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1865 – 1940 Era Pasteur: Solventes orgánicos (etanol, butanol, acetona, glicerol);
. ác. orgánicos (cítrico, acético, láctico); tratamiento aerobio de aguas
. residuales.
1960 – 1975 Era post antibióticos: Aminoácidos; proteína unicelular (SCP); enzimas
. (detergentes); tecnología de células y enzimas inmovilizadas; tratamiento
. anaerobio de aguas residuales (biogás); polisacáridos bacterianos (goma
. xantana); gasohol.
S + E P + E (Proceso Catalítico)
(Sustrato) (Enzima) (Producto) (Enzima)
S E P
(Sustrato) (Enzima) (Producto)
Proceso Fermentativo:
S + Xo X + P (Proceso Auto-
(Sustratos o (Biomasa o (Biomasa) (Productos o catalítico)
Nutrientes) Inóculo) Metabolitos)
Nutrientes:
Comúnmente: Vi = 0.05-0.1 V
• Tipo de fermentador
• Modo de operación
• Tipo de células
• Medio de cultivo
• Condiciones de operación más adecuadas (T, pH, agitación, etc.)
• Control de variables más importantes
• Estequiometría
• Cinética
• Termodinámica
• Fenómenos de Transporte
• Dinámica y Control
• Economía
ESTEQUIOMETRÍA DE PROCESOS
FERMENTATIVOS
Objetivo
Aplicaciones
c. Restricciones técnico-económicas
Disponibilidad y costos de las materias primas
Facilidad de recuperación de productos
Control de contaminación
Enfoque Macroscópico
Donde:
CaHbOc: fórmula genérica para carbohidratos o hidrocarburos.
CαHβOδNγ: “fórmula empírica” de la biomasa.
NlOmHn: fórmula genérica para la fuente de nitrógeno.
CjHvOz: fórmula genérica para el producto extracelular.
*10-3
Solución:
Notas
Por definición, los factores de rendimiento son siempre positivos.
YF/G ≡ YFG
Rendimiento Teórico y Rendimiento Observado
• Rendimiento Observado: Dado por la relación ∆F/∆G, donde los ∆’s son los
cambios medidos u observados en las cantidades de F y G en un intervalo
dado de tiempo.
S → X
Por tanto:
Donde:
Casos
Solución
aw γS – 4b = γX + fjγP
Donde:
Balance de electrones: w γS – 4a = c γX + f j γP
Donde:
4a/w γS: Fracción de los electrones disponibles del sustrato que salen con el
. oxígeno.
cγx /w γS: Fracción de los electrones disponibles del sustrato que salen con la
. biomasa.
fjγP/w γS: Fracción de los electrones disponibles del sustrato que salen con el
. metabolito extracelular.
c γx /w γS = 1
Por tanto:
c = cmax = w γS / γx
Donde:
cmax : Máximo rendimiento teórico o termodinámico posible de biomasa.
Además:
YXS = cMX/MS
Donde:
YXS: Rendimiento de biomasa a partir del sustrato.
MX, MS: Masas moleculares de la biomasa y del sustrato respectivamente.
dx α xdt
dx = μ xdt
dx/dt = μ x
μ = (1/x) dx/dt
Donde:
X t
dx / x dt
Xo 0
Por tanto: ln (x/xo) = µt
ln 2xo/xo = µtd
De donde:
td = ln 2/µ = 0.693/µ
Fase de aceleración
Fase estacionaria
dx/dt = -kex
Donde:
x: concentración celular (mol/l, g/l).
dx/dt: rata de respiración endógena (mol cél./l-h).
ke: constante específica de rata. Representa las moles de biomasa degrada-
. das por mol de biomasa presente y por unidad de tiempo (h-1).
Crecimiento balanceado
Cuando las condiciones ambientales son favorables para las células, la com-
posición de la biomasa permanece constante y las ratas específicas de forma-
ción de cada componente celular son iguales entre sí e iguales a la rata espe-
cífica de crecimiento, µ.
Gráficamente
Variaciones de tamaño y composición celular durante el crecimiento batch
En procesos aerobios, el oxígeno puede llegar a ser el sustrato limitante del crecimiento
celular. En otros casos, la fuente de N puede ser el sustrato limitante.
A menos que se diga lo contrario, asumimos que el sustrato limitante es la fuente de car-
bono y energía.
max S
Ks S
Donde:
S: concentración del sustrato limitante (g l-1).
Ks: constante de saturación (g l-1).
El valor de Ks está relacionado con la afinidad de las células por el sustrato. Así, a ma-
yor valor de Ks, menor afinidad de las células por el sustrato y viceversa.
Normalmente, los valores de Ks para carbohidratos son del orden de mg/l y para amino-
ácidos, del orden de µg/l.
Notas
La ecuación de Monod no considera los mecanismos internos del crecimiento celular
(metabolismo celular), por lo cual se dice que es un modelo no estructurado del
crecimiento celular.
Ecuación de Lineweaver-Burk: 1 1 Ks 1
max max S
Ecuación de Langmuir: S Ks 1 1
max max S
Ecuación de Eadie-Hofstee:
max Ks
S
Gráficamente
Efecto de la temperatura sobre la rata de crecimiento
Tipo I
El producto resulta de la oxidación directa del sustrato fuente de energía. Ej.: fermen-
. tación de glucosa a etanol.
Donde:
s, x, p: concentraciones de sustrato, biomasa y producto, respectivamente
. (mol/l, g/l).
rs, rx, rp: ratas volumétricas de reacción (mol/l-h, g/l-h).
k1, k2, k3: números positivos cercanos a 1.
Tipo II
. to.
dp/dt = kx
rp = dp/dt = qpx
Donde:
rp : rata volumétrica de formación del producto (g l-1 s-1).
Es decir:
qp = (1/x) rp = (1/x) dp/dt
rp = YPX rx + mpx
Donde:
YPX: rendimiento teórico del producto con respecto a la biomasa.
(g producto/g células)
mp: rata específica de formación del producto debido al mantenimiento celular.
. (tiempo-1)
En general:
rs = -ds/dt = qsx (Ec. 1)
Donde:
rs: rata volumétrica de consumo de sustrato (mol l-1 s-1).
qs: rata específica de consumo de sustrato, g sustrato/g cél. x tiempo.
(tiempo -1).
Nota
dx
Como: rx x (Ec. 3)
dt
Entonces: rs m x (Ec. 4)
YXS
Igualando la (Ec.1) con la (Ec. 4) obtenemos:
qs ms (Ec. 5)
YXS
Por tanto:
dS max S
rs ms x (Ec. 7)
dt YXS K S S
max S
qs ms (Ec. 8)
YXS K S S
Nota
Para S = 0 → rs = 0 y la energía de mantenimiento es obtenida por…
. metabolismo endógeno.
2. Para consumo de sustrato con formación de producto extracelular
rx rp
rs ms x (Ec. 9)
YXS YPS
Recordando que: rx x
y que: rp q p x
obtenemos:
qp
rs ms x (Ec. 10)
YXS YXS
De (1) y (10): qp
qs ms (Ec. 11)
YXS YPS
Efecto del mantenimiento sobre los rendimientos
Rendimientos observados
rx dx
Y '
rs ds
XS
rp dp
Y '
PX
rx dx
rpdp
Y '
rs ds
PS
Donde:
rx, rs, rp: ratas volumétricas obtenidas experimentales de gráficos de
x, s y p vs. t
Relación entre rendimientos observados (Y’FG) y rendimientos
verdaderos (YFG)
Sabemos que: '
YXS
ms
YXS
Invirtiendo la ecuación anterior obtenemos:
1 1 ms
'
YXS YXS
1 1
Si Yxs y ms son aproximadamente constantes, un gráfico de vs.
'
Y XS
1
dará una línea recta de pendiente ms e intercepto
Y XS
mp
Análogamente: Y '
YPX
PX
YPX m p
YPS
ms
Y XS
TÉCNICAS DEL CULTIVO CELULAR
Forma más ampliamente utilizada a escala industrial para llevar a cabo los
. bioprocesos.
Tanto el medio de fermentación como el inóculo se introducen en el sistema
. al comienzo de la operación.
Bioprocesos con entrada y/o salida de corrientes gaseosas, pero no de co-
. rrientes líquidas, se consideran como discontinuos.
Facilidad de alcanzar y mantener condiciones asépticas durante la opera-
. ción en periodos cortos.
Reducción de la productividad global del proceso por los tiempos de limpie-
. za, carga y descarga del biorreactor antes y después de cada corrida.
Equipos de mayor volumen y mayor intensidad en el uso de mano de obra.
Falta de homogeneidad del producto entre corridas.
Concentración inicial de sustrato alta, pero baja concentración inicial de bio-
. masa.
Máxima concentración de sustrato inicial limitada por problemas de inhibi-
. ción por el sustrato.
Al final se tiene altas concentraciones de biomasa y producto, pero mínima
. concentración de sustrato.
Medio uniforme espacialmente (sistema homogéneo), pero de composición
. variable en el tiempo (estado no estacionario).
CULTIVO CONTINUO vs. CULTIVO DISCONTINUO
Ventajas
• Se puede mantener el crecimiento limitado por un sustrato y estudiar los cambios en la composi-
ción y actividad metabólica celular modificando el sustrato limitante del crecimiento.
• Los resultados obtenidos en el cultivo continuo con frecuencia son más confiables y reproducibles
• Requiere menos mano de obra y menor capital inicial (equipos más pequeños).
Desventajas
Es un tipo de proceso semicontinuo, donde se adicionan uno o varios nutrientes mientras los pro-
ductos permanecen en el fermentador hasta el final de la fermentación.
Ventajas
• Es una poderosa herramienta para determinación de parámetros cinéticos y energéticos, así co-
mo de tasas específicas de crecimiento celular.
• Es altamente ventajoso cuando existe inhibición por sustrato (metanol, etanol, ácido acético,
etc.).
• Permite reducir la viscosidad del caldo o medio de cultivo durante la producción de biopolímeros
(goma xantana, gelana, dextrana, pululana, etc.).