TÉCNICAS DE RADIOFARMACIA
Introducción.
Un inmunoensayo es una prueba analítica de laboratorio que
se realiza in vitro para detectar la presencia o cantidad de
una sustancia en una muestra de sangre u otros líquidos
corporales. Se basa en la reacción inmunológica entre un
antígeno y un anticuerpo.
Aplicaciones del inmunoanálisis.
El inmunoanálisis se utiliza para detectar la presencia de una
sustancia en una muestra, como por ejemplo en el
diagnóstico de enfermedades o en el control de calidad de
medicamentos. También se puede utilizar para determinar la
cantidad de una sustancia en una muestra, como en el
seguimiento de tratamientos médicos.
Tipos de inmunoensayos.
Existen diferentes tipos de inmunoensayos, como el
radioinmunoanálisis (RIA) y el enzimoinmunoanálisis (ELISA).
Cada uno de ellos utiliza diferentes técnicas y métodos para
detectar y cuantificar sustancias en una muestra.
Tipos de muestras y su conservación.
Las muestras utilizadas en el inmunoanálisis pueden ser
sangre, linfa o secreciones corporales. Es importante
conservarlas adecuadamente para evitar alteraciones en los
resultados, como por ejemplo manteniéndolas a una
temperatura adecuada.
El radioinmunoanálisis. RIA.
El RIA es una técnica de inmunoanálisis que utiliza
radioisótopos para detectar y cuantificar sustancias en una
muestra. Se basa en la unión específica entre un antígeno y
un anticuerpo y se utiliza en el diagnóstico de enfermedades
y en la investigación biomédica.
Tipos de
radioinmunoanálisis.Enzimoinmunoanálisis.
Técnica ELISA.
El enzimoinmunoanálisis (ELISA) es una técnica de
inmunoanálisis que utiliza enzimas para detectar y cuantificar
sustancias en una muestra. Se basa en la unión específica
entre un antígeno y un anticuerpo y se utiliza en el
diagnóstico de enfermedades y en la investigación
biomédica.
Contadores de pozo. Características.
Los contadores de pozo son instrumentos utilizados en el
inmunoanálisis para medir la cantidad de sustancia presente
en una muestra. Tienen la capacidad de realizar múltiples
mediciones simultáneas y son muy sensibles, lo que los hace
ideales para su uso en laboratorios.
Cuantificación y representación de datos
RIA.
En el RIA, la cantidad de sustancia presente en una muestra
se mide a través de la cantidad de radioisótopo presente en
la muestra. Los resultados se representan en gráficos y se
utilizan para determinar la cantidad de sustancia presente en
la muestra.
Control de calidad del radioinmunoanálisis.
El control de calidad es esencial en el RIA para garantizar la
precisión y fiabilidad de los resultados. Se realizan pruebas de
control para asegurar que los reactivos y equipos utilizados
funcionan correctamente y se siguen protocolos estrictos
para evitar errores en los resultados.
La unión Ag-Ac
La unión Ag-Ac es una unión reversible entre un antígeno
(Ag) y un anticuerpo (Ac) que se caracteriza por ser fuerte y
estar mediada por fuerzas hidrofóbicas, iónicas y de Van der
Waals. Esta unión es espontánea y no requiere de energía, y
puede formar complejos insolubles con múltiples Ac, lo que
se conoce como avidez. Además, algunos Ac pueden
reaccionar con varios Ag relacionados química y
estructuralmente, lo que se conoce como reactividad
cruzada.
Aplicaciones del inmunoanálisis
El inmunoanálisis es una técnica que permite detectar y
cuantificar sustancias en cantidades muy pequeñas y
mezcladas con otras. Gracias a su gran sensibilidad y
especificidad, se utiliza en diversas aplicaciones, como medir
niveles de hormonas, metabolitos, virus, células tumorales,
exposición a agentes infecciosos, entre otros. También se
puede utilizar para medir niveles de medicamentos, drogas y
toxinas en sangre.
Procesamiento de muestras
El procesamiento de muestras es el periodo de tiempo en el
que se preparan las muestras para su análisis en el
laboratorio. Esto incluye la impresión de etiquetas
identificativas, la clasificación de las muestras y su
conservación adecuada para evitar alteraciones en los
resultados.
Técnicas de Radiofarmacia
Las técnicas de Radiofarmacia son utilizadas en el laboratorio
para analizar muestras y obtener resultados precisos. Entre
estas técnicas se encuentra el RIA (radio-inmuno-análisis),
que consiste en utilizar un marcador radioactivo para medir
la cantidad de una sustancia en una muestra. También se
pueden producir anticuerpos monoclonales para medir
hormonas, vitaminas, marcadores tumorales y fármacos.
Métodos de detección en Radiofarmacia
En Radiofarmacia se utilizan diferentes métodos de detección
para medir la radioactividad de una muestra. Algunos de
estos métodos son la precipitación inmunológica, la fase
sólida y el uso de contadores gamma y de centelleo líquido.
Cada uno de estos métodos se adapta a diferentes tipos de
radioisótopos y permite una medición precisa de la
radioactividad en la muestra.
Precipitación inmunológica
La precipitación inmunológica es un método de detección en
Radiofarmacia que se basa en el uso de un segundo
anticuerpo para formar un complejo insoluble y precipitable
con la fracción ligada de la muestra. Después de un tiempo
de incubación y centrifugación, la fracción libre se elimina y
la fracción ligada se mide para determinar la radioactividad.
Este método es útil para eliminar la fracción libre y aumentar
la especificidad de la medición.
Fase sólida
La fase sólida es el método más utilizado en Radiofarmacia y
consiste en inmovilizar el anticuerpo o antígeno en un
soporte sólido, como paredes de tubos o partículas
magnéticas. Después de un lavado, la fracción libre se elimina
y la radioactividad se mide en la fase sólida. Este método
permite una medición precisa y una mayor especificidad al
retener las moléculas indicadoras en el soporte.
Contadores gamma y de centelleo líquido
En Radiofarmacia, se utilizan diferentes tipos de contadores
para medir la radioactividad en una muestra. Los contadores
gamma se utilizan para radioisótopos emisores gamma,
mientras que los contadores de centelleo líquido se utilizan
para radioisótopos emisores beta. Estos contadores miden la
radioactividad en unidades de cuentas por minuto y están
conectados a un ordenador para transferir los datos.
Tipos de radioinmunoanálisis
En Radiofarmacia, se utilizan dos tipos de
radioinmunoanálisis: el RIA y el IRMA. El RIA competitivo se
basa en el marcaje del antígeno y el IRMA no competitivo se
basa en el marcaje del anticuerpo. Ambos métodos se
realizan en fase sólida y permiten una medición precisa de la
radioactividad en la muestra. Sin embargo, debido a las
medidas de protección radiológica, el RIA se utiliza
principalmente con fines de investigación.
Técnicas de inmunoensayo
Las técnicas de inmunoensayo son métodos utilizados en
laboratorios para detectar y cuantificar la presencia de
antígenos (Ag) en muestras biológicas. Estas técnicas se
basan en la unión específica entre los antígenos y los
anticuerpos (Ac), y pueden ser competitivas o no
competitivas.
Técnicas de inmunoensayo competitivas
Las técnicas de inmunoensayo competitivas, como la RIA y la
IRMA, se basan en la competencia entre dos antígenos (uno
presente en la muestra y otro inmovilizado) por unirse a un
anticuerpo marcado radioactivamente. La cantidad de
radiación medida es inversamente proporcional a la
concentración de antígeno en la muestra.
Técnicas de inmunoensayo no competitivas
Las técnicas de inmunoensayo no competitivas, como la
técnica "tipo sándwich" o ELISA, se basan en la unión de un
antígeno entre dos anticuerpos (uno inmovilizado y otro
marcado con una enzima). La cantidad de enzima presente es
directamente proporcional a la concentración de antígeno en
la muestra.
Ventajas de la técnica ELISA
La técnica ELISA ha reemplazado a la RIA y la IRMA en
muchos laboratorios debido a sus múltiples ventajas, como el
uso de enzimas de bajo costo y fácil obtención, la ausencia de
radioisótopos y la reducción de interferencias en la muestra.
Además, es una técnica más económica y no requiere de
instalaciones sofisticadas ni autorizaciones especiales para su
realización.
Contador de pozo
El contador de pozo es un instrumento utilizado en RIA e
IRMA para medir la actividad de las muestras. A diferencia
del activímetro, utiliza un cristal de NaI(Tl) que permite medir
exclusivamente rayos X y radiación gamma. Puede ser
utilizado con pequeños volúmenes de muestra y niveles bajos
de actividad.
Cuantificación y representación de datos en
RIA
En RIA, la radiactividad resultante se cuantifica mediante un
contador gamma o uno de centelleo líquido. Los datos
obtenidos se representan en una curva de calibración, donde
en el eje de ordenadas se muestra la absorbancia de los
tubos patrón y en el eje de abscisas los valores de
concentración de antígeno en la muestra. Una muestra sin
antígeno no producirá reacción enzimática y se considerará
una prueba ELISA negativa.
Cuantificación de la radiactividad tras un RIA
La cuantificación de la radiactividad tras un RIA es un proceso
importante en el que se recomienda analizar el blanco, la
muestra problema y el patrón. Cada determinación debe
hacerse por duplicado y en algunos casos, incluso por
triplicado. Una vez terminado el ensayo, se calcula la media
aritmética de los resultados obtenidos y se hallan las cuentas
por minuto netas conseguidas con la muestra y con los
patrones.
Control de calidad del radioinmunoanálisis
El control de calidad en el laboratorio de RIA es esencial para
garantizar resultados precisos y confiables. Se lleva a cabo
mediante un control de calidad interno, que incluye la
verificación de la eficacia del contaje, la desviación
estadística y la actividad de fondo, y un control de calidad
externo, en el que se envían muestras certificadas a
laboratorios externos para su análisis. Estos controles ayudan
a detectar fallos y tomar decisiones a corto y largo plazo en el
laboratorio.
