TÉCNICAS INMUNOLÓGICAS DE

DIAGNOSTICO EN EL
LABORATORIO 
ÍNDICE Introducción……………………………………………………………………………...
Radio Inmuno Ensayo…………………………………………………………………
Inmunoprecipitación………………………………………………………………....
ELISA………………………………………………………………………………………….
Fijación de complemento…………………………………………………………..
Fagocitosis…………………………………………………………………………………
Western blot……………………………………………………………………………..
Inmunohistoquímica…………………………………………………………………
Inmunofluorescencia……………………………………………………………….
Inmunodifusión……………………………………………………………………….
Test de Coombs……………………………………………………………………….
INTRODUCCIÓN

En esta presentación se expondrán las diferentes pruebas que se realizan en el

área de inmunología

1
RADIOINMUNOENSAYO

2
 ¿QUÉ ES? FUNDAMENTO:
• El RIA se basa en la competencia existente entre
• Es un tipo de inmunoensayo o método
el anticuerpo, un antígeno no marcado y una
radioinmunométrico que se basa en la formación
específica de los complejos antígeno-anticuerpo cantidad conocida del antígeno marcado para
(Ag-Ac) lo que le dota de una gran especificidad formar los complejos AgAc.
unido a la sensibilidad de los métodos radiológicos.
• Esta técnica fué desarrollada por Solomon A.
Berson y Rosalyn Yalow en 1960 para determinar la
concentración de insulina en el plasma sanguíneo.
Por ese motivo, R. Yalow recibió el Nobel de
Medicina en 1977 (Berson murió en 1972). Hoy en
día, esta técnica se utiliza para detectar y
cuantificar sustancias que se encuentran en
cantidades muy pequeñas y mezcladas con muchas
otras. Es por tanto una técnica muy sensible y muy
específica.

3
 PROCEDIMIENTO:

• Se mezcla una cantidad constante de antígeno

marcado radioactivamente y una cantidad
constante de un anticuerpo para ese antígeno
• Se produce la reacción entre antígeno (Ag) y
anticuerpo (Ac)
• Se separa la fracción de antígeno que se ha
unido de la que permanece libre (hay varias
formas de hacerlo. En la figura inferior se
utiliza un 2º anticuerpo dirigido contra el
primero)
• Se determina la radioactividad
• Si la muestra contiene además antígeno frío
(no marcado), éste competirá con el marcado
para unirse al anticuerpo, y se observará un
descenso en la medida de la radioactividad
• Este descenso es proporcional a la
concentración de antígeno frío en la muestra 4
PRECIPITACIÓN
• Las pruebas de inmunoprecipitación son
procedimientos serológicos que demuestran la
existencia de anticuerpos capaces de provocar la
precipitación de sus correspondientes antígenos
cuando ambos reactivos se encuentran en
solución
• .Pueden ser realizadas en medios líquidos como
en medios semi-sólidos(geles). En los primeros, la
interacción de antígeno y anticuerpo resulta a
menudo perturbada por la formación de
corrientes y otros disturbios debido a cambios de
temperatura y/o de pH.

3
 En medio sólido (precipitación en gel):
 Se usa como soporte de la reacción un gel de manera que
las moléculas difundirán libremente a través de él y a lo largo del
recorrido se irá formando un gradiente de concentraciones que hará
que en un
determinado punto los reactivos se encuentren en su relación de
equivalencia, en ese punto se producirá un precipitado que sobre el
gel se verá como una nítida banda blanca que permanece estable
mientras un mayor flujo de reactantes no provoque su re disolución.

4
DIFUSIÓN SIMPLE
MONODIMENSIONAL
(MÉTODO DE OUDIN):

• Se coloca en un tubo de ensayo agar

fundido mezclado con un vol. igual
del antisuero a analizar (en este caso
queremos detectar la presencia de un
Ac.) Se deja solidificar y se añade la
solución de Ag, este va a difundir por
el agar formando un gradiente de
concentración decreciente hacia el
fondo del tubo, en determinada zona
Ag y Ac. alcanzarán la relación de
equivalencia, formándose ahí la
banda de precipitado.

5
DIFUSIÓN DOBLE
MONODIMENSIONAL
( MÉTODO DE OAKLEY
FULTHORPE):

En este caso colocamos en la parte

inferior del tubo un vol. de agar 1%
fundido, mezclado con un vol. igual del
antisuero, dejamos solidificar y
agregamos igual vol. de agar 0,5%,
dejamos solidificar y por ultimo
agregamos agar 1% donde se encuentra
disuelto el Ag

6
ELIS
A 7
QUE SE VA A DETERMINAR

Como se trata de una técnica de laboratorio que fue diseñada por

científicos suecos y holandeses en 1971, que permite detectar
pequeñas partículas llamadas antígenos, que habitualmente son
fragmentos de proteínas. La identificación es específica, es decir,
consigue que pequeños segmentos de proteínas destaquen y no
puedan ser confundidas con otras. Antígeno-anticuerpo

https://es.wikipedia.org/wiki/ELISA
8
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS

• Los valores normales dependen del tipo de sustancia

que se esté identificando. Algunos laboratorios
utilizan medidas distintas o examinan muestras
diferentes. Los rangos de los valores normales
pueden variar ligeramente entre diferentes
laboratorios. Hable con su proveedor de atención
médica acerca del significado de los resultados
específicos de su examen.

http://innovaciondelmilenio.blogspot.com/2010/12/test-de-elisa.html 9
FUNDAMENTO
• El método ELISA, se basa en el uso de Ags o Acs
marcados con una enzima, de forma que los
conjugados resultantes tengan actividad tanto
inmunológica como enzimática.
• Al estar uno de los componentes (Ag o Ac)
marcado con una enzima e insolubilizado sobre
un soporte o pocillo (inmunoadsorbente) la
reacción Ag-Ac quedará inmovilizada y, por
tanto, será fácilmente revelada mediante la
adición de un substrato especifico que al
actuar, la enzima producirá un color observable
a simple vista o cuantificable mediante el uso
de un espectrofotómetro o un colorímetro.
https://www.ferato.com/wiki/index.php/Test_de_Elisa

10
METODOLOGÍA

• ELISA no competitivo: Consiste en enfrentar la muestra con el Ag o Ac que está en la fase sólida.
• Si una muestra es positiva se formará el complejo AgAc, y al agregar el conjugado reaccionará con el
respectivo sustrato desarrollando color.
• Directo: Detectan Ag
• Indirecto: Detectan Ac
• ELISA competitivo: El Ac de la muestra va a competir con el conjugado por un número limitado de sitios
de unión del Ag. Habrá ausencia de color en una muestra positiva debido a que el sustrato no
encontrará a la enzima porque el conjugado ha sido desplazado por el AC presente

11
 ELISA DIRECTO
• Tapizado del pocillo con el Ag o Ac. Adición de la muestra
problema con la mezcla de Ags o Acs. Unión del Ag o Ac
específico al Ag o Ac tapizado en el pocillo.

• Lavado del pocillo para eliminar el exceso de Ag o Ac no unido.

• Adición del Ac secundario marcado con la enzima.

• Unión del Ac secundario al Ag o Ac. Lavado del pocillo para

eliminar el exceso de enzima no unida.

• Adición del sustrato. https://www.creative-diagnostics.com/ELISA-guide.htm

• Unión del sustrato a la enzima.

• Coloración.
12
ELISA DIRECTO CON ESPECTRO

• Adición de un substrato sobre el que sea capaz

de actuar la enzima marcadora.

• Lectura visual o colorimétrica del producto final

coloreado.

• Los lectores ELISA se llaman

espectrofómetros! !

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ELISA INDIRECTO
• Fijación al soporte insoluble (“tapizado”) de Ags
específicos.

• Lavado con solución salina Tween 20 como agente

tensioactivo (ph-7,2) para eliminar los Ags fijados
deficientemente o no fijados.
• Adición de Acs marcados (“conjugados”) con una enzima;
si los Acs reaccionan con los Ags, el complejo quedará
solubilizado.

• Lavado para eliminar los Acs marcados que no hayan

reaccionado.

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ELISA INDIRECTO

• Adición de un substrato sobre el que

sea capaz de actuar la enzima
marcadora.
• Lectura visual o colorimétrica del
producto final coloreado.

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EQUIPO

• Espectrofotómetro
• Diseñado para efectuar la lectura de los resultados de una técnica
que se utiliza para determinar la presencia de anticuerpos o
antígenos específicos presentes en una muestra. La técnica se basa
en la detección de un antígeno inmovilizado sobre una fase sólida,
mediante anticuerpos que, directa o indirectamente, producen una
reacción cuyo producto puede ser leído por el espectrofotómetro.
Se le conoce también con el nombre de Lector de ELISA.

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USOS

• Determinación o detección de:

• Enfermedades producidas por parásitos
• Enfermedades producidas por Micoplasmas
• Enfermedades producidas por bacterias: Mycobacterium tuberculosis, brucelas, Estreptococos,
Salmonelas… Enfermedades producidas por virus, Toxoplasmosis, Triquinosis, Tripanosomas… Enfermedad
de Newcastle, Peste porcina, Rotavirus, artritis vírica, Leucemia felina…
• Hormonas (GCH, Progesterona, Testosterona..)
• Cuantificación de inmunoglobulinas (IgG, IgE, IgA)
• Inmunopatología (Ac anti-DNA, Factor reumatoide, Inmunocomplejos circulantes)

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FIJACION DE
COMPLEMENTO

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¿QUÉ ES?:
Es una prueba inmunológica que se basa
en la fijación del complemento a un
anticuerpo.

FUNDAMENTO:
Se basa en la capacidad del complemento
para unirse a los complejos antigeno
anticuerpo.

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PROCEDIMIENTO:

1. Pruebas serológicas que se basan en la

inactivación del complemento por el complejo
antígeno-anticuerpo (etapa 1).
2. La unión del complemento libre puede verse por
la adición de un segundo sistema antígeno-
anticuerpo como el de hematíes y un anticuerpo
apropiado a los hematíes (hemolisina) que
requiere del complemento para su realización
(etapa 2).
3. La no lisis de eritrocitos indica que en la etapa 1
se ha producido una reacción antígeno-
anticuerpo específica.
4. Si los eritrocitos se lisan, está presente el
complemento libre lo que indica que no ha
ocurrido la reacción antígeno-anticuerpo en la
etapa 1.

20
FAGOCITOSIS

Este es un tema muy sencillo por el cual las células

blancas nos ayudan protegiéndonos de
organismos a veces patógenos que nos atacan.
Antes que nada empezaremos con una sencilla
pregunta:

21
¿Qué es la fagocitosis?

Es una función de células especializadas del sistema inmune,

capaces de remover cuerpos extraños y combatir infecciones del
sistema inmune como primera linea de defensa natural.

¿Qué funciones tiene?

En muchos organismos superiores, la fagocitosis es tanto un

medio de defensa ante microorganismos invasores como de
eliminación e incluso el reciclaje de tejidos muertos, además es
como una forma de nutrición para las células que realizan ésta
función.

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Células fagocitarias

La fagocitosis se lleva acabo en células especializadas

llamadas fagocitos, varias células en el cuerpo humano
ejercen funciones fagocitarias principalmente las
células blancas como:

Neutrófilos, Eosinófilos, Basófilos, Monocitos,

Macrófagos

23
ETAPAS DE LA FAGOCITOSIS

Comprende:

-Quimiotaxis
-Adherencia
-Ingestión
-Digestión
-Excreción

24
QUIMIOTAXIS

La quimiotaxis se presenta como un proceso fisiológico en donde

el glóbulo blanco combate las sustancias patógenas que han
producido inflamación, este glóbulo se margina del flujo
sanguíneo, que en estas zonas de inflamación es turbulento,
luego se adhiere a la pared del vaso y transmigra a través de este
para llegar a los entes patógenos para fagocitarlos. Este proceso
es considerado desde los fenómenos de transporte
electroquímico, flujos eléctricos y de concentración, entre otros.

25
ADHERENCIA

Otros receptores sobre la membrana de los leucocitos y otros fagocitos

actúan como mecanismos de adherencia sobre los microorganismos,
sea a productos microbianos específicos o sobre opsoninas del sistema
inmune del hospedador como:

-Receptor de manosa. Este receptor tiene afinidad por los

componentes de manosa presentes en las glucoproteínas y glucolípidos
de las paredes celulares microbianos.
-Scavenger. Estos receptores se unen directamente a microorganismos
y a moléculas de LDL modificadas.
-CD14. Es un ligando con preferencia específica al lipopolisacárido
presente en ciertas bacterias y está asociado a un receptor tipo Toll.

26

INGESTIÓN
La unión a receptores de adherencia
promueve señales de comunicación
intracelular que resultan en la
invaginación de la membrana del
fagocito rodeando al receptor y su
ligando patogénico. Al rodear por
completo al complejo receptor:
molécula, la membrana se une en sus
extremos y libera al interior de la célula
un fagosoma. Esto puede ocurrir en
más de un punto de la membrana
celular.
DIGESTIÓN
Una vez que el fagosoma está en el
citoplasma comienza la desintegración
del mismo, proceso que se realiza por
mecanismos dependientes o
independientes de Oxígeno. El primero
se da tras activarse rutas metabólicas
que consumen oxigeno, lo cual produce
la liberación de radicales libres del
oxígeno, que son tóxicos para los
microorganismos. En el segundo caso es
donde intervienen los lisosomas, los
cuales se unen al fagosoma
conformando un fagolisosoma, y
liberando enzimas hidrolíticas que
destruirán al antígeno.
27
EXCRECIÓN

En el proceso de digestión queda una vesícula que contiene

desechos, o el mismo antígeno (Dado que no siempre puede
ser desintegrado), por lo que esto debe estar fuera de la
célula para traer futuros inconvenientes. Entonces, la forma
de deshacerse de estos residuos es mediante la exocitosis (es
el proceso celular por el cual las vesículas situadas en el
citoplasma se fusionan con la membrana citoplasmática y
liberan su contenido. Esto sucede cuando llega una señal
extracelular).

28
WESTERN
BLOT

29
TÉCNICA

El Western blot, o inmunoblot, es una técnica analítica usada para

detectar proteínas específicas en una muestra determinada (una mezcla compleja de proteínas, como un
extracto tisular). Mediante una electroforesis en gel se separan las proteínas atendiendo al criterio que se
desee: peso molecular, estructura, hidrofobicidad, etc.
Usos: se buscan los anticuerpos anti-VIH en una muestra de suero humano. Se transfieren a una
membrana las proteínas de células que, se sabe, están infectadas por el VIH. ... En la práctica clínica,
el Western Blot se utiliza para diagnosticar enfermedades infecciosas, más frecuentemente famoso, el VIH.

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METODOLOGÍA

• Materiales Gel con proteínas cargadas y separadas previamente (ver abajo) Cámara de transferencia
semiseca para Western blot Papeles whatman No1 o 2 del tamaño del gel. NOTA: 6 papeles whatman
por cada gel Recipientes del tamaño del gel. NOTA: ahí se colocará el buffer de corrida, el metanol y se
pondrán a incubar con los anticuerpos. Se puede usar tubos de 50 mL Membrana de PVDF o
nitrocelulosa Bisturí o tijera Fuente de poder
• Muestra:  sangre o tejido.

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REACTIVOS
• Tris Base Glicina
• NaCl
• HCl
• Tween 20
• Albumina Bovina/leche descremada tipo Svelty
• Ácido acético
• Acetato de sodio
• Anticuerpos primarios y secundarios
http://www.medicalexpo.es/prod/azure-biosystems/product-108350-
• N,N-Dimetilformamida ≥98% 766053.html
• 3-Amino-9-etilcarbazol
• H2O2

32
 CARGA Y CORRIDA DEL GEL

• En el primer carril cargue el marcador de peso

molecular. NOTA: se usan preferentemente
marcadores preteñidos
• Cargue concentraciones entre 20-30 μg de proteína
total o de 10-100 ng de proteína purificada y llévelos a
volúmenes iguales y colóquelos en los pozos del gel
SDS-PAGE. Corra el gel durante 40 min – 1 hora a 150
V o 35mA. NOTA: El tiempo y corriente eléctrica
pueden requerir optimización.

33
TRANSFERENCIA SEMI-SECA DE LAS
PROTEÍNAS DEL GEL A LA MEMBRANA
• NOTA: Para este procedimiento se pueden utilizar membranas de
nitrocelulosa o PVDF.
• Después de correr el gel de poliacrilamida se deja el gel en buffer
WBTB 1X
• Se equilibran las membranas de PVDF colocandolas en metanol
durante 1 minuto y posteriormente se lavan con buffer WBTB 1X; si es
de nitrocelulosa se coloca en el buffer WBTB 1X.
• Se colocan 3 papeles whatman del tamaño de la membrana
empapados de buffer WBTB 1X.
• Posteriormente se coloca la membrana previamente equilibrada y
lavada Y enseguida se coloca el gel sobre la membrana y 3 papeles
whatman encima del gel. NOTA: se debe cerciorar de no dejar burbujas
que bloqueen la transferencia
• Se cierra cuidadosamente la cámara y se conecta a la fuente de poder.
• NOTA: El tiempo y el voltaje de la transferencia pueden requerir cierta https://www.youtube.com/watch?v=fK-qK6RCW9g
optimización.
• La transferencia de proteínas de la membrana se puede verificar
usando la tinción con Rojo Ponceau S antes del paso de bloqueo o
marcadores preteñidos.
34
• NOTA: se pude checar cuidadosamente la transferencia
separando el gel de los marcadores esto ayuda a observar si la
transferencia es completa.
• Terminando la transferencia se bloquea con Albumina bovina
sérica (BSA) al 5% o con leche descremada al 5% en TBST 1X por
10min en agitación.
• Se hacen 3 lavados con TBST 1X y se preparan los anticuerpos
según las recomendaciones del fabricante en TBST (1:10,000,
1:5000, etc.).
• NOTA: todos los anticuerpos requieren una estandarización
previa.
• Se puede dejar toda la noche en agitación a 4°C o a temperatura
ambiente 2 horas.

https://www.youtube.com/watch?
v=0D2Q2S_3x74
35
• Se retira el anticuerpo y se realizan 3 lavados con TBST
por 2 min Se prepara y coloca el anticuerpo secundario
con las características del fabricante y se deja en
agitación a temperatura ambiente 2 horas
• Se retira el anticuerpo y se realizan 3 lavados con TBST
por 2 min
• Dependiendo de la molécula con la que este acoplado el
anticuerpo secundario será el procedimiento a seguir.
• Si los anticuerpos están acoplados a HRP se pueden
realizar una reacción colorimétrica con Carbazol.
• Agregue en un tubo de 15mL, 2.25 mL de la disolución
Stock de Carbazol (ver tabla), y posteriormente agregue 6
mL de buffer de Acetatos (ver tabla abajo) y 15 µL de
H2O2
• Coloque la membrana en un recipiente y posteriormente
la mezcla de Carbazol y espere a que las bandas se tiñan
de un color Rojo carmesí (ver fotografía abajo). 36
 PARA PREPARA EL SÁNDWICH
DE PARA LA CORRIDA DE
WESTERN BLOT DEBE SER DE
LA SIGUIENTE MANERA:

• Western Blot Transfer Buffer: WBTB 10X 

37
• TBST 10X

38
39
RESULTADOS

40
41
42
43
INMUNOHISTOQUIMICA

• Fundamento
• La inmunohistoquímica es un método basado en las reacciones inmunoenzimáticas usando anticuerpos
mono o policlonales para detectar antígenos de células de tejidos. Hay muchos métodos de tinción
inmunoenzimática que pueden ser usados para localizar antígenos relevantes para el diagnóstico.

44
• Equipo:
• Benchmark Ultra: diagnostico del cáncer

• Benchmark GX: diagnostico del cáncer

45
46
UTILIDAD

• Diagnósticos y clasificación de tumores malignos

• Identificación de agentes infecciosos

• Clasificación de leucemias y linfomas

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COLORACIÓN NUCLEAR
• Se usa: Carmin, Safranina y hematoxilina.

• Eosina, Floxina y Cromotropo SR.

48
• Metodología:
• Directo: el anticuerpo específico contra la sustancia que se quiere detectar está marcado con partículas
detectables al microscopio (ej.fluorescenciao peroxidasa) .
• Indirecto: la señal del anticuerpo se amplía realizando sucesivas capas
de anticuerpos o marcadores (como son Peroxidasa/Anti-Peroxidasa (PAP), Complejo de Avidina Biotina
peroxidasa (ABC).

49
50
 Inmunofluorescencia

Técnica que se utiliza para la detección

de estructuras subcelulares que nos
permiten estudiarlas con la utilización
de anticuerpos acoplados a fluoróforos.

51
La inmunofluorescencia es un conjunto de
técnicas en donde se emplean anticuerpos para
detectar y localizar, antígenos específicos en
células y/o tejidos.

52
Pasos claves de una inmunofluorescencia

• Fijación
• Permeabilización
• Bloqueo
• Inmunodetección:
‐ Inmunofluorescencia directa
‐ Inmunofluorescencia indirecta

53
Fijación:

Preservar la localización, composición y estructura del material

biológico a
analizar manteniendo lo más fielmente posible a la situación que existe
in
vivo.
Existen distintos métodos de fijación de material biológico. Esto
dependerá de
distintos factores como: el tipo de microscopia a utilizar, la estructura
subcelular que se quiera detectar, entre otras.

54
Permeabilización:

Existen distintos métodos de permeabilización que son mas “suaves” o

mas
“fuertes”. Esto dependerá de la naturaleza del compuesto
permeabilizante a
utilizar. Produce poros en las membranas celulares. Lo que permite el
ingreso
de los anticuerpos a la célula si queremos detectar estructuras internas
de la
célula.

55
Bloqueo

• Su función es impedir interacciones inespecíficas de los anticuerpos

con el
material biológico a analizar y así reducir la marcación inespecífica.
• En general se utilizan soluciones protéicas concentradas
(Generalmente
Albúmina bovina sérica o gelatina de pescado).
• El anticuerpo primario debe competir con la proteína bloqueante
para unirse
a su epitope y así detectar la estructura de interés.
• Se reduce la unión inespecífica del anticuerpo por epitopes no
específico

56
Inmunodetección:

• Los anticuerpos son proteínas que tienen la capacidad

reconocer
específicamente y unirse con alta afinidad a otras moléculas
(antígenos).
• La molécula que es reconocida por los anticuerpos se
denomina
antígeno. Cada antígeno tiene al menos un epitope o región
reconocida por un anticuerpo.

57
INMUNODIFUSIÓ
N

• Es una técnica que se utiliza en el

laboratorio para la identificación y
cuantificación de cualquiera de las
inmunoglobulinas.
• Su base se encuentra en la presencia
de un precipitado visible, resultado
de la combinación antígeno-
anticuerpo en determinadas
circunstancias.

58
• Fundamento
Cuando un anticuerpo bivalente se pone en contacto con un antígeno polivalente soluble contra el cual es específico, se
forman complejos Antígeno-Anticuerpo que precipitan dando lugar a una reacción visible.
• Metodología:
Preparación del Agar al 3 %: la solución de Agar se preparó sobre la base de 3 gramos de Agar en polvo cada 100 ml
de PBS ( Buffer Fosfato Salino).Una vez preparado se lleva a disolver por agua hirviendo.
Equipo:
Placas de Petri

59
INMUNODIFUSIÓ
N SIMPLE
• En la mayoría de las técnicas se utiliza
agarosa, se prepara hirviendo los
gránulos en baño de agua.
• En los soportes de agarosa se coloca el
antígeno y el anticuerpo (se necesita
conocer uno para identificar el otro).
• Ambos van a todas direcciones y
cuando se encuentran presentan un
precipitado fácilmente observable.
• Esta técnica constituye la base común
de una variedad que permite realizar un
análisis cualitativo

60
INMUNODIFUSIÓN
RADIAL
• Técnica que cuantifica las
inmunoglobulinas G, M y A presentes
en la muestra biológica (suero)
• Se basa en la difusión de la muestra en
una matriz semisólida de agar en la
que se encuentra el anticuerpo
especifico.
• La muestra biológica se introduce en
los orificios excavados en el agar y a
medida que el antígeno difunde en
forma radial, se forma la relación
antigeno-anticuerpo que permite la
formación de precipitados visibles.

61
INMUNODIFUSIÓ
N DOBLE

• Anticuerpo y antígeno difunden en el

gel. Se hacen por patrones:

62
 COOMBS DIRECTO
• ¿Qué es?
• Técnica que ayuda en el diagnóstico de la anemia hemolítica en el recién nacido.
• Fundamento
• En los fenómenos de iso-inmunización corelacionados con antígenos eritrocitarios, los glóbulos
rojos presentan anticuerpos incompletos adheridos a su superficie , que por sus características
particulares, no son capaces de provocar la aglutinación en presencia de solución salina. Tales
anticuerpos son habitualmente IgG. El llamado suero de coombs es un suero procedente de
animales sensibilizados a globulina y por ello capaz de provocar aglutinación. Un anticuerpo
anti-globulina humana reúne a 2 anticuerpos antieritrocitarios para poder lograr la unicón de los
glóbulos rojos. La reacción carece de específidad Por consiguiente, la prueba resultara positiva
no puede saber cual anticuerpo o antígeno es el responsable. Por otra parte , algunos
incompletos no reaccionan de primera instancia con la anti-globulina humana. En este caso se ha
visto que es tratamiento previo de los eritrocitos con una enzima proteníca puede a veces lograr
que se produzca esa reacción. La enzima proteníca más usada en el laboratorio común es la
bromelina, se obtiene de la piña.
• Muestra
• Sangre total con EDTA 63
1. Poner 5 gotas de sangre en un tubo y llenarlo con solución
salina tibia.
• Material
2. Mezclar y centrifugar por 1 minuto a 1500 rpm • Tubos de ensaye
10x75 mm
3. Decantar el sobrante en forma completa • Pipetas lineales
• Centrífuga
4. Repetir el lavado 2 veces más • Microscopio

5. Agregar al botón de eritrocitos 2 gotas de suero anti-globulina

Correlación clínica
humana
Enfermedad
autoinmune
6. Dejar en reposo por 5 minutos
Resultados
7. Centrifugar por 1 minuto a 1500 rpm y buscar aglutinación a
Por la aglutinación
simple vista y con microscopio después de eritrocitos.
64
65
 COOMBS INDIRECTO
• En los fenómenos de iso-inmunización relacionados con antígenos eritrocitarios
los GR presentan anticuerpos incompletos adheridos a su superficie, que por sus
características particulares son capaces de provocar la aglutinación en presencia
de solución salina. Tales anticuerpos son habitualmente tipo G. En la prueba
indirecta se investiga la presencia de anticuerpos incompletos en el suero del
paciente y para esta prueba debe usarse eritrocitos Rh positivos los cuales
contienen el antígeno D para que se lleva a cabo la reacción.
• Esta prueba permite la titulación del anticuerpo debe señalar hasta que dilución
se observó la aglutinación con el objetivo de ahorrar reactivo puede agregarle el
suero de coombs solamente al #4, para evitar que pase desapercibido un
fenómeno de pro-zona , cuando el tubo #1 diera negativo. Si se obtiene
positividad se trabajarán los tubos necesarios para saber la titulación.
• En cuanto a los eritrocitos es obvio que deben tener el antígeno sospechoso.
Como se advirtió para la prueba de coombs directa, el resultado positivo es
inespecífico.

• Muestra: Suero del paciente

• Resultado: Por aglutinación 66
1. Colocar 10 tubos enumerados del 1-9 y un testigo en una gradilla
2. Agregar a cada tubo 0.5 ml de solución salina
3. Agregar a cada tubo 0.5 ml de suero problema
4. Agregar a cada tubo, incluyendo el testigo 0.5 ml de la suspensión de eritrocitos al 2%
5. Incubar 1 hr a 37 *C
6. Centrifugar por 1 min a 1500 rpm
7. Examine los tubos contra una fuente luminosa mientras se golpea suavemente el fondo para que se desprendan los
eritrocitos
8. Observar aglutinación macroscópica
9. Separar los tubos que no aglutinen y lavar 3 veces los eritrocitos de esos tubos en solución salina tibia
10. Después del último lavado decante el líquido sobrenadante y añadir 2 gotas del suero de coombs
11. Golpear suavemente el fondo para resuspender
12. Dejar reposar por 5 minutos
13. Centrifugar por 1 min a 1500 rpm y buscar aglutinación a simple vista

67
68
Bibliografia
http://www.iib.unsam.edu.ar/archivos/docencia
/licenciatura/biotecnologia/2017/BioCel/150412
4326.pdf
Bibliografías:
http://lafagocitosis.blogspot.com/2010/04/fago
citosis.html

http://biblioteca.universia.net/html_bura/ficha/
params/id/6730259.html
• https://es.scribd.com/document/55210165/INMUNODIFUSION
• https://es.slideshare.net/JeluyJimenez/inmunodifusin
• http://webs.ucm.es/info/saniani/troncales/inmunologia/documentostemas/Tema%2013.pdf
• https://www.roche.es/es_es/Diagnostics/Productos/Diagnostico_de_laboratorio/anatomia_patologica/i
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• https://campus.usal.es/~histologia/histotec/especial/espe18/espe18.htm
 RADIOINMUNOENSAYO:
HTTP://WWW.EHU.EUS/BIOMOLECULAS/ISOTOPOS/RIA.HTM
HTTPS://ES.WIKIPEDIA.ORG/WIKI/RADIOINMUNOENSAYO
FIJACION DE COMPLEMENTO:
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