PRUEBAS SEROLUTICAS

TREPONMICAS

PRUEBAS TREPONMICAS
Son pruebas que usan al Treponema pallidum o componentes de ste como antgeno y se basan en la deteccin de anticuerpos contra componentes treponmicos. Estas pruebas se utilizan para verificar la reactividad de las pruebas no treponmicas, pueden ser usadas para confirmar una sospecha con evidencia clnica de sfilis, como ocurre en la sfilis tarda, y cuando las pruebas no treponmicas son no reactivas.

SFILIS
Es una enfermedad crnica que se contagia por contacto directo, transfusiones o por transmisin vertical (de la madre al feto) a travs de la placenta. Se caracteriza por presentar etapas sintomticas separadas por perodos asintomticos o de latencia.

Ejemplo de una lcera de sfilis primaria.

Ejemplos de una erupcin secundaria en las palmas de las manos (arriba) y una generalizada en el cuerpo (izquierda).

Estados y evolucin
PRIMARIO TIEMPO 3 semanas a 3 meses. Media de 21 das. SEROLOGA SNTOMAS Variable Chancro nico o mltiple. Linfadenopat a regional. Alteraciones del LCR en el 40%, Positiva Roseola siflica. Variable Asintomtico. Variable Asintomtico. Variable Gummas. SECUNDARIO Seis semanas a seis meses. LATENTE PRECOZ Uno o dos aos. LATENTE TARDO De dos a veinte aos. TERCIARIO Diez a veinte aos.

Ppulas.
Lesiones musculares. Condilomas. Alopecia.

Recadas en el 25%.

Curacin espontnea?

Neurosfilis.
Sfilis cardiovascular.

A partir del tercer mes de gestacin, posibilidad de afectacin fetal.

 El agente responsable es el Treponema pallidum (TP), tiene forma de espiral y su longitud alcanza unos 10 a 15 m con un espesor es de 0,15 m.

PRUEBAS TREPONMICAS

MICROSCOPA DE CAMPO OSCURO

Los treponemas son tan delgados, que no pueden ser observadas en un microscopio de luz a campo normal, y es necesario un microscopio que tenga campo oscuro.
Cuando se obtiene hallazgos positivos al campo oscuro se deben realizar obligatoriamente pruebas serolgicas confirmatorias. Un examen de campo oscuro negativo no descarta la sfilis.

INMUNOFLUORESCENCIA DIRECTA
Mediante este examen, se puede detectar la presencia de subespecies de T pallidum en tejidos, fluidos corporales, secreciones y exudados de lesiones. La prueba permite diferenciar treponemas patgenos de no patgenos, por una reaccin de Ag-Ab.
La muestra debe ser secada al aire y fijada con acetona, metanol o calor, luego es marcada con anticuerpos humanas o de conejo o monoclonales conjugados con el colorante fluorescente isotiocianato de fluorescena (FITC). Las muestras de tejidos se trabajan de manera similar, pero deben ser fijadas por dos horas con formol neutro, luego deben ser parafinadas.

TPI (T. pallidum immobilization)

El primer test treponmico fue desarrollado por Nelson y Mayer en 1949. Se inhibe la motilidad de treponemas vivos, virulentos, por la presencia de anticuerpos especficos.

 Se enfrenta suero inactivado del paciente con complemento de cobayo y con una suspensin de treponemas vivos obtenidos por inoculacin en testculos de conejo con cepa.
Se incuba a 35C durante 18-24 horas en atmsfera de nitrgeno- CO2. La lectura se realiza en campo oscuro evalundose el porcentaje de inmovilizacin.

Se considera positiva cuando se logra un 50-100% de inmovilizacin.

FTA-ABS (Fluorescent treponemal antibody absorption)

Una dilucin 1:5 del suero del paciente se hace reaccionar con una suspensin de treponemas muertos fijados en un portaobjeto. Se revela la presencia de anticuerpos con antigamma globulina humana conjugada con isotiocianato de fluorescena.

 Esta tcnica daba falsos positivos en un 25% de sueros normales, esto se debe a antgenos comunes al T. pallidum y treponemas banales. Para solucionar esto se trata previamente el suero con un extracto proteico de treponemas de Reiter (sorbente) para absorber los anticuerpos de grupos presentes con el que se diluye 1:5 el suero de all el nombre de FTA-abs.

FTA-ABS-DS (FTA-double staining)

Una variante de esta tcnica la constituye la FTA-abs con doble tincin (FTA-abs DS) emplea como anticuerpo revelador anti-IgG humana conjugada con isotiocianato de tetrametil rodamina y como contraste anti-T. pallidum conjugado con isotiocianato de fluorescena, con lo que se elimina la necesidad de examinar con campo oscuro la presencia de treponemas en el preparado. En ambos casos se informa Reactivo, Dbil Reactivo y No Reactivo .

19S-IgM-FTA-ABS
Usa IgM de 19S que es obtenida por ultracentrifugacin y tiene como ventaja una mayor especificidad.

 La 19S-IgM permanece por corto tiempo en la sangre despus del tratamiento y su reaparicin determina una reinfeccin, en cambio, la IgM total se puede detectar hasta un ao despus. La 19S-IgM-FTA-ABS es de gran utilidad en los siguientes casos: confirmacin de la sfilis muy temprana, determinar el xito teraputico y diagnosticar una reinfeccin; no es de utilidad en la sfilis terciaria, porque da falsos negativos.

MHA-TP (Microhemaglutinacin para T. pallidum)

Es una tcnica sencilla en la que inicialmente se trata el suero con un medio de absorcin (treponemas de Reiter y estabilizadores) luego se enfrenta en placas de microtitulacin a una suspensin de eritrocitos de carnero sensibilizados con antgeno de T. pallidum, se debe agregar eritrocitos no sensibilizados como control de reactividad inespecfica.

 Los resultados se informan de acuerdo al patrn de aglutinacin, en presencia de anticuerpos especficos los eritrocitos aglutinan (reaccin positiva), en ausencia de anticuerpos los eritrocitos sedimentan( reaccin negativa).

Nuevas pruebas para el diagnstico de la sfilis:

ELISA (Enzyme-Linked lmmunoabsorbent Assay)

El antgeno o anticuerpo que se utiliza, es inmovilizado sobre un soporte slido, que es generalmente una placa de poliestireno, por lo que la reaccin antgeno-anticuerpo que se produce tambin queda inmovilizada en el soporte slido. A esto se le adiciona un sustrato (enzima) marcado con un cromgeno que produce una reaccin de color, que es directamente proporcional a analito (antgeno o anticuerpo a ser detectado) y que es cuantificado con un lector de ELISA que es un espectrofotmetro modificado.

Western Blot
Detecta anticuerpos para eptopes especficos en antgenos, previamente separados por electroforesis de alta resolucin. La electroforesis separa los componentes antignicos por sus diferentes pesos moleculares. Luego estos son transferidos a una membrana de nitrocelulosa reteniendo su posicin electrofortica y reaccionan con el suero del paciente, si los anticuerpos especficos estuviesen presentes, estos son revelados usando un antianticuerpo conjugado con una enzima a la que se le agrega un sustrato cromognico, dando como resultado bandas coloreadas en la tira de nitrocelulosa.

Reaccin en Cadena de la Polimerasa (PCR)

Amplifica o replica varias veces secuencias especficas de ADN de una muestra, Se utiliza dos porciones cortas de ADN denominados cebadores o iniciadores o "primers", estos son oligonucletidos sintticos de ADN o ARN cuya secuencia es conocida, que luego de fusionarse (hibridizarse) a un ADN complementario, actan como una plantilla para sintetizar nuevo ADN, esto es un proceso enzimtico repetido en varios ciclos trmicos.