QU ES VALIDACIN ?

La validacin de un mtodo
analtico es el proceso por el cual se
establece, mediante estudios de
laboratorio, que las caractersticas de
desempeo del mtodo cumplen con
los requisitos para las aplicaciones
analticas previstas.
.

USP 31NF 26, Captulo General <1225> Validacin de mtodos farmacopicos

 CUL ES EL OBJETIVO DE LA
VALIDACIN?
El objetivo de la validacin de un
procedimiento analtico es
demostrar que es apto para el
propsito indicado.
ICH Guideline Q2A Text on
Validation of Analytical Procedures

Algunos parmetros a demostrar en validacin son:

Exactitud
Precisin
Linealidad
 EXACTITUD
Es el grado de concordancia entre el valor verdadero y el experimental. Un
instrumento es exacto si las medidas realizadas con l son todas muy prximas todas
al valor "verdadero" de la magnitud medida. Cabe recalcar que es la proximidad
entre el valor medido y el valor real, adems indica una comparacin con un valor
aceptado. Por ejemplo, si la masa de una sustancia es 22.5 g y una medida de dicha
masa es 22.4 g se puede considerar exacta; sin embargo, un valor de 20.05 es poco
exacto.
El lanzador tiene buena exactitud ya que
sus lanzamientos son cercanos al valor
real.

x x0
E * 100%
x0
 PRECISIN

Es una propiedad que se aplica a un conjunto de medidas de una misma

magnitud en condiciones sensiblemente iguales, stas condiciones pueden ser:
de repetibilidad, de precisin intermedia o de reproducibilidad. Un instrumento
mide con precisin cuando la diferencia entre distintas medidas de una misma
magnitud es muy pequea. Los conceptos entre exactitud y precisin son
independientes entre s, pues algunas medidas puede ser muy precisas pero no
exactas.
El lanzador tiene buena precisin ya que todos los
dardos estn cercanos entre s, aunque lejanos al
punto central.
S
CV * 100%
X
 DIFERENCIA ENTRE EXACTITUD Y
PRECISIN
Existe una gran diferencia, aunque en nuestro lenguaje vulgar ambos trminos son
sinnimos, sin embargo, metro lgicamente, los trminos no deben intercambiarse
ya que la diferencia es significativa.
Precisin se refiere a un conjunto de medidas que se repiten o se acercan unas a
otras sin ser cercanas al valor real, mientras que exactitud se refiere a la cercana
de dichas medidas al valor real.
 EJEMPLO
Cuatro laboratorios farmacuticos,
que llamaremos A, B, C y D,
realizan 5 determinaciones, cada
uno de ellos, de una muestra de
sangre cuya lectura real
suponemos conocida e igual a
10.00 ml. Las determinaciones
obtenidas por los cuatro
laboratorios (en ml.) se recogen en
una tabla, donde adems se
recogen algunos clculos
realizados con ellos.
En validacin, para la precisin del
sistema, en mtodos fsico-qumicos
CV 1.5% en mtodos biolgicos,
CV 3%
DIAGRAMA DE
PUNTOS

Precisin: CVA 0.157%, CVB 1.716%, CVC 2.126%, CVD 0.331%

Exactitud: EA 1%, EB 0.1%, EC 1%, ED 0.1%
A que laboratorio le llevara usted las muestras para sus anlisis?
 ERRORES DE MEDICIN.
ERROR. Un error experimental es considerado un desvo del valor calculado de una
magnitud fsica con relacin al valor real de dicha magnitud.
Cuando se realiza cualquier medicin pueden cometerse errores. Por este motivo es
necesario evaluar los datos y justificar las conclusiones. La evaluacin se debe realizar
mediante herramientas de control estadstico, confiables.
Los errores pueden ser:
SISTEMTICOS, cuando se producen de igual modo en todas las mediciones que
se realizan de una magnitud. Puede estar originado por un defecto del instrumento, en
una particularidad del operador o del proceso de medicin, etc.
OPERATIVOS, cuando son causados por la inexperiencia del analista.
INSTRUMENTALES, si son provocados por fallas o averas en los aparatos y
equipos de medicin.
 ERRORES DE MEDICIN.

Los errores determinados son aquellos que pueden atribuirse a causas

definidas, como fallas en los materiales o equipos, impurezas en las sustancias y
reactivos, propiedades fsicas o qumicas no consideradas en las muestras, o
cambios fsicos inducidos a stas ltimas, como sobrecalentamiento.

Los errores indeterminados son provocados por variaciones aleatorias o

fortuitas y factores ambientales no controlables, impredecibles o imperceptibles
por el analista por lo que parecen fluctuaciones al azar.
ERROR ABSOLUTO Y ERROR RELATIVO
A partir de la diferencia entre el valor obtenido en la medicin y el valor de
referencia, se definen dos tipos de errores: error absoluto y error relativo.
Error absoluto (Ea): es el valor absoluto de la diferencia entre el valor que se
toma como referencia y el valor medido.

Ea valor medido valor referencia x x0

Error relativo (Er): Se define como el cociente entre el error absoluto y el valor
que se toma como referencia de la medida multiplicada por el 100%, es decir, se
expresa en forma de porcentajes
valor medido valor referencia x x0 Ea
Er * 100% * 100% * 100%
valor referencia x0 x0
As podemos medir la exactitud.
 EJERCICIO
Se ha tratado de medir varias veces la masa de una bola y se han obtenido los siguientes
resultados
Balanza digital: 24.6 g, 25.3 g, 22.9 g, 23.8 g
Balanza de laboratorio:25.0 g, 25.5 g, 25.0 g, 25.3 g
Si se sabe que la masa exacta de la bola es 24.0 g, haga un diagrama de puntos y determine
a) Error absoluto, error relativo
b) Coeficiente de variacin
c) Desviacin media
d) Cul balanza es ms exacta?
e) Cul balanza es ms precisa?
RECHAZO DE DATOS DE UNA SERIE

Cuando se escoge el nivel de

significacin 0,05 ( 5%), tenemos un
95% de confianza de que hemos
adoptado la decisin correcta y una
probabilidad 0,05 de ser falsa.
 CMO DETERMINA SI UN VALOR ES REALMENTE UN
VALOR ATPICO Y CMO DECIDE SI DEBE CONTINUAR O
NO CON EL ANLISIS DE DATOS?

Uno de los problemas en el anlisis de datos es manejar los valores

atpicos dentro de un grupo de datos.
Un valor ATPICO es una observacin con un valor que no parece
corresponderse con el resto de los valores en el grupo de datos.

Por lo general surgen dos preguntas:

1) Es este valor realmente un valor atpico?

2) Puedo eliminar este valor y continuar con el anlisis de
datos?
 DATOS ATIPICOS

Con respecto a la pregunta 2, debe saberse que las pruebas

estadsticas se utilizan para identificar valores atpicos, no
para retirarlos del grupo de datos.
Tcnicamente, una observacin no debe retirarse a menos
que una investigacin halle una causa probable para
justificar esta accin.
 DATOS ATIPICOS
Si en la investigacin no se encuentra una causa
probable, qu debe hacerse?

Un enfoque sera realizar un anlisis de datos con el

valor atpico y sin l. Si las conclusiones son
diferentes, entonces se considera que el valor atpico
tiene influencia y esto debera indicarse en el informe.

Otra opcin es utilizar estimadores rigurosos para caracterizar los grupos de datos, tal como
la mediana de la muestra en lugar de la media.
 RECHAZO DE DATOS
Dos de las pruebas estadsticas utilizadas con mayor frecuencia en un grupo de
datos son la prueba de Dixon (Q-Test) y la prueba de Grubbs.
Estas tcnicas estn diseadas para detectar un nico valor atpico en un grupo de
datos, y por lo tanto no son adecuadas para la deteccin de mltiples valores
atpicos.
La prueba de Dixon utiliza relaciones de las diferencias entre datos que parecen
atpicos comparados con los valores del grupo de datos. Esta prueba es la que
utilizaremos, y se determina al ordenar los datos de menor a mayor de la
siguiente manera.
valor dudoso valor vecino Qprueba Qtabla descartar
Qprueba
R
R : rango de datos
TABLA DE LA PRUEBA Q
 DIXON (PRUEBA Q)
Datos obtenidos: 5.3, 3.1, 4.9, 3.9, 7.8, 4.7 y 4.3
Ejemplo
Datos ordenados: 3.1, 3.9, 4.3, 4.7, 4.9, 5.3, 7.8
El tamao de la muestra es 7, y la relacin utilizada es el espacio entre el
valor atpico (7.8) y su vecino ms prximo (5.3) dividido por el espacio entre
los valores ms grandes y ms pequeos en el grupo. Por lo tanto, el ndice
de Dixon es:
Qprueba Qtabla descartar
7.8 5.3
Qprueba 0.532
7.8 3.1
Se observa en la tabla, que a un 90% de
confianza Qprueba Qtabla
Por lo tanto, 7.8 es un dato atpico.
Ejemplo
Al efectuar una serie de rplicas para determinar la concentracin del in sulfato
en una muestra de agua para riego se obtuvieron los siguientes resultados.
Determinar si la medida 6.0 es un valor rechazable.
Medida Valor 6.0 5.6
1 5.0 Qprueba 0.4
6.0 5.0
2 5.2
3 5.5
4 5.6
5 6.0

Debido a que no se cumple Qprueba Qtabla 6.0, no se considera atpico.

 REGRESIN Y CORRELACIN
LINEALIDAD

La linealidad de un mtodo analtico es su capacidad para obtener resultados de

prueba que sean proporcionales ya sea directamente, o por medio de una
transformacin matemtica bien definida, a la concentracin de analito en
muestras en un intervalo dado.

USP 38 y NF 33
LINEALIDAD
LINEALIDAD. Validacin de un mtodo analtico para la cuantificacin de
vitamina a en alimentos, por cromatografa lquida de alta resolucin y su
determinacin en guayaba fresa
LINEALIDAD
 LINEALIDAD

VALIDACIN DE UN MTODO ANALTICO ESPECTROFOTOMTRICO PARA LA

CUANTIFICACIN DE METABOLITOS ESTABLES DE XIDO NTRICO EN
FLUIDOS BIOLGICOS.

https://analychem02.wordpress.com/2014/10/02/validacion-de-un-metodo-
analitico-espectrofotometrico-para-la-cuantificacion-de-metabolitos-estables-de-
oxido-nitrico-en-fluidos-biologicos/
LINEALIDAD
LINEALIDAD
 CRITERIOS PARA DETERMINAR
LINEALIDAD.
Dependen del mtodo analtico y la Norma que se est utilizando.
1. r mayor o igual a 0.99 (el coeficiente de correlacin es una medida del
grado de asociacin entre las mediciones y la concentracin del analito)
2. r2 mayor o igual a 0.98 (el coeficiente de determinacin mide la exactitud
con la que se ajusta la curva de regresin a los valores experimentales de y)
3. b aproximadamente igual a 0 (intercepto de la lnea)
4. m igual a la sensibilidad del sistema (pendiente de la lnea)
5. Existen otros criterios que se basan en intervalos de confianza que
veremos ms adelante.
 Determinacin de paracetamol en diez tabletas de distintos lotes
EJEMPLO mediante un mtodo espectrofotomtrico y otro de espectroscopia IR

METODO METODO
A B
84.63 84.65
84.68 84.71
86.08 86.2
86.41 86.4
88.82 88.85
88.55 88.56
90.92 90.95
93.69 93.8
94.06 94.15
94.53 94.54 Cumple los criterios relacionados a r2 y m pero hacen falta criterios
en base a intervalos de confianza para m y b
 FIN DE UNIDAD I

Examen parcial sobre la UNIDAD I

Jueves 07/ Septiembre de 9-11 am