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Seminario
:ESPECTROFOTOMETRA
Curso
:Bioqumica y Nutricin
Alumnos
Ciclo
: III
Sede
: CHORRILLOS
Turno
: TB
ESPECTROFOTOMETRIA
ESPECTROFOTOMETRIA
Es el mtodo de anlisis ptico ms usado
en las investigaciones qumicas y
bioqumicas.
Espectro
Foto
Metr
a
Espectro de radiacin
electromagntica
Luz visible
Medicin
ESPECTROFOTOMETRIA
Es el conjunto de tcnicas que utilizan la
luz para medir la concentracin de las
sustancias qumicas.
En la bioqumica se utiliza para:
Conocer la concentracin de un compuesto
en una disolucin.
Determinar la glucosa en la sangre en un
laboratorio de anlisis qumico.
-
EL ESPECTROFOTMETRO
Es un instrumento
que
permite
comparar la radiacin
absorbida
o
transmitida por una
solucin que contiene
una
cantidad
desconocida
de
soluto, y una que
contiene
una
cantidad conocida de
la misma sustancia.
EL ESPECTROFOTMETRO
CONCEPTOS QUIMICOS
Soluciones Molares
Son aquellas que en 1 litro de agua hay disuelto el
peso molecular de la sustancia expresada en
gramos. Ejemplo: Una solucin (M) molar de
cloruro de sodio (peso molecular=58,5) tiene 58,5
gr disueltos en 1 litro de agua
Soluciones Normales
Son aquellas que en 1 litro de agua hay disuelto el
peso molecular de la sustancia expresada en
gramos dividido por el nmero de electrones que
intercambia en la reaccin que se va a utilizar.
CONCEPTOS QUIMICOS
Porcentaje de masa / volumen ( m /v)
% soluto (p/v) = gramos de soluto x 100
ml de disolucin
Ejemplo:
Se ha pesado 2,25 g de NaCl y se disuelve con
250 mL de agua destilada. Determinar el % de
soluto y de acuerdo al resultado mencionar si se
trata de un suero fisiolgico:
Desarrollo
% soluto (p/v) = 2,25 g x 100 = 0,9 %
250 mL
Se trata de un suero fisiolgica ya que se
encuentra a la concentracin del 0,9%
CONCEPTOS FISICOS
La absorcin de las radiaciones ultravioleta,
visibles e infrarrojas depende de la estructura de
las molculas, y es caracterstica para cada
sustancia qumica.
Cuando la luz atraviesa una sustancia, parte de la
energa es absorbida; la energa radiante no
puede producir ningn efecto sin ser absorbida.
FENMENO DE ABSORCIN
Este concepto se relaciona mas con la muestra
puesto que nos indica la cantidad de luz
absorbida por la misma, y se define como el
logaritmo de 1/ T, en consecuencia :
A = log 1/T = -log T = -log I t / I o.
FRECUENCIA (F)
La frecuencia tiene relacin inversa con la
longitud de onda, a mayor frecuencia menor
longitud de onda.
(velocidad = V = 300,000Km/s)
Imagen:
http://bibliotecadigital.ilce.edu.mx/sites/ciencia/volumen3/ciencia3/126/img/126_17.g
if
ESPECTRO DE LUZ
Se
El
poseemos.
Color
Longitud de
onda
violeta
380450 nm
azul
450495 nm
verde
495570 nm
amarillo
570590 nm
naranja
590620 nm
rojo
620750 nm
Imgenes de:
http://edafologia.ugr.es/OptMine/xplortos/media/retarcol.gif
longitud de onda
luz que se
Aproximada
refleja o ve
380 450 nm
verdoso
450 495 nm
495 570 nm
570 590 nm
590 620 nm
Azul verdoso
620 750 nm
Verde azulado
color de
absorbe
Violeta
Azul
Verde
Amarillo
Naranja
Rojo
Amarillo
Amarillo
Rojo
Azul
ESPECTRO ELECTROMAGNTICO
Es el conjunto de ondas electromagnticas que se encuentran
ordenados de acuerdo a su longitud de onda () y frecuencias
(F), as tenemos:
Rayos X (1-100 nm)
Ultravioleta (100-380 nm)
Visible (380-750 nm)
Infrarrojo (750-100 000 nm)
Microondas (100 000- 1 000 000 nm)
TRANSMITANCIA
Cuando un haz de luz pasa a travs de un medio,
se registra una cierta prdida de intensidad,
debido a la absorcin por parte de la sustancia.
Se llama TRANSMITANCIA (T) a la relacin
entre la intensidad de luz transmitida por una
muestra problema (I) con la intensidad de luz
incidente sobre la muestra (Io):
Concen
tracin
LEY DE BEER
Cuando un rayo de luz monocromtica pasa a travs de un
medio absorbente, su intensidad disminuye exponencialmente
a medida que la concentracin del medio absorbente aumenta
I0
I = I0e-ac
I0
I0
LEY DE BEER
La aplicacin prctica de la Ley de Beer es, que
conociendo la absorbancia de una sustancia
podemos averiguar su concentracin y esto lo
podemos hacer de dos formas:
1. Por comparacin con una solucin conocida: si
tenemos 2 soluciones, una problema (P) y una
estndar (S), podemos establecer una relacin
matemtica entre ellas.
2. A travs de una curva de calibracin
LEY DE LAMBERT
Cuando un rayo de luz monocromtica (I0) pasa a travs de un
medio absorbente, su intensidad disminuye exponencialmente
(I) a medida que la longitud del medio absorbente aumenta
I = I0e-ab
I0
1 cm.
I0
2 cm.
I0
3 cm.
EXPRESION
DESCRIPCION
Describe la cantidad en
%p/p
% Soluto = gramos de Soluto x 100
gramos de Soluto o de
Porcentaje
gramos de solucin
peso a
solvente presentes en 100
peso
% Solvente = gramos de solvente x100
gramos de solucin.
gramos de solucin
%p/v
Es una forma de expresar
Porcentaje
los gramos de Soluto que
Peso a
% Soluto = gramos de Soluto x 100
volumen
mililitros de solucin
existen en un volumen de
100 mL de solucin.
%v/v
Porcentaje % Vol. de Soluto = mililitros de Soluto
volumen a 100
mililitros de solucin
volumen
lquidos
expresa
de
el
volumen de un Soluto en
un volumen de 100 mL de
solucin.
EXPRESION
Molaridad
(M)
M= # Moles de Soluto
Litro de solucin
DESCRIPCION
Corresponde al nmero de moles
de Soluto por cada litro de
solucin.
Expresa
el
nmero
equivalentes-gramo
de
de
Soluto
Fraccin
Molar (X)
XA=
nA
Fraccin de Soluto
nA + nB
XB =
n B Fraccin de Solvente
nA + nB
Cuantificacin de
Protenas
Determinar
la concentracin de
protenas en una muestra biolgica
es una tcnica de rutina bsica
cuando se aborda un esquema de
purificacin de una protena concreta,
cuando se quiere conocer la actividad
especfica
de
una
preparacin
enzimtica, para el diagnstico de
enfermedades, as como para otros
muchos propsitos.
MANEJO DE ESPECTROFOTMETRO
Prender el aparato (a)10 minutos antes de utilizarse, se activar la
luz roja de encendido (b).
Seleccionar la longitud de onda con el botn (c).
Ajuste (con a) a 0% de transmitancia, con la tapa cerrada y sin
muestra.
Insertar la cubeta con el blanco en su seccin (d).
b
d
c
a
COMPONENTES
CUIDADOS
Las muestras no deben tener burbujas, encontrarse turbias o con
precipitados.
El volumen de la muestra en la cubeta, no debe ser excesivo para evitar
que se desborde, en caso de que sucediera, se debe limpiar con un pao
limpio o papel absorbente suave, para evitar rayarla.
GRACIAS