentes
de
mezclas
complejas.

Cmara de ionizacin
Las fuentes de iones de los espectrmetros de
masas, tienen todas unas caractersticas
comunes, pese a la variabilidad de tipos
existente y es que todas transforman los
componentes de una muestra en iones.
En muchos casos el sistema de entrada y la
fuente de iones estn combinados en un nico
componente. En todos los casos, se obtiene un
haz de iones positivos o negativos (normalmente
positivos) que posteriormente se acelera hacia
el interior del analizador de masas o sistema
separador a travs del acelerador.

La formacin de iones del analito es el punto

de arranque de arranque de un anlisis por
espectrometra de masas. El aspecto de los
espectros de masas para distintas especies
moleculares, depende en gran medida del
mtodo utilizado para la formacin de los
iones.
Estos mtodos los podemos dividir en dos
categoras:
Fuentes de fase gaseosa: en estas primero se
volatiliza la muestra y luego se ioniza.

Estn
generalmente
restringidas
a
compuestos trmicamente estables que
tengan puntos de ebullicin menores de
unos 500C.
Fuentes de desorcion: en estas la muestra
en estado slido o lquido, se transforman
directamente en iones gaseosos.
Son aplicables a muestras no voltiles y
trmicamente inestables y a compuestos
que tienen pesos moleculares superiores de
100000 Daltons.

Fuentes duras: comunican suficiente energa a

las molculas para que estn en un estado de
energa altamente excitado.
La relajacin posterior, implica la rotura de las
uniones produciendo iones fragmentados. Su
espectro da lugar a muchos picos y nos da
informacin acerca de la naturaleza de los
grupos funcionales e informacin estructural
de los analitos.
Fuentes
blandas:
dan
lugar
a
poca
fragmentacin y el resultado es un espectro
con muy pocos picos dndonos informacin
til ya que nos permite la determinacin
exacta del peso molecular de la molcula o
molculas.

TIPO

NOMBRE Y ACRNIMO
Impacto de electrones (EI)

AGENTE IONIZANTE
electrones
energticos
Fase
Ionizacin qumica (CI)
iones gaseosos
Gaseosa
reactivos
Ionizacin por campo (FI)
electrodo de elevado
potencial
Desorcin por campo (FD)
electrodo de elevado
potencial
Ionizacin por electronebulizacin
campo elctrico
(ESI)
elevado
Desorcin/ionizacin asistida por
haz de lser
una matriz (MALDI)
Desorcin
Desorcin por plasma (PD)
fragmentos de fisin
del 252Cf
Bombardeo con tomos rpidos
haz de tomos
(FAB)
energticos
Espectrometra de masas de iones
haz de iones
secundarios (SIMS)
energticos
Ionizacin por termonebulizacin elevada temperatura
(TS)tipos de camaras de ionizacin, indicando
Fig. 1: Clasificacin de los distintos
sus nombres y acrnimos y especificando cada sus agentes ionizantes.

Sistema acelerador:
En el sistema acelerador las partculas
ionizadas producidas por el impacto de los
electrones son obligados a atravesar una
primera ranura aceleradora por una pequea
diferencia de potencial.
Entre esta primera y una segunda ranura
existe una diferencia de potencial muy
elevada que imprime a las partculas su
velocidad final. Una tercera ranura acta
como colimador del haz de partculas.

Analizadores de masa:
Para la separacin de iones con diferente
relacin m/e se dispone de varios
dispositivos. Lo ideal es que el analizador
fuera capaz de distinguir entre diferencias
muy pequeas de masa y que permitiera
el paso del nmero suficiente para producir
corrientes inicas fciles de medir.
Existen diferentes tipos de analizadores de
masas:
Analizadores de sector magntico
Analizadores de trampa de iones
Analizadores de masas de tiempo de
vuelo

Analizadores de sector magntico:

Los analizadores de sector magntico utilizan un
imn permanente o un electroimn para hacer
que el haz procedente de la fuente de iones se
desplace con una trayectoria circular de 180, 90
o 60.
Estos analizadores tambin son llamados de
enfoque simple.
Se basan en el efecto que sobre una partcula
cargada tienen un campo elctrico y un campo
magntico.

Fig.3:Diagrama esquemtico de un analizador de masas de sector

magntico equivalente a los utilizados en espectrometra de masas,
recalcar la ubicacin del sector magntico (laminated magnet).

Analizadores de trampa de iones: es un

dispositivo los iones generados en la fuente son
atrapados, durante un cierto tiempo, en un
campo de radiofrecuencia dentro de un anillo
toroidal
situado
entre
dos
electrodos
hiperblicos.
Mediante la aplicacin simultanea de corrientes
DC y RF se consigue atrapar y mantener
dentro del anillo central los iones procedentes
de la fuente de iones.
Una vez all, dichos iones pueden ser extrados
a
voluntad
aplicando
corrientes
de
radiofrecuencia variables hasta valores de
resonancia y expulsados a travs del anillo de
salida.

Analizadores de masas de tiempo de

vuelo (TOF):
En estos aparatos se producen los iones
positivos peridicamente por bombardeo de la
muestra con impulsos de electrones, de iones
secundarios o de fotones generados por lser.
Los iones producidos de esta forma son
acelerados en un tubo analizador libre de
campo mediante un campo elctrico pulsante
de 103 a 104 V.

La separacin de los iones en funcin de

la masa se produce durante su recorrido
hacia el detector, situado al final del
tubo.
Estos aparatos presentan ventajas
como la robustez, simplicidad, fcil
acceso a las fuentes de iones y el
virtualmente
ilimitado
intervalo
de
masas, pero tienen no obstante una
sensibilidad y una resolucin limitadas.

Analizador de Transformada de Fourier

(FT):
Los iones son dirigidos al interior de una caja
donde giran describiendo una orbita de
dimetro reducido y mnima frecuencia. Por
aplicacin de una seal de radiofrecuencia (RF)
los iones son excitados, describen rbitas
espirales de amplitud creciente.
Llega un momento en que la orbita descrita es
tal que alcanza el dimetro igual a la distancia
de separacin de dos electrodos detectores,
momento en el cual son detectados originando
una imagen de corriente, que es funcin directa
de su relacin masa/carga.

Esta imagen de corriente es integrada mediante

una transformada de Fourier y convertida en una
seal proporcional a su intensidad. El espectro
completo se obtiene mediante un barrido del
campo de radiofrecuencia aplicado que varia
entre
8
KHz
y
100
MHz.

Detectores:
Los iones procedentes del sistema acelerador
llegan al detector el cual generalmente esta
constituido por un ctodo emisor que al recibir el
impacto producido por las partculas cargadas
emite electrones.
Estos electrones son acelerados hacia un dnodo
el cual emite varios electrones ms al recibir el
impacto de cada electrn..

Este proceso se repite varias veces hasta

obtenerse una cascada de electrones que llega
al
colector
logrndose
una
corriente
fuertemente
amplificada,
por
un
procedimiento muy similar al que se utiliza en
los tubos fotomultiplicadores.
La corriente obtenida puede amplificarse de
nuevo por procedimientos electrnicos y se
lleva a un sistema registrador.
Las caractersticas necesarias para el detector
son :
Tiempo corto de respuesta
Aptitud para registrar picos de distinta
intensidad

TIPOS DE ESPECTROMETROS:
Espectrmetros de doble enfoque: este
trmino se usa en los espectrmetros en los
cuales las aberraciones direccionales y las
aberraciones de energa de una poblacin de
iones se minimizan simultneamente. El doble
enfoque se consigue utilizando combinaciones
de campos magnticos y electrostticos
cuidadosamente seleccionados.
Espectrmetro de masa cuadrupolar:
emplea
tiempos
de
barrido
pequeos
(<100ms), lo cual es particularmente til para
realizar barridos de picos cromatogrficos en
tiempo real. Son, con diferencia los ms
utilizados hoy en da.

Fig.4: Diagrama de un espectrmetro de masa cuadrupolar,

que es uno de los tipos de analizadores de masa ms utilizados
en espectrometria de masas dado su bajo precio y robustez.

Espectrmetros
de
Transformada
de
Fourier (FT):
La parte fundamental de un instrumento de
transformada de Fourier es una trampa de
iones en la cual los iones circulan en rbitas
bien definidas durante largos periodos.
Tales cavidades se construyen aprovechando el
fenmeno de resonancia inica ciclotrnica.
La resolucin es espectrometra de masas de
transformada de Fourier est limitada por la
precisin en la medida de la frecuencia ms
que por las rendijas o las medidas de campo.
Los espectrmetros de masas de transformada
de Fourier proporcionan mejores relaciones
seal/ruido, velocidades mayores y sensibilidad
y resolucin ms elevadas.

OBTENCION Y ANALISIS DE UN
ESPECTROGRAMA DE MASAS
La espectrometra de masas no es una
espectroscopia de absorcin como IR, RMN y UV.
Es el registro grfico que sufre una molcula al
ser bombardeada con un haz de electrones.
Este flujo de electrones hace que las molculas
se ionicen y se fragmenten. La mezcla de iones
es acelerada y pasa a travs de un campo
magntico, donde las trayectorias de los iones
ms ligeros se desvan ms que las trayectorias
de los iones ms pesados.

Variando
el
campo
magntico,
el
espectrmetro permite registrar la abundancia
de iones de cada masa, en un grafico
conocido como espectro de masas:

El impacto ocasionada sobre la muestra en

estado gaseoso, por el bombardeo de un haz
de electrones de alta energa hace que la
muestra M pierda un electrn, generando as un
ion radical M+. (porque ahora tiene un electrn
desapareado).
M+. Tiene un gran exceso de energa y a su
vez puede fragmentarse generando un nuevo
ion radical o simplemente un ion.

Estos iones hijos a su vez

fragmentarse generando otros iones

pueden

Al detector llegarn todos los iones, tanto el M+

Como los fragmentos de ste.

El detector registra todos los iones segn su

relacin masa/carga y los cuantifica segn su
abundancia relativa.

Generando un espectro como el siguiente:

Fig.6: Aspecto clsico de un espectrograma de masas, en el que se

sealan su pico base y su in molecular ms importante.

En el espectro, al pico ms alto se le

denomina pico base y se le asigna una
abundancia del 100%, ya que es el ion mas
abundante del espectro .
La abundancia de los dems picos se da
como porcentaje con relacin al pico base.
El in molecular o Pico padre (ion
progenitor) (M+) generalmente no es el ms
abundante (porque se fragmenta) y permite
obtener el peso molecular de la primera
molcula, es decir, de la sustancia.

Interpretacin de un espectro de masas:

Se puede determinar la formula

molecular de un compuesto dado.
Los datos que proporciona el aparato son:
Peso molecular exacto
El patrn de fragmentacin es nico
para cada compuesto (se llega a una sola
formula)

Ejemplo:
Espectro de masas del alcohol benclico

El pico correspondiente al in molecular es

intenso (m/z=108).
La prdida del grupo -OH explica el pico de
m/z=91(muy comn en los alquilbencenos).
La prdida del grupo -CH2OH (31 unidades)
explica el pico de m/z=77 (catin fenilo).
Los pequeos picos a 109 y 110 estn
provocados por la presencia de 13C en la
muestra.

NOTA:
Si el pico base da un valor de 91
m/e el ion es el tropilio,
caracterstico de aromticos y un
metileno.
En los alcoholes se pierde agua y
la masa se lee como de alcanos y
luego se le suma el peso
molecular del agua que es 18.

Espectros de masas de distintos compuestos:

Aplicaciones de la Espectroscopia de Masas

Elucidacin de la estructura de molculas
orgnicas y biolgicas.
Determinacin del peso molecular
pptidos, protenas y oligonucleicos.

de

Identificacin
de
los
compuestos
cromatogramas en capa fina y papel.

de

Determinacin de secuencias de aminocidos

en muestras de polipptidos y protenas.

Deteccin e identificacin de especies separadas

por cromatrografa y electroforesis capilar.
Identificacin de drogas de abuso y sus
metabolitos en sangre, orina y saliva.
Control de gases en enfermos respiratorios durante
los procesos quirrgicos.
Pruebas para confirmar la presencia de drogas en
sangre de caballos de carreras y en atletas
olmpicos.
Datacin de ejemplares en arqueologa.
Anlisis de partculas en aerosoles.

Determinacin de residuos de pesticidas en

alimentos.
Control de compuestos orgnicos voltiles en
el agua de suministro
Aplicaciones cualitativas
Determinacin del peso molecular de todas
las sustancias que pueden volatilizarse por la
posicin del pico correspondiente a la masa
patrn.

Identificacin
de
compuestos
fragmentacin patrn:

por

su

La fragmentacin de la mayor parte de las

molculas produce un gran nmero de picos que
permiten
la
identificacin
de
numerosos
compuestos y el reconocimiento de ciertos grupos
funcionales de ellos. Se han descrito una serie de
reglas generales que rigen los procesos de
fragmentacin, los cuales son de gran utilidad para
la determinacin de los espectros.

Identificacin
de
productos
de
reaccin o de productos metablicos:
Se usa en cintica qumica y en
farmacologa pudindose llegar a identificar
impurezas y metablicos a concentraciones
de pocas partes por milln.
Caracterizacin y anlisis de polmeros:
El polmero se piroliza en condiciones
controladas y los productos voltiles se hacen
pasar a un espectrmetro para su anlisis.

Anlisis de sangre:
Se puede determinar a gran velocidad las
concentraciones hemticas de monxido y
dixido de carbono, oxgeno, nitrgeno, gases
anestsicos (como el NO).
Estudiar la abundancia de istopos:
Esta fue la finalidad con la que fue creada la
tcnica y en la actualidad se usa para anlisis
por dilucin de istopos, estudios con trazadores
isotrpicos, estudiar la edad de las muestra por
su proporcin de istopos con la ventaja frente a
los radiactivos que se pueden medir los istopos
no radiactivos.

Aplicaciones cuantitativas
Determinacin cuantitativa de especies
moleculares
o
tipos
de
especies
moleculares en muestras orgnicas,
biolgicas y ocasionalmente inorgnicas:
Normalmente tales analisis se llevan a cabo
haciendo pasar la muestra a travs de una
columna cromatogrfica o de electroforesis
capilar
y
posteriormente
por
el
espectrmetro.

Determinacin de la concentracin de
elementos en muestras inorgnicas y, en
menor medida, de muestras orgnicas y
biolgicas:
Las concentraciones de analito en este caso se
obtienen directamente a partir de las alturas de
los picos de los espectros de masas. Se crean
curvas de calibrado que nos permiten el analisis
cuantitativo gracias a la existencia de picos
nicos para cada componente y cada valor de
m/z.

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http://images.google.com.mx/imgres?
imgurl=http://blog.alquimia.com/Portals/14/P
AT%2520pruebas%2520Alicia
%2520(2).gif&imgrefurl=http://blog.alquimia.
com/pat/Home/tabid/253/EntryID/77/language/e
swww.quiminet.com.mx/pr1/Espectrometr%EDa
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