Ingeniería en electromedicina

Análisis Bio-clínico
Ing. Steven Rosales Ledezma
BIE-13

Beatriz Pérez Huertas

Practica 11:

Cromatografía Liquida de alta Resolución (HPLC)

Procedimiento:

1. Utilizando el programa computacional de su elección, cree un diagrama del HPLC

que incluya cada una de sus partes. (70pts)

1.1 Nombre todas las partes del HPLC en el diagrama y a continuación, describa el
proceso que ocurre en cada una de ellas.

Desgasificador de membrana

Mezclador proporcional
Eluentes: se encuentran en 4 frascos y son de grado HPLC. El frasco A contiene la fase
móvil. El B contiene agua ultra pura, con resistividad de 18 Ohms. Se tienen que eliminar
todos los minerales para que no se lleguen a obstruir las mangueras o dañar algún otro
componente del equipo. Los frascos C y D pueden contener acetonitrilo o etanol.

Desgasificador de membrana: va a eliminar las burbujas que puedan ser provocadas

por la alta presión con la que trabaja el equipo, y esas burbujas afectan el flujo.

Mezclador proporcional: mezcla todos los eluentes que entran. Abre y cierra válvulas
para permitir el paso del volumen que el usuario necesita, por el tiempo que se requiere.

Bomba cuaternaria: tiene 2 pistones que pueden ser de zafiro o cuarzo. Uno de los
pistones da fuerza y el segundo da el ritmo. El pistón lleva la fase móvil a la purga.

Válvula de purga: tiene un tornillo dentado que se abre y cierra, permite abrirla
manualmente para dar paso hacia el desagüe, permite sacar cualquier tipo de sedimentos
o de burbujas, o cualquier cosa que pueda ser dañina para el proceso. Cuando la válvula
está cerrada, envía una alerta que se debe abrir la válvula de purga porque la presión tan
alta puede provocar que alguna manguera se mueva de lugar.

Mezclador estático: tiene una serie de discos metálicos con porosidades de diferentes
tamaños que, por medio de la turbulencia gracias a la alta presión, mezcla todo. Ya la fase
móvil cumple con todo para realizar la separación.

Inyector: se inyecta la muestra con una jeringa especial. Tiene una palanca que tiene que
estar abierta para que la muestra entre al inyectarse lentamente. Se une la muestra con la
fase móvil.

Precolumna: cuida la columna cromatográfica. Tiene las mismas características que la

columna cromatográfica, y lo que hace es que cualquier sedimento se queda en este
componente para que no se dañe la columna, la protege.
Columna cromatográfica: trabaja con el principio físico de adsorción. Dependiendo de
las fuerzas intermoleculares, y la afinidad que tengan los solutos con la fase estacionaria,
así se van a ir adhiriendo a ella. De esta manera se va a dar la separación de los analitos,
la fase móvil empuja a los solutos y ellos se adhieren de manera distinta y en tiempo
diferente a la FS. El analito más afín a la FS se adhiere más y tarda más en salir que los
otros analitos, pero el que tenga menos afinidad, sale más rápido.

Detector: pasan los analitos uno por uno para que se realice la cuantificación y después
vayan al desecho.
2. Investigue, mencione y describa 5 diferentes aplicaciones que tiene el HPLC en la
industria. (15pts)

- La industria farmacéutica utiliza el HPLC para investigación y desarrollo, el

control de calidad de manufactura y análisis de impurezas y degradación, para
garantizar que los medicamentos estén libres de ingredientes que sean nocivos
y/o no deseados.
- En las empresas biofarmacéuticas se utiliza para caracterizar e identificar
objetivos de fármacos, y producir medicamentos a partir del mapeo y
secuenciación de péptidos, además de analizar anticuerpos y purificar activos
biológicos.
- Una de las aplicaciones más comunes que tiene es en los laboratorios clínicos
para analizar fluidos biológicos complejos, por ejemplo, la sangre, el plasma,
suero, y esto ayuda con el desarrollo de medicamentos con fines específicos.
- En la industria alimenticia, análisis de HPLC ayuda a garantizar que los
alimentos y bebidas no estén adulterados, así como que estén libres de toxinas y
carcinógenos dañinos, esto por medio de la detección de pesticidas residuales y
verificación de la pureza y autenticidad de los ingredientes.
- El HPLC se utiliza en laboratorios forenses y de toxicología para detectar,
cuantificar y confirmar drogas que estén asociadas con investigaciones criminales
y exámenes de detección de drogas.
- Además, los investigadores a cargo del estudio de muestras biológicas
proteómicas y metabolómicas complejas hacen uso del HPLC. Así como las
empresas del medio ambiente para identificar, controlar y cuantificar
contaminantes en el agua y el suelo.

3. Recomiende prácticas de mantenimiento preventivo y programas de servicio para

prolongar la vida útil del equipo. (10 pts)

Algunas consideraciones generales para el mantenimiento del equipo para alargar

su vida útil son conocer el sistema y la aplicación que se le da, así como las muestras
a utilizar siempre, y también planificar los mantenimientos rutinarios, que pueden ser
de mayor o menor frecuencia según lo amerite el equipo o lo desee el usuario.

Se aconseja limpiar regularmente los componentes del equipo, incluyendo los

inyectores, tuberías, utilizando los solventes aptos para ello y seguir el manual con
respecto a los métodos de limpieza que se deben utilizar.

Revisar los filtros para evitar que se saturen y permitan pasar moléculas dañinas.
4. Bibliografía. (5pts)

Sagarra, E. (s.f). Consejos y trucos para el mantenimiento de su HPLC-GC.

https://www.agilent.com/Library/training/Public/Consejos_Esther.pdf

ThermoFisher Scientific. (s.f). HPLC Applications.

https://www.thermofisher.com/cr/en/home/industrial/chromatography/chrom
atography-learning-center/liquid-chromatography-information/hplc-
applications.html#menu5

Notas:
-El reporte es individual, si se detectan reportes iguales se pondrá un 0 a cada uno de los
estudiantes involucrados.
-Recuerden agregar citas bibliográficas y la referencia en la bibliografía.