Metodo para conseguir que el DNA penetre en la clulas. El DNA se mezcla
con particulas metalicas, generalmente de oro o tungsteno, que se disparan sobre una celula a muy elevada velocidad. ( biotecnologa y sociedad, Encuentros y desencuentros, Emilio Muoz) Biobalistica
Alternativa Plasmido Ti para
transferir DNA a plantas
Bao de particulas de oro o
tungsteno (aprox 0,4-1,2 m dimetro) con DNA que ha sido precipitado con: CaCl2, espermidina o polietilen glicol.
Velocidades (300-600 m/s)
equipo llamado pistola de particulas (de genes) Pistola de partculas
Versin original
Pequea cantidad de plvora para
acelerar las micro partculas.
Actualmente se usa helio alta presin
Proyectiles penetran la pared celular
y membrana ( densidad no resulta daina)
Alcance de penetracin, variando
intensidad de estallido, distancia de partculas, utilizar partculas de dif tamao). Una vez dentro, el DNA se separa de las partculas y en algunos casos es integrado dentro del genoma de las plantas.
Es utilizado para transferir ADN exgeno a
suspensiones de plantas, cultivos de callos, tejidos meristematicos, embriones inmaduros y polen, (obtenidos amplio rango de plantas incluyen monocotiledneas y confieras, menos susceptibles por Agrobacterium)
Transferir DNA cloroplastos y mitocondrias.
De forma convencional, los plsmidos de DNA disueltos en tampn son precipitados sobre la superficie de los microporoyectiles.
procedimiento aumenta la frecuencia de clulas
. Se estima que aproximadamente 10,000 clulas son transformadas con
cada bombardeo.
las clulas transformada, detectadas por la expresin de un gen marcador, a
veces solo expresan el DNA transferido de forma transitoria. La configuracin de vectores influye integracin como expresin de genes.
Eficaz DNA linear en vez de circular.
Plsmidos de mas de 10 Kb pueden
ser fragmentados (menor tasa de transformacin)
Aun as si es de mayor tamao se
utilizan cromosomas artificiales de lev (YACs) diseados marcadores de seleccin de planta y lev Como un sistema de verificacin, distintas cantidades de DNA de Cochliobolus heterostrophus son clonados en el vector de modo que YAC ser de 80 a 550 Kb
Posteriormente el vector con DNA de hongo ser transferido a cel vegetal.
Aquellas resistentes al antibitico kinamicina sern aisladas
Se confirmar la presencia en estas clulas del segundo gen marcador, el
resistencia al antibitico higromicina, localizado en el otro brazo del vector YAC. Por que se utiliza esta tcnica? Hiptesis Tcnica de mayor importancia
Naturaleza fsica es independiente de clulas blanco
Utilizada para introducir ADN exgeno a clulas vegetales, bacterias, algas,
hongos, cel. animal limitaciones.
Algunos tejidos oponen una resistencia, debido a paredes celulares
lignificadas o superficies vellosas.
los principales limitantes:
baja relacin total de clulas sometidas al bombardeo y el nmero de clulas
que logran incorporar de manera permanente la informacin gentica transferida.