Histoquímica de Las Proteínas

HISTOQUMICA DE LAS
PROTENAS
TIPOS DE ENLACES QUMICOS
FUERZA VIBRACIONAL O ENLACE VIBRATORIO (FLEMMING ET AL,
1989. UNIVERSITY OF BRITISH COLUMBIA)
EXPERIMENTO EN UN ACELERADOR NUCLEAR

REACCIN ENTRE BROMO Y MUONIO UN ISTOPO DE HIDRGENO SE DESACELER
CUANDO AUMENTARON LA TEMPERATURA
MEZCLA ENTRE BROMO Y MUONIO FORMA UNA ESTRUCTURA INTERMEDIA UNIDA POR UN
ENLACE VIBRATORIO
PLANTEADO POSIBILIDAD TERICA A PRINCIPIOS DE ESA DCADA
MUONIO (TOMO LIGERO) SE MOVERA RPIDAMENTE ENTRE DOS PESADOS TOMOS DE

BROMO COMO UNA PELOTA DE PING-PONG REBOTANDO ENTRE DOS BOLAS DE BOLICHE
TOMO OSCILANTE SOSTENDRA BREVEMENTE LOS DOS TOMOS DE BROMO JUNTOS EN UN

ENLACE Y REDUCIRA LA ENERGA GLOBAL, Y POR LO TANTO LA VELOCIDAD DE LA
REACCIN.
FUERZA VIBRACIONAL O ENLACE VIBRATORIO (FLEMMING ET AL,
1989. UNIVERSITY OF BRITISH COLUMBIA VANCOUVER)
MEJORAMIENTO EN EXPERIMENTOS DE SEGUIMIENTO DE CAMBIOS SUTILES EN LOS NIVELES

DE ENERGA DENTRO DE LAS REACCIONES
MUONIO Y BROMO EFECTIVAMENTE FORMARON UN NUEVO TIPO DE ENLACE TEMPORAL.

CLCULOS DE AMBOS EXPERIMENTOS Y TRABAJO COLABORATIVO DE QUMICOS TERICOS DE LA
UNIVERSIDAD LIBRE DE BERLN Y LA UNIVERSIDAD DE SAITAMA, EN JAPN
NATURALEZA VIBRATORIA BAJ LA ENERGA TOTAL DE LA ESTRUCTURA INTERMEDIA DE

BROMO-MUONIO
DISMINUY LA VELOCIDAD DE LA REACCIN A PESAR DE QUE LA TEMPERATURA SE ELEVABA
AUNQUE FUGACES, LOS ENLACES VIBRACIONALES SE CONSIDERAN ACTUALMENTE ENTRE

LOS ENLACES QUMICOS CONOCIDOS
ESTE FENMENO SE PRODUCIRA TAMBIN EN OTRAS REACCIONES ENTRE TOMOS PESADOS Y LIGEROS
MTODOS DE
IDENTIFICACIN DE
PROTENAS
CARACTERIZACIN DE PROTENAS
BSICAS
MTODO FAST GREEN FCF ALCALINO
MTODO ESCARLATA BIEBRICH
SOLUCIN A:
FAST GREEN FCF (C.I. 42053) 0.1 g
AGUA DESTILADA 100
mL
AJUSTAR pH A 8.1 CON ALGUNAS
GOTAS DE NaOH 0.1N
SOLUCIN B NaOH 0.1 N:

NaOH (P.M. 40 g/mol) 0.4 g
AGUA DESTILADA 100 mL
SOLUCIN C:
CIDO TRICLOROACTICO 5 mL
AGUA DESTILADA 95
mL
FIJACIN: FORMOL NEUTRO 6 HRS
FAST GREEN FCF ALCALINO

(Alfert & Geschwind, 1953)
PROTOCOLO
DESPARAFINAR E HIDRATAR HASTA AGUA DESTILADA
TRATAR EN SOLUCIN ACUOSA DE CIDO TRICLOROACTICO 5% HIRVIENDO
DURANTE 15 MINUTOS
LAVAR EN 3 BAOS DE ALCOHOL 70%, 10 MINUTOS C/U
LAVAR EN AGUA DESTILADA
COLOCAR EN SOLUCIN DE FAST GREEN FCF DURANTE 30 MINUTOS
LAVAR EN AGUA DESTILADA DURANTE 5 MINUTOS
DESHIDRATAR EN ALCOHOLES DE 95% Y ABSOLUTO
ACLARAR EN XILOL
MONTAR EN RESINA SINTTICA
RESULTADOS
PROTENAS BSICAS DEL NCLEO: VERDE
SOLUCIN TAMPN GLICINA
Glicina
NaOH Agua Destilada
pH 1N
(mL) (mL)
(mL)
8 0.5 20 19.5
9.5 7 20 13
10.5 17 20 3
SOLUCIN BIEBRICH SCARLET

0.72 mM EN BUFFER GLICINA
FIJACIN: CARNOY 24 hrs O

CUALQUIER OTRO FIJADOR
ALCOHLICO SIN FORMALDEHDO
BIEBRICHS SCARLET (SPICER

& LILLIE, 1961 ; SPICER, 1962)
TEIR 30 A 90 MINUTOS EN SOLUCIN RECIN PREPARADA DE BIEBRICHS SCARLET (C.I. 26905)

AL 0.72 mM EN TAMPN GLICINA A pH 8.0; pH 9.5 Y pH 10.5
SIN LAVAR, TRATAR DIRECTAMENTE EN ALCOHOLES DE 95%, ABSOLUTO, ALCOHOL-XILOL

ACLARAR EN XILOL
RESULTADOS
PROTENAS BSICAS DEL NCLEO: COLOR ESCARLATA INTENSO A pH 9.5
MENOR INTENSIDAD DE TINCIN A pH < 9.5
MENOR INTENSIDAD DE TINCIN A pH > 9.5

ACIDOFILIA TOTAL (DETERMINACIN
GRUPOS ELECTROPOSITIVOS DE LAS
PROTENAS)
MTODO DE AMARILLO NAFTOL S
SOLUCIN CIDO ACTICO 1%
CIDO ACTICO GLACIAL 1 mL
SOLUCIN AMARILLO NAFTOL-S

AMARILLO NAFTOL-
0.1 g
S
CIDO ACTICO
1 mL
GLACIAL
pH SOLUCIN 2.8
FIJACIN: FORMOL NEUTRO 6 HRS O ETANOL-

ACTICO GLACIAL 3:1
AMARILLO NAFTOL S
(DIETCH, 1955)
TEIR 30 MINUTOS CON AMARILLO NAFTOL-S
TRATAR LOS CORTES POR 5 MINUTOS EN SOLUCIN DE CIDO ACTICO GLACIAL
1%
DESHIDRATAR EN 3 CAMBIOS DE ALCOHOL BUTLICO TERCIARIO (TERBUTANOL)
ACLARAR EN XILOL
RESULTADOS:
PROTENAS CON GRUPOS ELECTROPOSITIVOS: AMARILLO
MEDICIN COLOR MEDIANTE HISTOFOTOMETRA
ABSORCIN MXIMA 435 nm
DETERMINACIN DE PUNTO
ISOELCTRICO APARENTE DE LAS
PROTENAS
TINCIN A pH REGULADO CON AZUL DE METILENO Y
FAST GREEN

AMARILLO NAFTOL-
0.1 g
S
CIDO ACTICO
1 mL
GLACIAL
pH SOLUCIN 2.8

ACTICO GLACIAL 3:1
AMARILLO NAFTOL S
(DIETCH, 1955)
1%
ACLARAR EN XILOL
RESULTADOS:
IDENTIFICACIN DEL GRUPO AMINO
MTODO DE INIHIDRINA-SCHIFF

AMARILLO NAFTOL-
0.1 g
S
CIDO ACTICO
1 mL
GLACIAL
pH SOLUCIN 2.8

ACTICO GLACIAL 3:1
AMARILLO NAFTOL S
(DIETCH, 1955)
1%
ACLARAR EN XILOL
RESULTADOS:
IDENTIFICACIN DEL GRUPO FENOL
(TIROSINA)
REACCIN DE MILLN
MTODO DE DIAZOTACIN-COPULACIN PARA TIROSINA

AMARILLO NAFTOL-
0.1 g
S
CIDO ACTICO
1 mL
GLACIAL
pH SOLUCIN 2.8

ACTICO GLACIAL 3:1
AMARILLO NAFTOL S
(DIETCH, 1955)
1%
ACLARAR EN XILOL
RESULTADOS:

AMARILLO NAFTOL-
0.1 g
S
CIDO ACTICO
1 mL
GLACIAL
pH SOLUCIN 2.8

ACTICO GLACIAL 3:1
AMARILLO NAFTOL S
(DIETCH, 1955)
1%
ACLARAR EN XILOL
RESULTADOS:
IDENTIFICACIN DEL GRUPO INDOL
(TRIPTOFANO)
MTODO DMAB NITRITO
REACCIN DE ROSINDOL

AMARILLO NAFTOL-
0.1 g
S
CIDO ACTICO
1 mL
GLACIAL
pH SOLUCIN 2.8

ACTICO GLACIAL 3:1
AMARILLO NAFTOL S
(DIETCH, 1955)
1%
ACLARAR EN XILOL
RESULTADOS:

AMARILLO NAFTOL-
0.1 g
S
CIDO ACTICO
1 mL
GLACIAL
pH SOLUCIN 2.8

ACTICO GLACIAL 3:1
AMARILLO NAFTOL S
(DIETCH, 1955)
1%
ACLARAR EN XILOL
RESULTADOS:
IDENTIFICACIN DEL GRUPO SH
MTODO DDD
MTODO DE AMARILLO MERCURIAL
MTODO DE SAL DE TETRAZOLIO
BLOQUEO DE GRUPOS SH CON N-ETIL-MALEIMIDA
IDENTIFICACIN DE GRUPO SH Y S-S (CISTENA Y
CISTINA)

AMARILLO NAFTOL-
0.1 g
S
CIDO ACTICO
1 mL
GLACIAL
pH SOLUCIN 2.8

ACTICO GLACIAL 3:1
AMARILLO NAFTOL S
(DIETCH, 1955)
1%
ACLARAR EN XILOL
RESULTADOS:

AMARILLO NAFTOL-
0.1 g
S
CIDO ACTICO
1 mL
GLACIAL
pH SOLUCIN 2.8

ACTICO GLACIAL 3:1
AMARILLO NAFTOL S
(DIETCH, 1955)
1%
ACLARAR EN XILOL
RESULTADOS:

AMARILLO NAFTOL-
0.1 g
S
CIDO ACTICO
1 mL
GLACIAL
pH SOLUCIN 2.8

ACTICO GLACIAL 3:1
AMARILLO NAFTOL S
(DIETCH, 1955)
1%
ACLARAR EN XILOL
RESULTADOS:

AMARILLO NAFTOL-
0.1 g
S
CIDO ACTICO
1 mL
GLACIAL
pH SOLUCIN 2.8

ACTICO GLACIAL 3:1
AMARILLO NAFTOL S
(DIETCH, 1955)
1%
ACLARAR EN XILOL
RESULTADOS:

AMARILLO NAFTOL-
0.1 g
S
CIDO ACTICO
1 mL
GLACIAL
pH SOLUCIN 2.8

ACTICO GLACIAL 3:1
AMARILLO NAFTOL S
(DIETCH, 1955)
1%
ACLARAR EN XILOL
RESULTADOS:
IDENTIFICACIN Y CUANTIFICACIN
DE PROTENAS
AZUL DE COOMASIE
ESTUDIOS DEMOSTRATIVOS DE LA PRESENCIA DE PROTENAS EN
INCLUSIONES INTRACELULARES O MATERIAL EXTRACELULAR
EXISTEN TINCIONES PARA PROTENAS QUE NO DEPENDEN DE AMINOCIDOS

INDIVIDUALES PRESENTES EN STAS
TINCIN CON COLORANTES ANINICOS (MOLCULAS PEQUEAS) MEDIANTE

CARGAS ELECTROSTTICAS A CADENAS LATERALES DE LISINA Y ARGININA
COLORANTES ANINICOS DE CADENA GRANDE (ESPECIALMENTE LOS UTILIZADOS EN
LA INDUSTRIA TEXTIL DEL ALGODN) SE UNEN POR FUERZAS NO INICAS
UTILIDAD COLORANTES ANINICOS: IDENTIFICACIN DE PROTENAS SLO SI
LA INTENSIDAD DEL COLOR PRODUCIDO EN ALGN SITIO DEL TEJIDO ES
PROPORCIONAL A CONCENTRACIN LOCAL DE PROTENAS DEL SITIO.
AZUL DE COOMASIE
AZUL DE COOMASIE
AZUL DE COOMASIE R250 (AZUL BRILLANTE R,
INDOCIANINA BRILLANTE 6B): COLORANTE
TRIFENILMETNICO, DE UNIN ESTEQUIMTRICA A
PROTENAS BAJO CONDICIONES HISTOQUMICAS
UTILIDAD: UNIN A PROTENAS EN GELES DE ACRILAMIDA

(ELECTROFORESIS, WESTERN BLOT)
COLORANTE CASI INSOLUBLE EN AGUA FRA

TINCIN DE CORTES EN MEZCLA DE ETANOL Y CIDO ACTICO,
ENJUAGADO EN MEZCLA ETANOL-ACTICA PARA REMOVER
COLORANTE NO UNIDO
FRMULA ESTRUCTURAL PRESENTA ZWITTERION GRANDE NO

PLANAR CON COMPONENTES HIDROFLICOS E HIDROFBICOS
PODRA UNIRSE A CUALQUIER TIPO DE MOLCULA
TINCIN DE CORTES INCLUIDOS EN RESINAS PLSTICAS SE EVITA

MEDIANTE TRATAMIENTO CON ENZIMAS PROTEOLTICAS (CAWOOD ET
AL, 1978)
TCNICA DE AZUL DE COOMASIE
R250 PROCEDIMIENTO
SOLUCIN A
ETANOL-ACTICO
ETANOL ABSOLUTO 300 mL
PUEDE MANTENERSE POR MESES, SE UTILIZA PARA

DISOLVER Y REMOVER COLORANTE NO UNIDO DE
CORTES TEIDOS
SOLUCIN B
AZUL DE COOMASIE R250 (C.I.42660) 40 mg
ETANOL-ACTICO (SOLUCIN A) 200 mL
EL COLORANTE SE DISUELVE COMPLETAMENTE

NO ES NECESARIO FILTRAR
LA SOLUCIN ES ESTABLE POR AL MENOS 5 AOS
PROCEDIMIENTO
DESPARAFINAR Y REHIDRATAR CORTES EN PARAFINA HASTA ALCOHOL ABSOLUTO
TEIR EN SOLUCIN COLORANT (B) POR 30 MINUTOS
SECAR LAS PLACAS Y SUMERGIR EN SOLUCIN ETANOL-ACTICO (A) POR 5 MINUTOS

AGITANDO OCASIONALMENTE
ENJUAGAR EN ETANOL 95%, DESHIDRATAR EN ETANOL ABSOLUTO, ACLARAR EN XILOL

Y MONTAR CON MEDIO RESINOSO
RESULTADOS:
PROTENAS: AZUL REAL BRILLANTE
INTENSIDAD DE COLOR PROPORCIONAL A CONCENTRACIN LOCAL DE PROTENA

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HISTOQUMICA DE LAS

EXPERIMENTO EN UN ACELERADOR NUCLEAR

MUONIO (TOMO LIGERO) SE MOVERA RPIDAMENTE ENTRE DOS PESADOS TOMOS DE

TOMO OSCILANTE SOSTENDRA BREVEMENTE LOS DOS TOMOS DE BROMO JUNTOS EN UN

MEJORAMIENTO EN EXPERIMENTOS DE SEGUIMIENTO DE CAMBIOS SUTILES EN LOS NIVELES

MUONIO Y BROMO EFECTIVAMENTE FORMARON UN NUEVO TIPO DE ENLACE TEMPORAL.

NATURALEZA VIBRATORIA BAJ LA ENERGA TOTAL DE LA ESTRUCTURA INTERMEDIA DE

AUNQUE FUGACES, LOS ENLACES VIBRACIONALES SE CONSIDERAN ACTUALMENTE ENTRE

SOLUCIN B NaOH 0.1 N:

FIJACIN: FORMOL NEUTRO 6 HRS

FAST GREEN FCF ALCALINO

SOLUCIN BIEBRICH SCARLET

FIJACIN: CARNOY 24 hrs O

BIEBRICHS SCARLET (SPICER

TEIR 30 A 90 MINUTOS EN SOLUCIN RECIN PREPARADA DE BIEBRICHS SCARLET (C.I. 26905)

SIN LAVAR, TRATAR DIRECTAMENTE EN ALCOHOLES DE 95%, ABSOLUTO, ALCOHOL-XILOL

MENOR INTENSIDAD DE TINCIN A pH < 9.5

MENOR INTENSIDAD DE TINCIN A pH > 9.5

SOLUCIN AMARILLO NAFTOL-S

FIJACIN: FORMOL NEUTRO 6 HRS O ETANOL-

SOLUCIN AMARILLO NAFTOL-S

FIJACIN: FORMOL NEUTRO 6 HRS O ETANOL-

SOLUCIN AMARILLO NAFTOL-S

FIJACIN: FORMOL NEUTRO 6 HRS O ETANOL-

SOLUCIN AMARILLO NAFTOL-S

FIJACIN: FORMOL NEUTRO 6 HRS O ETANOL-

SOLUCIN AMARILLO NAFTOL-S

FIJACIN: FORMOL NEUTRO 6 HRS O ETANOL-

SOLUCIN AMARILLO NAFTOL-S

FIJACIN: FORMOL NEUTRO 6 HRS O ETANOL-

SOLUCIN AMARILLO NAFTOL-S

FIJACIN: FORMOL NEUTRO 6 HRS O ETANOL-

SOLUCIN AMARILLO NAFTOL-S

FIJACIN: FORMOL NEUTRO 6 HRS O ETANOL-

SOLUCIN AMARILLO NAFTOL-S

FIJACIN: FORMOL NEUTRO 6 HRS O ETANOL-

SOLUCIN AMARILLO NAFTOL-S

FIJACIN: FORMOL NEUTRO 6 HRS O ETANOL-

SOLUCIN AMARILLO NAFTOL-S

FIJACIN: FORMOL NEUTRO 6 HRS O ETANOL-

SOLUCIN AMARILLO NAFTOL-S

FIJACIN: FORMOL NEUTRO 6 HRS O ETANOL-

EXISTEN TINCIONES PARA PROTENAS QUE NO DEPENDEN DE AMINOCIDOS

TINCIN CON COLORANTES ANINICOS (MOLCULAS PEQUEAS) MEDIANTE

UTILIDAD: UNIN A PROTENAS EN GELES DE ACRILAMIDA

COLORANTE CASI INSOLUBLE EN AGUA FRA

FRMULA ESTRUCTURAL PRESENTA ZWITTERION GRANDE NO

TINCIN DE CORTES INCLUIDOS EN RESINAS PLSTICAS SE EVITA

PUEDE MANTENERSE POR MESES, SE UTILIZA PARA

EL COLORANTE SE DISUELVE COMPLETAMENTE

TEIR EN SOLUCIN COLORANT (B) POR 30 MINUTOS

SECAR LAS PLACAS Y SUMERGIR EN SOLUCIN ETANOL-ACTICO (A) POR 5 MINUTOS

ENJUAGAR EN ETANOL 95%, DESHIDRATAR EN ETANOL ABSOLUTO, ACLARAR EN XILOL

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