MICROBIOLOGIA II

PRACTICA 2
TINCION DE GRAM

AGUADO MARTINEZ GEMA CELESTE

GUADALUPE
4A-LABORATORISTA QUIMICO
CBTIS NO.60
22 DE FEBRERO DEL 2024
OBJETIVO:
Visualizar bacterias Gram + y Gram -, diferenciándolas por la coloración que van a
adquirir.
Visualizar su morfología y disposición.

INTRODUCCION:

La tinción de Gram es un método de tinción diferencial ampliamente utilizado en

microbiología para clasificar bacterias en dos grandes grupos, Gram positivas y
Gram negativas. Desarrollada por el bacteriólogo danés Hans Christian Gram en
1884, esta técnica ha sido fundamental en el campo de la microbiología,
permitiendo a los científicos entender mejor las características y estructuras de
diferentes tipos de bacterias.

Hans Christian Gram, nacido el 13 de septiembre de 1853 en Copenhague,

Dinamarca, estudió medicina en la Universidad de Copenhague. Durante su
formación, Gram trabajó bajo la supervisión del profesor Carl Friedländer, un
bacteriólogo alemán, quien le enseñó técnicas de tinción bacteriana. Fue gracias a
estas experiencias y conocimientos que Gram comenzó a desarrollar su propia
técnica de tinción.

La creación de la tinción de Gram fue un momento crucial en la historia de la

microbiología. Antes de su desarrollo, los científicos tenían dificultades para
diferenciar entre diferentes tipos de bacterias y comprender sus estructuras
celulares. La tinción de Gram permitió a los microbiólogos clasificar bacterias en
función de la composición de su pared celular, lo que resultó fundamental para
comprender su fisiología y patogenicidad.

En cuanto al modo de empleo de la tinción de Gram, este método consiste en

realizar una serie de pasos. Primero, se realiza un frotis de la muestra bacteriana en
un portaobjetos. Posteriormente, se aplica el cristal violeta como colorante primario,
seguido de la adición del yodo como mordiente. Luego, se procede a la decoloración
con alcohol o acetona, seguido de la adición del colorante de contraste,
generalmente safranina. Finalmente, se observa la muestra bajo el microscopio
para determinar si las bacterias han retenido el colorante primario o no.

La tinción de Gram ha sido fundamental en numerosas áreas de la biología, la

medicina y la microbiología. Su capacidad para diferenciar entre dos grandes
grupos de bacterias ha permitido a los científicos comprender mejor la fisiología y
patogenicidad de diferentes patógenos. Además, ha sido esencial en el diagnóstico
de enfermedades infecciosas, así como en el desarrollo de nuevos antimicrobianos
y vacunas.
En la actualidad, la tinción de Gram sigue siendo ampliamente utilizada en
laboratorios de microbiología de todo el mundo. Su simplicidad y eficacia la
convierten en una herramienta indispensable para el estudio de bacterias en el
laboratorio. A lo largo de los años, se han
desarrollado variaciones y mejoras en la técnica de tinción de Gram, pero su
principio fundamental sigue siendo el mismo, gracias al legado de Hans Christian
Gram.

Las tinciones son herramientas fundamentales en el campo de la microbiología y la

biología celular, ya que permiten resaltar estructuras o componentes celulares para
su observación bajo un microscopio. Existen diferentes tipos de tinciones que se
utilizan dependiendo del tipo de muestra que se desea observar.

La tinción de Gram es una de las tinciones más utilizadas en microbiología.

Desarrollada por el bacteriólogo danés Hans Christian Gram en 1884, esta técnica
permite distinguir dos tipos de bacterias: las Gram positivas, que retienen el color
violeta durante la tinción, y las Gram negativas, que se decoloran y adquieren un
color rojo o rosado. El procedimiento de tinción de Gram consiste en aplicar el
cristal violeta como tinte primario, seguido de la adición de yodo como mordiente,
alcohol como decolorante y safranina como contratiñente.

Otra tinción ampliamente utilizada es la tinción de Ziehl-Neelsen, que se emplea

para la detección de bacterias ácido-alcohol resistentes, como Mycobacterium
tuberculosis, causante de la tuberculosis. Esta tinción implica el uso de la fucsina
como tinte primario, seguido de la adición de ácido-alcohol como decolorante y azul
de metileno como contratiñente.

Por su parte, la tinción de Wright se utiliza en hematología para observar células

sanguíneas, como glóbulos rojos, glóbulos blancos y plaquetas. Esta tinción implica
el uso de una mezcla de colorantes que incluye eosina y azul de metileno, los
cuales tiñen diferencialmente los componentes celulares.

En el campo de la biología celular, la tinción de Hoechst es ampliamente utilizada

para la visualización de material genético, como el ADN, en estudios de microscopía
de fluorescencia. Esta tinción implica el uso del colorante Hoechst 33342, que se
une al ADN y emite una fluorescencia azul al ser excitado con luz ultravioleta.

Las tinciones son herramientas fundamentales en la microbiología y la biología

celular, ya que permiten resaltar estructuras o componentes celulares para su
observación bajo un microscopio. Cada tipo de tinción tiene su propio modo de
empleo y aplicación específica, lo que las hace útiles en distintos campos de la
ciencia.
En conclusión, la tinción de Gram ha tenido un impacto significativo en la historia de
la microbiología y ha sido un avance crucial en la comprensión de la estructura y
fisiología bacteriana. La técnica desarrollada por Hans Christian Gram ha perdurado
a lo largo de los años y ha sido fundamental en numerosas investigaciones y
aplicaciones clínicas. Sin duda, la tinción de Gram seguirá siendo una herramienta
invaluable en el estudio de bacterias en el futuro.

MATERIAL Y REACTIVOS:
*Papel de filtro.
*Portaobjetos.
*Asa de siembra.
*Gradilla.
*Frasco lavador.
*Mechero Bunsen.
*Microscopio óptico.
*Aceite de inmersión.
*Rotulador permanente.
*Puente de tinción.
*Cristalizador.
*Secador.
*Mechero.
*Muestra boca de tubo con cultivo de caldo nutritivo.
*Suero salino.
*Cristal violeta o violeta de genciana.
*Lugol.
*Alcohol-Acetona.
*Safranina.
*Agua destilada.

PROCEDIMIENTO y EVIDENCIAS:

1. Preparar todos los materiales en la mesa de trabajo y encender justo antes de

empezar a
realizar la practica el mechero Bunsen.
2. Poner una gota de suero salino en el centro del portaobjetos. Coger el asa de
siembra y
esterilizarla por flameado. Esterilizar la boca del tubo de ensayo. Con el asa de
siembra cogeremos
un inoculo de la muestra (antes de coger el inoculo enfriar en un extremo del tubo
donde no haya
microorganismos). Esterilizar la boca del tubo de ensayo y depositar en la gradilla.
Depositar el
inóculo en el portaobjeto donde está la gota de suero salino. Homogeneizar ambas
gotas con la
ayuda del asa de siembra.
3. Esterilizar el asa de siembra con el mechero Bunsen por flameado y poner en la
gradilla.
4. Pasar el frotis por el mechero Bunsen para fijarlo por calor, hasta que se seque el
frotis.
5. Poner el portaobjetos con la muestra en el puente de tinción y comenzaremos a
hacer la
tinción.
6. Aplicar el colorante principal, cristal violeta o violeta de genciana, sobre la
muestra cubriéndola
por completo durante 1 minuto.
7. Escurrir la muestra y aclarar con abundante agua destilada hasta eliminar el
colorante.
8. Aplicar el mordiente, Lugol, sobre la muestra cubriéndola por completo durante 1
minuto.
9. Escurrir la muestra y aclarar con abundante agua destilada hasta eliminar el
colorante.
10. Aplicar el decolorante, Alcohol-Acetona, sobre la muestra cubriéndola por
completo durante
30 segundos.
11. Escurrir la muestra, no hace falta aclarar.
12. Aplicar el colorante secundario, Safranina, sobre la muestra cubriéndola por
completo durante
2 minutos.
13. Escurrir la muestra y aclarar con abundante agua destilada hasta eliminar el
colorante.
14. Dejar secar la muestra al aire o con la ayuda de un secador.
15. Visualizar la muestra con el microscopio óptico con el objetivo de inmersión
.
OBSERVACIONES Y RESULTADOS:

Las bacterias salieron gram negativas, ya que se tiñeron de color rojo

Las bacterias encontradas fueron estreptobacilos y bacilos

CONCLUSIONES:

La tinción de Gram es una técnica utilizada para diferenciar bacterias en función de

su estructura de la pared celular. Si todas las muestras en una práctica de tinción
de Gram arrojaron un resultado negativo y se identificaron estreptobacilos y
bacilos, esto puede ser indicativo de la presencia de bacterias que no retienen bien
el colorante utilizado en la tinción de Gram, lo que dificulta su identificación. Es
importante recordar que la tinción de Gram es una herramienta inicial de
identificación y que pueden ser necesarias pruebas adicionales para determinar la
naturaleza de las bacterias presentes en las muestras.
FUENTES DE INFORMACION:

1. Madigan, M. T., Martin, J. M., & Parker, J. (2000). Brock. Biología de los
microorganismos (No. QW 13 B85 2000). Pearson Educación.
2. Pelczar, M. J., Chan, E. C. S., & Krieg, N. R. (1988). Microbiología (No. QW 17 P44
1988). McGraw-Hill.
3. Atlas de bacteriología médica: técnicas elementales (No. QW 25 A85 1987).
(1987). Editorial Alhambra.

ACTIVIDADES
DEFINE.
1. de los reactivos que utilizaste para la tinción de Gram, ¿Cuál es el que
funciona como colorante
primario?
2. ¿Qué función tiene el yodo en la tinción de Gram?
3. ¿Qué coloración tiñen las bacterias Gram negativas?
4. ¿Qué coloración tiñen las bacterias Gram negativas?
5. menciona tres bacterias que tiñen Gram positivas y escribe la
enfermedad que causa cada una
de ellas
6. menciona tres bacterias que tiñen Gram negativas y escribe la
enfermedad que causa cada una
de ellas.
7. ¿Por qué se le llama tinción de Gram’

1. El colorante primario utilizado en la tinción de Gram es la cristal violeta.

2. El yodo actúa como un mordiente, formando complejos con el cristal violeta para
fijarlo en las bacterias.

3. Las bacterias Gram negativas tiñen de color rosa o rojo.

4. Las bacterias Gram positivas tiñen de color violeta o azul.

5. Staphylococcus aureus - causa infecciones de piel y tejidos blandos;

Streptococcus pneumoniae - causa neumonía; Clostridium tetani - causa el tétanos.

6. Escherichia coli - causa infecciones del tracto urinario; Pseudomonas aeruginosa -

causa infecciones respiratorias; Helicobacter pylori - causa úlceras pépticas.

7. Se le llama tinción de Gram en honor al bacteriólogo danés Hans Christian Gram,

quien desarrolló este método en 1884.