DESPROTEINIZADOS

Principios. Principales
Aplicaciones

24/04/17 T. Hayde Ziga Cceres 1

 Desproteinizacin
Es la remocin o eliminacin de protenas
del plasma, suero sangre con el fin de
obtener un filtrado o sobrenadante libre de
protenas y poder cuantificar la sustancia
materia de anlisis sin interferencias.
Evita: la formacin de espuma, turbidez,
precipita-dos y que las protenas
interfieran reaccionando con los reactivos.

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 Condiciones de un buen
desproteinizante :
1. No agregar ninguna sust. que pueda interferir
con las determs. posteriores.
2. No pptar ni retener por adsorcin la
sustancia a determinar, lo que se verifica por
mtodos de recuperacin (agregar al lq. a
desprot. una cant. conocida de la sust. a
valorar, la que debe recuperarse en cantidad
aproximadamente igual a la terica desp. de
desprot.)
3. Eliminar otras susts que puedan estar ptes. en
el fluido a desproteinizar y que interfieran con
las tcnicas que se aplicarn posteriormente.
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Mtodos de desproteinizacin:
A) M. Fsicos: No alteran las protenas q separan
1. Dilisis
2. Ultracentrifugacin
3. Ultrafiltracin
4. Adsorcin por susts particuladas.

B) M. Fsico Qumicos: Protenas se separan x

pptacin, q generalm. altera su estado fsico
inicial, y no puede ser retomado:
1. Desnaturalizacin x el calor
2. Deshidratacin
a) Deshid. con solventes miscibles con el
agua
24/04/17
b) Deshid. con soluciones salinas
T. Hayde Ziga Cceres 4
C) M. Qumicos: Formacin de sales
insolubles:

1. Con cidos: TCA, tngstico,

perclrico, metafosfrico, molbdico,
fosfotngstico. Se forman
sales proteicas insol. con las formas
catinicas de las molculas proteicas.

2. Con metales pesados: Zn, Hg, Cd,

Fe, Pb. Se forman proteinatos insols.
con las formas aninicas de las molculas
proteicas.
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Desproteinizacin es necesaria p. la
determ. de diversos metabolitos y
conviene realizarla rpidam. despus de la
recoleccin de las muestras.
Puede realizarse utilizando diferentes
agentes que provocan la pptacin de las
protenas, que se separan por
centrifugacin filtracin, recogin-dose
un sobrenadante libre de protenas.

T. Hayde Ziga Cceres

 Desprot. cidos ms utilizados:
1. CIDO TNGSTICO (Folin Wu)
Na2WO4 + H2SO4 H2WO4 + Na2SO4
1 vol. Sangre + 7 vol. de H2O + 1 vol Na2WO4
10 % + 1 Vol. H2SO4 0,66 N.

2. CIDO TRICLOROACTICO
1 vol sangre + 9 vol. c. TCA 10 %

3. CIDO PERCLRICO
1 vol
24/04/17
sangre + 1 vol H 2O + 2 vol HCLO4 6 N
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Desprot. alcalino ms utilizados:
1. SOMOGYI: Sulfato de Zinc en medio alcalino
SO4Zn + 2 NaOH SO4Na2 + Zn(OH)2
SO4Zn + Ba(OH)2 SO4Ba + Zn(OH)2

TITULAR:
SO4Zn 5 % Deben corresponderse
Ba(OH)2 0,3 N vol a vol en pcia de
NaOH fenolftalena 1% en etanol
Los desprots se pueden guardar en congeladores de
-20 -80 C, dependiendo de las susts que quieran
analizarse.
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Desproteinizante de Folin Wu cido Tngstico
Agua 7,0 8,0 mL 3,5 mL 100 mL
mL
Muestra 1,0 1,0 mL 1,0 mL 1,0 mL
mL plasma o L.C.R. de
sang suero Orina
re
Tg Na 10 1,0 0,5 mL 0,25 mL
% mL

H2SO4 1,0 0,5 mL 0,25 mL

mL
0,66 N
DILUCIN:
24/04/17
1:10 1:10
T. Hayde Ziga Cceres
1:5 1:100
9
 1 2 3 4
Agua destilada 3.5 mL 3.5 mL 3.5 mL
Suero 0.5 mL
Sangre 0.5 mL 0.5 mL
Orina 3.5 mL
ATC 5 % 1 mL
Tungstato Na 10 0.5 mL
%
H2SO4 2/3 N 0.5 mL
ZnSO4 0.5 mL
Ba(OH) 2 0.5 mL
cido actico 2 1.5 mL
%
Diluc. de
24/04/17 0.5:5 0.5:5 0.5:5 3.5:5 10
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 Mtodos de cuantificacin

a) Mtodo qumico (M. de Caraway)

c. rico + H3PW12O40
Alantona +

CO2 + Azul de
Tungsteno

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 CIDO RICO
Mtodo de Caraway
Fundamento:
El c. rico es oxidado a alantona y CO 2 por
el cido fosfotngstico en solucin alcalina.
El c. fosfotngstico es reducido a azul de
tungsteno que se mide a 710 m

c. rico + H3PW12O40
Alantona + CO2 + +
Azul de Tungsteno
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 CIDO RICO
Mtodo de Caraway
REACTIVOS:
Tungstato Na 10 %
c. Sulfrico 2/3 N
Carbonato de Na 14 %
R. cido fosfotngstico
Stock c. rico 100 mg/dL
Sols Sts de 5, 10 y 15 mg/dL

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Desproteinizado:
0,5 mL de suero
4,0 mL de agua
0,25 mL de H 2SO 4 0,66 N
0,25 mL de Tungstato de Na
Mezclar x agitac. y centrif. o filtrar.

0.5 mL de suero - 5 mL de
filtrado
X V.R. - 1.5 mL
X = 0.75 = 0.15 = V.R.
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5 T. Hayde Ziga Cceres 15
Procedimiento:
Bl M.P. St.
Agua 1,5
Suero desprot. (1:10) 1,5
u Orina (1:100)
Estndar 0,5, 1,0, 1,5
% 1,5
Carbonato Na 14 % 0,5 0,5 0,5
Agit., reposo 5 min.
c. Fosfotngstico 0,5 0,5 0,5
Agit., reposo 15
24/04/17 min.
T. Hayde Leer a 710 m vs16
Ziga Cceres
 Stock cido rico 100 mg/dL
de agua

Sols Sts de: 0.5 1.0

1.5 mg/dL de agua

En 1.5 mL de
c/St. hay: 0.0075 0.015
0.0225 mg c. rico
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cido ricomg/dL = [CST] x 100 x AMP
VR AST
1-10 0.0075-0.15mLsuero
0.15-1.5 x-100mLsuero

=0.0075x100=5mg/dLsuero
0.15
=0.015x100=10mg/dLsuero
0.15
=0.0225x100=15mg/dLsuero
0.15
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 CST AST
X AMP

cido ricomg/dL = CST x AMP

AST
Factor 1 . +
Factor 2
Factor 3 .
/ 3 Fp %

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cido ricomg/dL = [CST] x 100 x AMP
VR AST
1-100 0.0075-0.015
0.015-1.5 x-100mLorina

=0.0075x100=50mg/dLorina
0.015
=0.015x100=100mg/dLorina
0.015
=0.0225x100=150mg/dLorina
0.015
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24/04/17 21
24/04/17 22
24/04/17 23
24/04/17 24
 CIDO RICO
Mtodo enzimtico
Fundamento:

c. rico + 2H 2O + O 2 Uricasa Alantona +

H 2O 2 +
CO 2

H 2O 2 + 4 AF + Clorofenol POD Quinona

coloreada +
H 2O
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b) Mtodos enzimticos
c. rico + 2H 2O + O 2 Uricasa Alantona +
H 2O 2 + CO 2

1. Por espectrofotometra diferencial:

c. rico abs a 283 m a pH<7
y de 290 a 293 m a pH>7
Se mide Abs a las longs de onda
mencionadas antes y despus de la
incubacin del c. rico con la Uricasa
pte. en suero, plasma u orina.

24/04/17 T. Hayde Ziga Cceres 26

Procedimiento:

Bl M.P. St.
Estndar - - 20 L
Suero - 20 uL -
u Orina (1:100)
R. 1 800 800 800 L
Mezcl suav. e incub. 5 min a 37 C
20 min a temp. amb.
Enfriar y leer a 505 m

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2. El H2O2 producido en la reaccin con la
uricasa se puede cuantificar as:
H2O2 + Etanol Catalasa Acetaldehdo + H2O
Acetaldehdo + NAD Acetaldehido DH Acetato +
NADH + H2O Se mide la aparicin de NADH a
340 m
H2O2 se det. midiendo el cromgeno
formado x su accin oxidante sobre la
o-dianisidina a 530 m .
H2O2 se oxida a 3-metil-2-benzotiazolinona
y N,N-dimetilanilina en pcia de
peroxidasa dando un col. azul de
indamina, que abs a 600 m
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H2O2 reacciona con 3,5 dicloro-2-
hidroxibenceno-sulfnico y 4
aminofenazona p formar un col.
rojo de quinonimina, que abs a
520 nm y es proporcional a la
cantidad de H2O2 y por ende del
c. rico pte en la muestra.

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 El c. rico aum. en plasma se asocia
epidemiolgicamente a enfs. cardiovascu-
lares como el infarto de miocardio,
accidente cerebrovascular, hipertensin e
insufic. cardiaca.
Se ha propuesto tomar la conc. en plasma
de cido rico >4 mg/dL como un signo
de alerta.

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 TABLA DE CONTENIDO DE PURINAS EN
ALIMENTOS
ALIMENTOS ALIMENTOS A ALIMENTOS A
RECOMENDABLES LIMITAR EVITAR
0-50 mg./100 g. 50-150 mg./100 g. 150-1000
mg./100 g.
Fruta Guisantes Vsceras
Zumos de fruta Legumbres secas (hgado,
Verduras Coliflor riones,
(excepto del Esprragos sesos)
grupo de Espinacas Extracto de
alimentos a Setas carne
limitar) Productos Anchoas
Nueces integrales Arenque
Cereales Aves (pollo, pato, Sardina
Pan (excepto ) Caballa
integral) Carne (ternera, Moluscos
Bebidas (caf, t, cordero, cerdo)
)24/04/17 Pescado (excepto
T. Hayde Ziga Cceres 31
Grasas los de G3)
 cido rico:
Componente del riesgo
cardiovascular en el Sndrome
Metablico

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24/04/17 T. Hayde Ziga Cceres 33
24/04/17 T. Hayde Ziga Cceres 34
24/04/17 T. Hayde Ziga Cceres 35
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