Fluorescencia

Véase también: fosforescencia

La fluorescencia es un tipo particular de luminiscencia que
caracteriza a las sustancias que son capaces de absorber
energía en forma de radiaciones electromagnéticas y luego
emitir parte de esa energía en forma de radiación
electromagnética de longitud de onda diferente.1 ​

La energía total emitida en forma de luz es siempre menor a la

energía total absorbida y la diferencia entre ambas es disipada
en forma de calor. En la mayoría de los casos la longitud de Colección de 47 minerales iluminados con
onda emitida es mayor -y por lo tanto de menor energía- que la luz ultravioleta, que emiten luz visible de
absorbida, sin embargo, si la radiación de excitación es intensa, diversos colores mediante el proceso de
es posible para un electrón absorber dos fotones; en esta fluorescencia.
absorción bifotónica, la longitud de onda emitida es más corta
que la absorbida, sin embargo en ambos casos la energía total
emitida es menor que la energía total absorbida.

En general las sustancias fluorescentes absorben energía en

forma de radiación electromagnética de onda corta (p. ej.
radiación gamma, rayos x, UV, luz azul, etc.), y luego la
emiten nuevamente a una longitud de onda más larga, por
ejemplo dentro del espectro visible; los ejemplos más notables
de fluorescencia ocurren cuando la luz absorbida se encuentra
dentro del rango ultravioleta del espectro -invisible al ojo
humano- y la luz emitida se encuentra en la región visible.

El mecanismo de fluorescencia típico implica tres pasos

secuenciales, llamados respectivamente absorción (1),
disipación no radiativa (2) y emisión (3).

El ciclo completo es muy breve, transcurre en tiempos del

orden de los nanosegundos, por lo que puede considerarse
prácticamente instantáneo. Es este tiempo tan corto lo que
diferencia a la fluorescencia de otro conocido fenómeno
luminoso, la fosforescencia. El mecanismo de fluorescencia
también se encuentra muy relacionado con el proceso de
Peces marinos fluorescentes
quimioluminiscencia.

Las sustancias que son capaces de emitir luz al ser excitadas por diferentes tipos de radiación se denominan
fluoróforos. Es posible obtener una amplia variedad de colores por fluorescencia, dependiendo de la
longitud de onda que emita el compuesto fluorescente.
El fenómeno de fluorescencia posee numerosas aplicaciones prácticas, entre las que se encuentran por
ejemplo análisis en mineralogía, gemología, sensores químicos (espectroscopia fluorescente), pigmentos y
tintas, detectores biológicos y lámparas fluorescentes.

Historia
Una temprana observación de
la fluorescencia fue descrita en
1560 por Bernardino de
Sahagún y en 1565 por
Nicolás Monardes en la
infusión conocida como
lignum nephriticum (del latín,
"madera renal"). Fue derivado
de la madera de dos especies
Matlalina, la sustancia fluorescente de árboles, Pterocarpus indicus
en la madera del árbol Eysenhardtia y Eysenhardtia polystachya.2 ​
polystachya. 34​ 5​ ​ El compuesto químico
responsable de esta
fluorescencia es la matlalina,
que es el producto de oxidación de uno de los flavonoides que se
encuentran en esa madera.2 ​ Copa de Lignum nephriticum
hecha de la madera del árbol de
En 1819, Edward D. Clarke6 ​ y en 1822 René Just Haüy7 ​ narra (Pterocarpus indicus), y un
describieron fluorescencia en las fluoritas, en 1833 sir David Brewster frasco que contiene sus
soluciones fluorescentes.
describió el fenómeno en la clorofila8 ​ y en 1845 sir John Herschel
hizo lo mismo con la quinina.9 ​

En un artículo de 1852 sobre la "refrangibilidad " (cambio de longitud de onda) de la luz, George Gabriel
Stokes describió la facultad del fluorspar y del cristal de uranio para cambiar la luz invisible más allá del
extremo violeta del espectro visible en luz azul. Llamó a este fenómeno fluorescencia (fluorescence): «Casi
me inclino a acuñar una palabra, y llamo la apariencia fluorescencia, de fluor-spar [es decir, la fluorita],
como el término análogo opalescencia se deriva del nombre de un mineral».10 ​ El nombre fue derivado del
mineral fluorita (difluoruro de calcio), que en algunas muestras tiene rastros de europio bivalente, que sirve
como activador fluorescente emitiendo luz azul. En un experimento clave utilizó un prisma para aislar la
radiación ultravioleta de la luz solar y observó la luz azul emitida por una solución de etanol de quinina
expuesto por ella.11 ​

Mecanismo

Consideraciones previas
Para entender el mecanismo subyacente al proceso de fluorescencia es necesario primero repasar el
concepto de orbital atómico y de orbital molecular.
Los electrones en un átomo se organizan ocupando diferentes orbitales, esto es, regiones en el espacio en
torno al núcleo donde existe una cierta probabilidad de encontrarlos. Existen orbitales de baja energía y
orbitales de alta energía. Los electrones prefieren ocupar primero, y siempre que sea posible, los orbitales de
menor energía que se encuentren desocupados. Sin embargo esto no significa que no puedan ocupar
transitoriamente orbitales de mayor energía.

Transiciones electrónicas
Para mover un electrón de un orbital de baja energía a un orbital de mayor energía es necesario cubrir esa
diferencia de energía con un aporte externo (es casi como llevar un cuerpo de un lugar bajo a un lugar con
cierta altura, con la diferencia de que a escala atómica la diferencia de energía entre orbitales se encuentra
cuantizada). Para cada tipo de átomo la diferencia de energía entre dos orbitales dados es constante y los
electrones se pueden mover entre esos orbitales únicamente ganando o perdiendo esa cantidad fija de
energía. Este proceso se conoce como transición electrónica. En el caso de tratarse de átomos únicos esto
provoca que cada tipo de átomo posea líneas de absorción y líneas de emisión muy características, es decir
que sea capaz de absorber o emitir energía en forma de cuantos de luz a determinadas longitudes de onda
correspondientes a cada uno de los procesos de salto de los electrones entre orbitales de diferente energía.
En el caso de átomos únicos las líneas espectrales son muy precisas y definidas porque las transiciones entre
diferentes orbitales poseen diferencias de energía muy marcadas y precisas.

Espectros moleculares
Cuando los átomos se combinan para formar moléculas, sus orbitales atómicos desaparecen, combinándose
para formar orbitales moleculares. Los electrones ahora pueden ocupar regiones de probabilidad en torno a
varios núcleos. La combinación de orbitales atómicos se produce en forma lineal, esto significa por ejemplo
que si se combinan dos átomos, cada uno de los cuales posee cuatro orbitales atómicos, la molécula poseerá
como resultado ocho orbitales moleculares. Estos orbitales moleculares poseerán energías intermedias a las
de los orbitales atómicos que se combinaron para formarlos. La situación se va tornando más compleja
cuantos más átomos posea una molécula. Como consecuencia moléculas relativamente simples poseen un
número muy elevado de orbitales moleculares entre los cuales se pueden producir transiciones electrónicas.
Es por eso que las moléculas poseen bandas de emisión y absorción y no líneas. Estas bandas se encuentran
formadas por la superposición de una gran cantidad de líneas correspondientes a cada una de las
transiciones posibles entre diferentes orbitales dentro de la molécula. Y para complicar aún más la situación,
hay que considerar que las moléculas no son rígidas, sino que se trata de estructuras dinámicas que están
sometidas a deformaciones estructurales, debidas por ejemplo a vibraciones térmicas o a rotaciones de
determinadas partes de la molécula. Cuando se altera la forma de una molécula, también se altera la forma
de los orbitales moleculares que la forman y como consecuencia se altera la energía de los mismos. Las
deformaciones estructurales provocan ligeras diferencias entre las energías de diferentes orbitales que hacen
que se modifiquen las energías de transición electrónica entre ellas. Finalmente cabe considerar que en una
molécula en estado basal, muchos de los electrones se encuentran en estado singlete, es decir, se encuentran
complementados por otro electrón dentro del mismo orbital con un espín antiparalelo. Una transición
electrónica típica, implica que un electrón en estado singlete, salta a un orbital de mayor energía adquiriendo
un estado doblete donde su espín no se encuentra complementado por otro antiparalelo. Pero pueden ocurrir
otro tipo de transiciones, en la cual dos electrones en estado doblete, pueden ser promovidos a dos orbitales
degenerados (de igual energía) adquiriendo un estado triplete en el cual sus espines son paralelos. Las
transiciones de espín, también pueden absorber y emitir energía en forma de luz.

Mecanismo básico y diagrama de Jablonski

Un diagrama de Jablonski es básicamente una representación simplificada de los niveles electrónicos
(orbitales) de una molécula y de las posibles transiciones electrónicas que se pueden dar entre estos niveles.
En un diagrama de Jablonski se agrupan verticalmente los estados electrónicos de acuerdo a su energía y
horizontalmente de acuerdo a su multiplicidad de espín. Las transiciones radiativas se representan con líneas
rectas y las no radiativas con líneas onduladas. A continuación se presenta un diagrama de Jablonski
modificado para representar una molécula hipotética que posee un nivel electrónico basal (S0) dos niveles
electrónicos de alta energía (S1 y S2) y un nivel de dos orbitales degenerados con espines paralelos (triplete
T1) cada uno de estos niveles con varios subniveles vibracionales debidos a las deformaciones térmicas de
la molécula (Vb). En el eje vertical se ubica la energía relativa de cada nivel electrónico, y en el eje
horizontal hemos considerado al tiempo y no a la multiplicidad de espín. Las flechas verticales representan
absorciones y emisiones de energía en forma de fotones y las flechas diagonales implican disipación de
energía por medios no radiativos (en forma de calor).

La situación aquí representada comienza

por la promoción de un electrón que se
encontraba en estado basal S0 a un nivel
electrónico de alta energía S2 en un estado
vibracional alto (la línea Vb más alta de
todas). Esta promoción se produce cuando
la molécula absorbe energía, en general en
forma de un cuanto de luz (fotón). Este
electrón en un estado electrónico excitado
vibracionalmente alto puede ceder parte de
su energía en forma de vibraciones que se
transmiten al resto de la molécula (flecha
amarilla diagonal rotulada como NR). Esta
energía aumenta la amplitud de las vibraciones de la molécula, energía que es finalmente disipada cuando la
molécula choca con otras moléculas cediéndola en forma de calor.

El electrón puede ir cayendo como en una escalera entre diferentes estados vibracionales cediendo en cada
escalón parte de su energía en forma de calor, que aumenta las vibraciones de la molécula. También puede
hacerlo cediendo toda su energía de golpe, cayendo a un nivel inferior y emitiendo gran parte de la energía
en forma de un único cuanto de luz (situación representada por la primera flecha verde vertical).

Aunque en teoría sería posible que el electrón cayera desde el estado vibracional alto al estado basal S0, en
la práctica esto no ocurre, pues la molécula rápidamente transfiere parte de la energía absorbida a otros
orbitales por medio de un mecanismo de reconversión energética interna, un proceso que ocurre usualmente
en tiempos muy cortos del orden de 10-15 segundos, por lo que resulta virtualmente imposible para el
electrón ceder nuevamente el total de la energía que recibió y como consecuencia la luz emitida es siempre
de menor energía y mayor longitud de onda que la recibida. A medida que el tiempo se prolonga, mayor es
la cantidad de energía que se pierde por procesos no radiativos y mayor es la longitud de onda de la luz
emitida. Eventualmente todos los electrones en estados excitados caen hasta el estado basal ya sea
emitiendo luz (FE) o perdiendo energía por procesos no radiativos (NR) estos procesos se producen en la
fluorescencia en tiempos de hasta 10-9 segundos.

En algunas moléculas sin embargo, existen orbitales degenerados con energías muy similares a las de los
niveles excitados. En estas moléculas puede ocurrir que un electrón con alta energía ceda parte de su
energía a un electrón en estado basal para formar dos electrones desapareados en dos orbitales degenerados
(estado triplete) de energía intermedia. El estado triplete es metaestable y puede existir por tiempos
enormemente largos si se lo compara con las transiciones entre estados dobletes; en el primer caso los
tiempos de decaimiento usualmente van desde las centésimas de segundo hasta las horas. Cuando los
electrones en estado triplete aparean sus espines ceden esa energía de apareamiento en forma de luz,
produciendo el fenómeno de fosforescencia.

La relajación de un estado S1 también puede ocurrir a través de una interacción con una segunda molécula
mediante lo que se conoce como desactivación (quenching fluorescente) de la fluorescencia, en este caso la
molécula excitada cede su energía a otra y esta última la disipa en forma de calor. El oxígeno molecular
(O2), por ejemplo, es muy eficiente desactivando la fluorescencia de otras moléculas debido a su inusual
estado triplete fundamental.

Finalmente algunas moléculas que se excitan a través de la absorción de luz o por medio de un proceso
diferente (P. ej. a causa de una reacción química) pueden transferir esta energía a una segunda molécula
‘sensibilizada’ por un mecanismo de paso intersistema entre moléculas. A través de este mecanismo la
segunda molécula es conducida a un estado de excitación electrónica y es finalmente esta última la que va a
emitir fluorescencia. En estos casos las diferencias de energía entre la radiación excitadora y la emitida son
excepcionalmente grandes. Este mecanismo se utiliza por ejemplo en los contadores de centelleo líquidos
para producir luz visible a partir de radiaciones nucleares de alta energía.

Ecuaciones

Fotoquímica
En resumen la fluorescencia ocurre cuando una molécula, átomo o nanoestructura vuelve a su estado
fundamental después de haber sido excitada electrónicamente.

Excitación:

Fluorescencia (emisión) :

Aquí, es un término genérico para la energía del fotón con h = constante de Planck y donde =
frecuencia de la luz. (Las frecuencias específicas de la luz excitadora y emitida son dependientes en cada
sistema en particular.)
El estado S0 se llama estado fundamental de la molécula fluorescente y S1 es su primer estado electrónico
excitado.

Además de estos estados electrónicos, que corresponden a la ubicación de los electrones de enlace de la
molécula en diferentes orbitales moleculares, existen diferentes estados vibracionales para estos orbitales
moleculares, estos estados vibracionales corresponden a las oscilaciones que experimentan los átomos que
forman la molécula en torno a los enlaces.

Los estados vibracionales altos pueden disipar energía en forma de calor, aumentando las vibraciones de las
moléculas vecinas.

Una molécula en estado de excitación electrónica, S1, puede adquirir un estado de menor energía por
diferentes mecanismos. Puede por ejemplo sufrir un 'decaimiento no radiativo' en el cual la mayor parte de
la energía de excitación es disipada como calor (vibraciones) hacia el disolvente. Las moléculas orgánicas
excitadas también pueden relajarse mediante conversión a un estado triplete entregando energía a otro
orbital molecular para obtener al final dos orbitales con energías intermedias, finalmente alguno de estos
orbitales se relaja emitiendo un cuanto de luz, por fosforescencia o mediante un segundo paso no radiativo
de decaimiento.

Rendimiento cuántico
El rendimiento cuántico de un proceso de fluorescencia es una manera de interpretar la eficacia del
mecanismo.12 ​(Véase eficiencia cuántica)

Se define como la proporción entre el número de fotones emitidos y el de fotones absorbidos.

é
é

El máximo rendimiento cuántico de fluorescencia es por lo tanto 1 (100%); esto significa que cada fotón
absorbido resulta en un fotón emitido. Sin embargo compuestos con rendimientos cuánticos de 0,10 se
consideran aún bastante fluorescentes.

Otra forma de definir el rendimiento cuántico de un mecanismo de fluorescencia es mediante las tasas a las
cuales decae el estado de excitación:

donde es la tasa de emisión espontánea de radiación y es la suma de todas las tasas de

decaimiento.

Otras tasas de decaimiento del estado de excitación se deben a mecanismos diferentes a la emisión de
fotones y con frecuencia se llaman, por lo tanto, “tasas no-radiativas”.
Entre estas últimas podemos incluir: desactivación por colisión dinámica, interacción de campo cercano
dipolo-dipolo (o transferencia de energía de resonancia), conversión interna y paso de intersistema. Por lo
tanto, si la tasa de decaimiento de cualquier vía cambia, esto afecta tanto al tiempo de vida del estado
excitado, como al rendimiento cuántico de la fluorescencia.

El rendimiento cuántico de fluorescencia se mide comparándolo con un patrón; la sal sulfato de quinina
disuelta en ácido sulfúrico es un patrón común para la medición de fluorescencia.

Tiempo de vida
El tiempo de vida de la fluorescencia depende básicamente del tiempo promedio que permanece la molécula
en su estado de excitación antes de emitir un fotón.

La fluorescencia típicamente sigue una cinética de primer orden:

donde es la concentración de moléculas en estado de excitación en el tiempo , es la

concentración inicial y es la tasa de decaimiento o el inverso del tiempo de vida de la fluorescencia.

Este es un ejemplo de decaimiento exponencial. Varios procesos radiativos y no radiativos pueden

despoblar el estado excitado. En ese caso, la tasa de decaimiento total es la suma de todas las tasas:

donde es la tasa de decaimiento global, es la tasa de decaimiento radiativo y la tasa de

decaimiento no radiativo.

La ecuación es muy similar a una reacción química de primer orden en la cual la tasa constante de primer
orden es la suma de todas las tasas (un modelo cinético paralelo). Si la tasa de emisión espontánea, o
cualquiera de las otras tasas, son rápidas el tiempo de vida es corto.

Para compuestos fluorescentes que emitan fotones con energías desde el UV hasta el infrarrojo cercano, los
tiempos típicos de decaimiento del estado excitado se encuentran entre 0.5 a 20 nanosegundos. El tiempo de
vida de un fluoróforo es un parámetro importante para las aplicaciones prácticas de la fluorescencia tales
como la transferencia de energía de resonancia.

Reglas
Existen algunas reglas para predecir los comportamientos de la fluorescencia. La Regla de Kasha, por
ejemplo, dicta que el rendimiento cuántico de luminiscencia es independiente de la longitud de onda de la
radiación.

Esto no es siempre cierto y se contradice a menudo en muchas moléculas simples. Una declaración un tanto
más confiable, aunque aún con excepciones, podría ser que el espectro de fluorescencia muestra muy poca
dependencia con la longitud de onda de la radiación.
El diagrama de Jablonski describe la mayor parte del mecanismo de relajación para las moléculas en estado
excitado.

Aplicaciones
Existen muchos compuestos naturales y sintéticos que exhiben fluorescencia, y tienen un sinnúmero de
aplicaciones prácticas, desde la simple decoración fluorescente hasta aplicaciones en química analítica tales
como FPIA. En la naturaleza hay múltiples ejemplos de organismos que utilizan la fluorescencia y en
especial la quimioluminiscencia para atraer alimento o pareja, o bien para espantar a los depredadores.

Iluminación
El común tubo fluorescente depende de la fluorescencia.
Dentro del tubo de vidrio hay un vacío parcial y una pequeña
cantidad de mercurio. Una descarga eléctrica en el tubo causa
que los átomos de mercurio emitan luz. La luz emitida se
encuentra en el rango ultravioleta (UV), y es por lo tanto
invisible para nuestros ojos; pero el tubo se encuentra revestido
con una capa de un material fluorescente llamado fósforo, el
cual absorbe la luz ultravioleta y la reemite en el espectro
visible. La iluminación fluorescente es energéticamente mucho
más eficiente que la tecnología incandescente, pero el espectro Pintura y plástico fluorescentes
producido puede hacer que ciertos colores no parezcan iluminados por luz Ultravioleta. (artista:
naturales, esto es así porque el espectro de emisión no es Beo Beyond).
continuo, sino que se encuentra formado por un limitado
número de longitudes de onda (líneas de emisión).

El LED de luz blanca, este tipo de LED funciona a través de un proceso similar[cita requerida]. Típicamente,
en estos dispositivos el semiconductor emisor produce luz en la parte azul del espectro, la cual choca con un
compuesto fluorescente depositado en el chip; y este fluorescente emite en la región verde y roja del
espectro. La combinación de la luz azul que pasa a través del fluorescente y la luz emitida por el mismo
produce una luz casi blanca.[cita requerida]

La Lámpara fluorescente compacta (CFL) funciona de la misma forma que cualquier tubo fluorescente
típica y con ventajas. Es utilizada para reemplazar lámparas incandescentes en muchas aplicaciones.
Producen un cuarto del calor por lumen emitido que los bombillos incandescentes y duran hasta cinco veces
más. Estas lámparas contienen mercurio y deben ser manejadas y dispuestas con cuidado. Las desventajas
de que estas lámparas tengan un balastro es que no encajan adecuadamente en todos los aparatos de luz.
Todas las lámparas fluorescentes tienen un retraso significativo al momento de ser encendidas comparadas
con las lámparas incandescentes, una desventaja en algunas aplicaciones. Adicionalmente, la tecnología que
les permite ser usadas también reduce significativamente su vida útil y su fiabilidad en aplicaciones de luz
crepuscular, por ejemplo al utilizarlas con los famosos atenuadores o dimmers.

Química analítica
La fluorescencia puede ser detectada con un monocromador para encontrar emisiones típicas de compuestos
presentes en una cromatografía líquida de alta eficacia. Además, permite visualizar las manchas producidas
por una TLC si los compuestos o los reactivos de reveladores son fluorescentes.

La fluorescencia es más efectiva cuando hay una gran proporción de átomos en los niveles bajos de energía
en una distribución de Boltzmann. Existe entonces una mayor probabilidad que los átomos con energía baja
sean excitados y liberen a su vez fotones, permitiendo así un análisis más eficiente.

Las huellas dactilares pueden visualizarse con compuestos fluorescentes como la ninhidrina.

Véanse también: Fluorímetro y Espectrofluorimetría.

Bioquímica y medicina
Las biomoléculas pueden marcarse con un grupo químico fluorescente (fluorocromo) mediante una
reacción química simple, lo cual permite una detección sensible y cuantitativa de la molécula. Algunos
ejemplos:

La microscopía de fluorescencia de tejidos, células o estructuras subcelulares se consigue

marcando el anticuerpo con un fluorocromo y permitiendo que aquel encuentre su antígeno
correspondiente presente en la muestra. Al marcar varios anticuerpos con diferentes
fluorocromos se puede lograr la visualización de múltiples objetivos dentro de una misma
imagen.
Secuenciación automática de ADN por el método de terminación de la cadena: cada uno de
los cuatro ddNTP se encuentra marcado con un fluorocromo específico, de tal forma que se
generan cadenas de diferente longitud que al ser sometidas a una fuente de UV se puede
determinar la base nitrogenada terminal de cada cadena debido a la longitud de onda
emitida característica de cada fluorocromo.
Detección de ADN: el compuesto bromuro de etidio, libre
de cambiar su conformación en disolución, tiene poca
fluorescencia. La fluorescencia del bromuro de etidio se
aumenta enormemente cuando se une al ADN, de tal
forma que este compuesto es muy útil para visualizar la
localización de fragmentos de ADN en el método de
electroforesis en geles de agarosa. El bromuro de etidio
puede ser tóxico, por tanto una alternativa más segura
es teñir con SYBR Green.
Microarreglos
Inmunología: los sitios de unión de un anticuerpo a un Electroforesis en gel de agarosa
espécimen microscópico por ejemplo, pueden ser vistos, teñido con bromuro de etidio. El
e incluso cuantificados, empleando la fluorescencia si se bromuro de etidio se intercala en el
le ha unido previamente un grupo químico fluorescente
ADN y fluoresce naranja cuando se
al anticuerpo específico (IFI).
expone a luz UV.
La fluorescencia ha sido empleada para el estudio de la
estructura y conformación del ADN, así mismo como de
proteínas, con técnicas como la transferencia de energía de resonancia, la cual mide
distancias a nivel de angstroms. Lo anterior es especialmente importante en complejos de
biomoléculas múltiples.
Es utilizada en Citometría de flujo para identificar diferentes receptores en las células
estudiadas, marcando estas células con anticuerpos específicos conjugados a un
fluorescente.
 La Proteína Verde Fluorescente (GFP), de la medusa Aequorea victoria, se ha convertido en
una herramienta de investigación muy importante. GFP y otras proteínas relacionadas son
usadas como reporteros de un sinnúmero de eventos biológicos incluyendo aquellos de
localización subcelular. Los niveles de expresión génica son medidos en algunas
ocasiones uniendo el gen de producción de GFP con el gen de interés.
También, diversas moléculas biológicas tienen fluorescencia intrínseca y por tanto, pueden ser empleadas
sin necesidad de unirlas a una etiqueta química. Algunas veces, esta fluorescencia intrínseca cambia cuando
la molécula se encuentra en un ambiente específico, de tal forma que la distribución o el ligamiento de la
molécula pueden ser medidos. La bilirrubina, por ejemplo, es altamente fluorescente cuando se une a la
albúmina sérica en un sitio específico. La protoporfirina zinc, la cual se encuentra en las células sanguíneas
cuando la producción del grupo hemo es inhibido por la existencia de plomo o la ausencia de hierro en la
sangre, tiene una fuerte fluorescencia y puede ser, por tanto, empleada para detectar estos problemas.

El número de aplicaciones de la fluorescencia ha ido creciendo en el campo de la

biomedicina, la biología y en otras ciencias relacionadas. Los métodos de análisis en
estos campos también han ido aumentando: FPIA, FLIM, FLI, FLIP, CALI, FLIE,
FRET, FRAP, FCS, PFRAP, smFRET, FRIPS, SHRIMP o TIRF. Muchas de estas
técnicas se basan en los microscopios de fluorescencia. Los microscopios utilizan
fuentes de luz de alta intensidad, usualmente lámparas de mercurio o xenón, LED’s,
o láseres, para generar fluorescencia en las muestras bajo observación.
Pez transgénico
Posteriormente, los filtros ópticos separan la luz excitada de la fluorescencia
fluorescente
emitida, para permitir que sea detectada a simple vista, empleando una cámara o
utilizando algún otro detector de luz como espectrógrafos, etc. Muchas
investigaciones se están llevando a cabo para mejorar ya sea el desempeño de estos microscopios, las
sondas fluorescentes usadas, y las aplicaciones de las mismas. De interés particular son los microscopios
confocales, los cuales utilizan un poro para lograr secciones ópticas, proporcionando una vista cuantitativa y
en 3D de la muestra.

Gemología, mineralogía, geología y ciencias

forenses
Las gemas, los minerales, las fibras y muchos otros materiales que
pueden ser encontrados en medicina forense, pueden tener una
fluorescencia distintiva o pueden fluorecer diferente bajo luz
ultravioleta de onda corta, de onda larga, o rayos X: Muchos tipos
de calcita y ámbar presentarán fluorescencia bajo luz ultravioleta de Ópalo procedente del Cerro
onda corta. Los rubíes, las esmeraldas y el diamante Hope exhiben Batallones, Torrejón de Velasco
fluorescencia roja bajo luz UV de onda corta; los diamantes (Madrid), España. El elemento
también emiten luz bajo rayos X. responsable de la fluorescencia es el
uranio.
El petróleo emite fluorescencia en un rango de colores, desde el marrón mate para aceites pesados y
alquitrán hasta el amarillento y blanco azulado para los aceites muy livianos y condensados. Este fenómeno
es usado en perforaciones hechas para la exploración de petróleo permitiendo identificar pequeñas
cantidades de crudo en las perforaciones y en los poros de las muestras.

Líquidos orgánicos
Los líquidos orgánicos, como las mezclas de antraceno en benceno o tolueno, emiten fluorescencia bajo la
acción de radiación UV o rayos gamma. Los tiempos de decaimiento de esta fluorescencia se encuentran en
el orden de los nanosegundos ya que la duración de la luz depende del tiempo de vida de los estados
excitados del material fluorescente, en este caso antraceno.

Véase también
Lámpara fluorescente
Luz negra
Espectroscopía fluorescente
Fosforescencia
Fluorescencia de rayos X

Referencias
1. Principles Of Instrumental Analysis F. James Holler, Douglas A. Skoog & Stanley R. Crouch
2006
2. Acuña, A. Ulises; Amat-Guerri, Francisco; Morcillo, Purificación; Liras, Marta; Rodríguez,
Benjamín (2009). "Structure and Formation of the Fluorescent Compound of Lignum
nephriticum". Organic Letters 11 (14): 3020–3023. doi:10.1021/ol901022g. PMID 19586062.
Available on-line at: Chinese Academy of Science Available on-line at: Chinese Academy of
Science (http://202.127.145.151/siocl/siocl_0001/HHJdatabank/090707ol-6.pdf) Archivado (h
ttps://web.archive.org/web/20130728224629/http://202.127.145.151/siocl/siocl_0001/HHJdat
abank/090707ol-6.pdf) el 28 de julio de 2013 en Wayback Machine..
3. Safford, William Edwin (1916). «Lignum nephriticum» (http://archive.org/download/annualrep
ortofbo1915smitfo/annualreportofbo1915smitfo.pdf). Annual report of the Board of Regents of
the Smithsonian Institution. Washington: Government Printing Office. pp. 271-298.
4. Valeur, B.; Berberan-Santos, M. R. N. (2011). "A Brief History of Fluorescence and
Phosphorescence before the Emergence of Quantum Theory". Journal of Chemical
Education 88 (6): 731
5. «The Fluorescence of Lignum nephriticum: A Flash Back to the Past and a Simple
Demonstration of Natural Substance Fluorescence» (http://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/ed0
83p765).
6. Edward Daniel Clarke (1819) "Account of a newly discovered variety of green fluor spar, of
very uncommon beauty, and with remarkable properties of colour and phosphorescence," (htt
p://books.google.com/books?id=KWc7AQAAIAAJ&pg=PA34#v=onepage&q&f=false) The
Annals of Philosophy, 14 : 34 - 36; from page 35: "The finer crystals are perfectly transparent.
Their colour by transmitted light is an intense emerald green; but by reflected light, the colour
is a deep sapphire blue; … ".
7. Haüy merely repeats Clarke's observation regarding the colors of the specimen of fluorite
which he (Clarke) had examined: Haüy, Traité de Minéralogie, 2nd ed. (Paris, France:
Bachelier and Huzard, 1822), vol. 1, page 512. Fluorite is called "chaux fluatée" by Haüy.
From page 512 (http://books.google.com/books?id=MvcTAAAAQAAJ&pg=PA512#v=onepag
 e&q&f=false): "... violette par réflection, et verdâtre par transparence au Derbyshire." ([the
color of fluorite is] violet by reflection, and greenish by transmission in [specimens from]
Derbyshire.)
8. David Brewster (1834) "On the colours of natural bodies," (http://books.google.com/books?id
=I_UQAAAAIAAJ&pg=PA538#v=onepage&q&f=false) Transactions of the Royal Society of
Edinburgh 12 : 538-545; on page 542, Brewster mentions that when white light passes
through an alcoholic solution of chlorophyll, red light is reflected from it.
9. Véase:
* Herschel, John (1845a) "On a case of superficial colour presented by a homogeneous
liquid internally colourless," (http://books.google.com/books?id=GmwOAAAAIAAJ&pg=PA14
3#v=onepage&q&f=false) Philosophical Transactions of the Royal Society of London, 135 :
143-145; see page 145.
* Herschel, John (1845b) "On the epipŏlic dispersion of light, being a supplement to a paper
entitled, "On a case of superficial colour presented by a homogeneous liquid internally
colourless" ," (http://books.google.com/books?id=GmwOAAAAIAAJ&pg=PA147#v=onepage
&q&f=false) Philosophical Transactions of the Royal Society of London, 135 : 147-153.
10. "I am almost inclined to coin a word, and call the appearance fluorescence, from fluor-spar
[i.e., fluorite], as the analogous term opalescence is derived from the name of a mineral."
Stokes, G. G. (1852). «On the Change of Refrangibility of Light» (http://books.google.com/bo
oks?id=CE9FAAAAcAAJ&pg=PA463#v=onepage&q&f=false). Philosophical Transactions of
the Royal Society of London 142: 463-562. doi:10.1098/rstl.1852.0022 (https://dx.doi.org/10.1098%2Frs
tl.1852.0022). From page 479, footnote: "I am almost inclined to coin a word, and call the
appearance fluorescence, from fluor-spar, as the analogous term opalescence is derived
from the name of a mineral."
11. Stokes (1852), pages 472-473. In a footnote on page 473, Stokes acknowledges that in
1843, Edmond Becquerel had observed that quinine acid sulfate strongly absorbs ultraviolet
radiation (i.e., solar radiation beyond Fraunhofer's H band in the solar spectrum). See:
Edmond Becquerel (1843) "Des effets produits sur les corps par les rayons solaires" (http://g
allica.bnf.fr/ark:/12148/bpt6k2976b/f894.image) (On the effects produced on substances by
solar rays), Comptes rendus, 17 : 882-884; on page 883, Becquerel cites quinine acid sulfate
("sulfate acide de quinine") as strongly absorbing ultraviolet light.
12. Skoog, Douglas A. (2001). «15». Principios de análisis instrumental (5ta edición). España:
Mc Graw Hill. p. 387.

Enlaces externos
Introducción a la fluorescencia (http://www.invitrogen.com/site/us/en/home/References/Mole
cular-Probes-The-Handbook/Introduction-to-Fluorescence-Techniques.html#head1) (en
inglés).
The database of fluorescent dyes. (http://www.fluorophores.org)
Principios de base de la espectroscopia de fluorescencia. (https://web.archive.org/web/2009
0202152315/http://www.jobinyvon.es/Fluorescence/Slideshows)
Fluorescence Applications. (http://www.pti-nj.com/Applications.html) Archivado (https://web.a
rchive.org/web/20170727122045/http://www.pti-nj.com/Applications.html) el 27 de julio de
2017 en Wayback Machine.
http://jobinyvon.com/SiteResources/Data/Templates/1divisional.asp?
DocID=514&v1ID=&lang=
Interactive Fluorescence Dye and Filter Database. (https://www.micro-shop.zeiss.com/?s=25
25647761b33&l=en&p=us&f=f)
ISS Fluorescence Lifetime Standards Tables. (http://www.iss.com/resources/lifetime.html)
Archivado (https://web.archive.org/web/20100728010648/http://www.iss.com/resources/lifeti
me.html) el 28 de julio de 2010 en Wayback Machine.
 ISS Fluorescence Probes Data Tables. (http://www.iss.com/resources/probes.html)
Archivado (https://web.archive.org/web/20100728010659/http://www.iss.com/resources/prob
es.html) el 28 de julio de 2010 en Wayback Machine.
The Fluorescence Foundation. (https://web.archive.org/web/20190328015655/http://www.flu
orescence-foundation.org/)
Fluorophores.org The database of fluorescent dyes. (http://www.fluorophores.org)
Jablonski diagram. (https://web.archive.org/web/20051215212824/http://www.shsu.edu/~che
mistry/chemiluminescence/JABLONSKI.html)
Fluorescence on Scienceworld. (http://scienceworld.wolfram.com/physics/Fluorescence.htm
l)
Basic Concepts in Fluorescence. (http://micro.magnet.fsu.edu/primer/techniques/fluorescenc
e/fluorescenceintro.html)
Scorpion detection using UV LEDs. (http://johnbokma.com/pet/scorpion/detection-using-uv-l
eds.html)
Immunofluorescence Protocol. (http://www.confocal-microscopy.org/Protocols%20-%20Immu
nofluorescence.htm)
An example of use of fluorescence in generating cellular images. (http://www.ii.bham.ac.uk/cl
inicalimmunology/CISimagelibrary/)
Difference between flourescence and glow in the dark. (http://www.darkniteglow.com/)
More examples how the fluorescence can be used. (http://www.antibodypatterns.com/)
Archivado (https://web.archive.org/web/20110510091627/http://www.antibodypatterns.com/)
el 10 de mayo de 2011 en Wayback Machine.
Fluorescence in digital Photography. (https://web.archive.org/web/20071218121703/http://w
ww.betz.lu/index.php/a/2007/06/03/how_to_do_fluorescent_bodypainting_photo)
The Influence of Fluorescence in the World of Art. (https://web.archive.org/web/20090321073
237/http://www.fenskeart.com/!artist.html)
Fluorescence control by Photonic Crystals - ICMM. (https://web.archive.org/web/201908011
84933/http://luxrerum.icmm.csic.es/)
The Fluorescent Mineral Society. (http://www.uvminerals.org)
Fluorescence in Practice. (http://www.noxton.net)
Laboratory for Fluorescence Dynamics. (http://www.lfd.uci.edu)
"A nano-history of fluorescence", lecture by David Jameson. (http://www.lfd.uci.edu/worksho
p/2008/)
Exitation and emmision spectra of various fluorescent dyes. (https://web.archive.org/web/200
80527052150/http://www.mcb.arizona.edu/IPC/spectra_page.htm)
Manawatu Microscopy. (http://confocal-manawatu.pbworks.com/)
Técnica para la observación de la fluorescencia de organismos marinos (http://www.fluomed
ia.org/science/) (en inglés).
Historia e investigación científica del significado biológico de la bio-fluorescencia marina (htt
ps://web.archive.org/web/20140714155528/http://www.fluopedia.org/publications/) (en inglés
y alemán).

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