UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA.

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD.

ESCUELA PROFESIONAL DE TECNOLOGIA MEDICA
CURSO DE BACTERIOLOGIA.
UNIDAD DIDACTICA II.
Teoría N° :
Gardnerella vaginalis

Lic. TM Ronald Bautista Gomez

 Ausencia de
Inodoras glucogeno

Claras No Viscosa

Secreción vaginal
Viscosas Secreción vaginal Niñas
Normal

Lactobacillus spp. pH 7.0- 8.0

pH 3,5- 4.5

Presencia de Favorece el
Lactobacillus spp crecimiento de
microorganismos
 Contaminación Fecal

Contaminación
Urinaria

Exudado
Pico Vulvar Irritación Mal olor
Vaginal

Trichomonas vaginalis

Vaginitis Vaginosis Bacteriana

V. Candidiásica
 Trichomonas
Candidiasis VB
vaginalis
 Exudado Vaginal

Causa más
frecuente

Mal olor
Vaginosis por Gardnerella vaginalis

BGP

Lactobacillus spp. Múltiples Parejas

Sexuales
En su patogénesis intervienen
Alteración flora sinérgicamente G. vaginalis y los
anaerobios que producen el mal Duchas Vaginales
Vaginal olor

Gardnerella Elevación pH vaginal

vaginalis ( > 4.5
CBGV

Características del Flujo vaginal

Flora Vaginal Normal:
Lactobacillus: se establece como habitante
normal de la vagina desde la menarquia de las
mujeres sanas.
Al mismo tiempo incrementan los estrógenos,
el epitelio vaginal se estratifica y el pH
disminuye.
Flora Normal:
Especies: Lactobacillus crispatus y gensenii.
Lactobacillus:
•Producen acidez
•Peróxido de hidrógeno (radicales de oxigeno: inhibe el
crecimiento de anaerobios)
•Lactocinas y otros inhibidores de crecimiento bacteriano.
•También: Biosurfactante y proteínas de unión al colágeno que
inhiben la adhesión de las bacterias patógenas.
Lactobacillus
Ecosistema normal:
Lactobacillus predominantes
Gardnerella vaginalis: 5-37% de las mujeres. Flora
normal. No específico de vaginosis bacteriana.
Mobiluncus: 0-5% de las mujeres
Mycoplasma hominis: 15-30% mujeres sexualmente
activas
Secreción vaginal normal:
Sustancia de glándulas sudoríparas,
sebáceas, vulvares, Bartholine y Skene
Exfoliación celular
Moco cervical
Secreción endometrial y tubárica.
Vaginosis Bacteriana
Definición:
Vaginosis bacteriana: Desorden polimicrobiano
caracterizado por un incremento del pH vaginal (por
encima de 4,5), una reducción o ausencia de
Lactobacillus y un sobre crecimiento de varias
especies de bacterias anaerobias obligadas o
facultativas.
Olor particular debido a la presencia de ácidos
orgánicos e inorgánicos (aminas) producidas durante
la infección.
Es un desbalance más que una infección.
 Identificación y características de
G. vaginalis
• Son Gram negativos a Gram variables
• Pleomorficos
• Pequeños cocos bacilos
• No móviles
• No posee flagelos, ni endosporas o capsula
• En las células se observan en la periferia.
 Identificación y características de
G. vaginalis
• Crecimiento a las 24 horas en agar sangre
• Es betahemolitico en medio de agar sangre de
humano o de conejo, pero no lo es si el medio
tiene sangre de carnero.
• La hemólisis se observa mejor con la incubación
del medio de agar sangre en anaerobiosis.
• Crecimiento a las 48 horas de incubación a 35-37°
C, con CO2 5%, y mejora con 72 horas de
incubación.
 What is BV – aetiology 1950s
• Gardner and Dukes discovery of Haemophilis vaginalis in 1955

• They hypothesised that Gardnerella

vaginalis was the specific sexually
transmitted aetiological agent of BV

• Original experiments by Gardner and Dukes:

– 1/13 women inoculated with G. vaginalis developed BV
– 11/15 inoculated with vaginal material from infected
women developed BV Gardner et al. Am J Obstet Gynecol 1955
 Aetiology – later 20 th century
20th Century polymicrobial theory from bacterial cultures
•Overgrowth of Gardnerella vaginalis, anaerobic bacteria,
Mycoplasma hominis, Ureaplasma urealyticum, and Mobiluncus
species, which replace the lactobacilli
•Bacteria increased 100-1000 times
•G. vaginalis present in many women with
normal flora and in virgins - not considered
main cause or to be sexually transmitted
•Treatments covering anaerobic bacteria such as metronidazole
and clindamycin work best
•Suggests more central role than Mobiluncus and mycoplasmas
•Symbiotic relationship between P. bivia and G. vaginalis
Exact trigger factor and role of bacteria unknown
 Aetiology – 21st century
21st Century polymicrobial +++ theory
from molecular techniques

• Using bacterial 16S ribosomal DNA amplification

newly identified organisms associated with BV:
– Atopobium vaginae, Megasphaera,
Sneathia, Leptotrichia, Clostridiales order –
BVAB 1, 2, 3 Fredricks et al. NEJM 2005
• Detection of Megasphaera, A. vaginae, BVAB-1,
BVAB-3, highly sensitive and specific for BV
Fredricks et al. J Clin Microbiol 2007

But no new prime aetiological bacteria

identified – cause still unknown Fluoresence in-situ
hybridisation (FISH)
Mobiluncus: Bacilo anaerobio
gramnegativo motil e
incurvado

Gardnerella
vaginalis:
Coco bacilo
gram variable

Mycoplasma hominis:
Bacterias pleomórficas
sin pared rígida
Patogénesis:
Disminución de Lactobacillus:
Sobrecrecimiento de Gardneralla productora
de aminoácidos que son convertidos en
aminas por enzimas de los anaerobios.
Las aminas aumentan el pH, produciendo
descamación de células escamosas y la
secreción característica. Además, disminuye
aun más los Lactobacillus
 Flora patógena
Anaerobios:
Bacteroides (Prevotella)
Peptostreptococcus
Eubacterium
Mobiluncus
Anaerobios facultativos:
Gardnerella vaginalis
Mycoplasma hominis
 Aetiology – 21 st century
Discovery of biofilms on vaginal biopsies
40 women without BV, 20 women with BV
• Loosely dispersed bacteria (Lactobacilli and
aerobes) in those without BV
• Dense biofilm of G. vaginalis in women with BV
• A. vaginae also present in 80% of biofilms
Only G. vaginalis developed a biofilm specific to BV
Swidsinski et al. Obstet Gynecol 2005

G. vaginalis is the adherent Gram-negative

bacteria on clue cells Cook et al. J Infect Dis 1989
 Aetiology of BV
G. vaginalis either: Dispersed = no BV
Cohesive = BV and biofilm
Women with:
Dispersed Gardneralla: all normal vaginal flora
Cohesive Gardnerella: 10 BV on Gram stain, 2 intermediate
No Gardnerella: 2 BV, 2 intermediate, 48 normal flora
Cohesive Gardnerella had sensitivity 83%, specificity 97%
Swidsinski et al. Gynecol Obstet Invest 2010
G. vaginalis colonises 50-70% of women with normal vaginal
flora in small amounts Srinivasan et al. PLoS One 2012
This is probably colonisation by dispersed G. vaginalis
 Aetiology of BV
Are dispersed and cohesive G. vaginalis different strains?

G. vaginalis from BV versus G. vaginalis from normal flora:

• Better adherent to epithelial cells and cytotoxic (non-BV
was not) and more aggregative and produced a thick
biofilm Harwich et al. BMC Genomics 2010
• Only BV-associated isolates able to adhere in high density
clusters to HeLa cells Castro et al. Sci Rep 2015
• BV associated G. vaginalis produce mucinase
Yeoman et al. Plos One 2011
• Only two genotypes of G. vaginalis produce sialidase
Lopes Dos Santos Santiago et al. Am J Obstet Gynecol 2011
Conclusion: Differences in metabolic and virulence potential
 Aetiology of BV
Are dispersed and cohesive G. vaginalis different strains?
G. vaginalis phenotypic heterogeneity known for years

Sequence-based analyses identified 4 distinct molecular

subgroups with high level of diversity - clades 1-4 - but
possibly different species? Ahmed et al. J Bacteriol 2012

60 clinical samples from chronic vaginitis clinic:

94-97% were positive for G. vaginalis but only 37% had BV
BV associated with clades 1 and 3; intermediate with clade 2
No association with BV and clade 4
Balashov et al. J Med Micro 2014
 Aetiology of BV
Are dispersed and cohesive G. vaginalis different strains?
They probably are – possibly even different species

Int J STD AIDS 2008

Back to single pathogen hypothesis of 1955

Could pathogenic cohesive biofilm-forming G. vaginalis
be responsible for BV?
 Aetiology of BV
Unlike other anaerobes G. vaginalis possesses the three key
virulence determinants to cause BV:
• Adherence to vaginal epithelial cells
• Capacity to produce biofilms
• Cytotoxic activity Patterson et al. Microbiology 2010
Alves et al. J Infect Dis 2014

Single species starts process of biofilm scaffolding in the

mouth to which other species adhere – probably same
mechanism in the vagina
Does cohesive G. vaginalis start the vaginal biofilm
to which the other BVAB attach?
Is this the sexually transmitted agent of BV?
 New model of BV pathogenicity

Normal
vaginal flora
Lactobacilli
 New model of BV pathogenicity
Sexual transmission
of cohesive (biofilm
forming) G. vaginalis

Normal
vaginal flora
Lactobacilli
 New model of BV pathogenicity
Sexual transmission Adherence to
of cohesive (biofilm epithelial cells
forming) G. vaginalis Displacement
of lactobacilli

Normal
vaginal flora
Lactobacilli
 Adherence and displacement of LB
L. crispatus produces bacteriocins and core proteins - reduce
ability of G. vaginalis to adhere to epithelial cells
Ojala et al BMC Genomics 2014
G. vaginalis produces bacteriocins
active against LB
Teixeira et al. J Med Microbiol 2010
Cohesive G. vaginalis displaced L. crispatus from epithelial cells
Castro et al. Int J Med Sci 2013
G. vaginalis most pathogenic of BVAB as defined by highest
initial adhesion Patterson et al. J Infect Dis 2014
G. vaginalis greatest capacity of BVAB to adhere in presence of
L. crispatus Machado et al. Int J Mol Sci 2013
 New model of BV pathogenicity
Sexual transmission Adherence to
of cohesive (biofilm epithelial cells
forming) G. vaginalis Displacement
of lactobacilli

Normal Replication of
vaginal flora G. vaginalis
Lactobacilli and other BVAB
 Replication and biofilm formation
Symbiotic relationship between P. bivia and G. vaginalis
Pybus et al. J Infect Dis 1997
Growth benefit to G. vaginalis
from addition of any second
species
Machado et al. Int J Mol Sci 2013

G. vaginalis most pathogenic of BVAB as defined by greatest

propensity to form a biofilm Patterson et al. J Infect Dis 2014

G. vaginalis biofilm can withstand 4-fold higher concentrations

of lactic acid and hydogen peroxide than dispersed G. vaginalis
Patterson et al. Am J Obstet Gynecol 2007
 New model of BV pathogenicity
Sexual transmission Adherence to
of cohesive (biofilm epithelial cells
forming) G. vaginalis Displacement
of lactobacilli

Normal Replication of
vaginal flora G. vaginalis
Lactobacilli and other BVAB

Formation of biofilm
along with other BVAB
Biofilm protects against
lactic acid and H2O2
 New model of BV pathogenicity
Sexual transmission Adherence to
of cohesive (biofilm epithelial cells
forming) G. vaginalis Displacement
of lactobacilli

Normal Replication of
vaginal flora G. vaginalis
Lactobacilli and other BVAB

Formation of biofilm
Established BV along with other BVAB
Biofilm protects against
lactic acid and H2O2
 New model of BV pathogenicity
Sexual transmission Adherence to
of cohesive (biofilm epithelial cells
forming) G. vaginalis Displacement
of lactobacilli

Normal Replication of
vaginal flora G. vaginalis
Lactobacilli and other BVAB

Established BV Formation of biofilm

along with other BVAB
Treatment Biofilm protects against
lactic acid and H2O2
 New model of BV pathogenicity
Sexual transmission Adherence to
of cohesive (biofilm epithelial cells
forming) G. vaginalis Displacement
of lactobacilli

Normal Replication of
vaginal flora G. vaginalis
Lactobacilli and other BVAB

Established BV Formation of biofilm

Treatments have along with other BVAB
high failure and Biofilm protects against
recurrence rates lactic acid and H2O2
Complicaciones ginecológicas:
Enfermedad pélvica inflamatoria
Enfermedad pélvica inflamatoria pos-aborto
Infección posquirúrgica (procedimientos invasivos o
cirugía pélvica)
Neoplasia intraepitelial cervical
Cervicitis mucopurulenta
Complicaciones obstétricas:
Parto pretermino
Ruptura prematura de membranas
Infección del líquido amniótico
Corioamnionitis
Endometritis postparto
Diagnóstico:
Tinción de Gram
Criterios clínicos (tres de cuatro):
pH >4,5
Test de aminas positivos (alcalinización del flujo con KOH y posterior
desprendimiento de olor característico). El mismo olor se despide con
el semen o la sangre menstrual que alcalinizan el flujo
Células guía
Flujo vaginal anormal: escaso, color gris blanquecino, homogéneo,
adherido a la pared vaginal y de olor característico.
Gram. Normal
 Gram.
Vaginosis
bacteriana
Lactobacillus species ( vaginal secreation)
Gardnerella vaginalis
Mobiluncus mulieris (Vaginal)
 *Edad/practicas
sexuales

Introducción del especulo

Frotis-
Escobillones estériles (2)
Gram*
S.S-Examen
en Fresco

pH

Células
Guía
Examen en Fresco
PMN*

Microorga
nismos

Aminas
El flujo presente en las vaginosis tiene un pH > 4.5
debido a la disminución de Lactobacillus sp. Y por
tanto del ácido láctico; otro factor que hace que el
pH se alcalinice, es la presencia de aminas
producto de la decarboxilación de los aminoácidos
por las bacterias anaeróbicas.

Sistema de cuantificación de Nugent

 Sistema de cuantificación de Nugent

A. Cuantificación de:

1. Bacilos Gram (+): Lactobacillus spp.

2. Cocobacilos Gram Variables: G. vaginalis + Bacteroides sp.
3. Bacilos Curvos Gram (-): Mobiluncus sp.

Las bacterias se cuantifican de 1+ a 4+ de acuerdo con el número que se encuentren por campo
microscópico

0 No se observan
microorganismos
1+ 1 Bacteria x CM Escasa 0-5 PMN x CM

Moderada 5-10 x CM
2+ 1-4 Bacterias x CM

Abundante >10 x CM
3+ 5-30 Bacterias x CM

4+ > 30 Bacterias x CM

Una vez establecida la cantidad de Lactobacillus sp., G. Vaginalis más Bacteroides sp. Y Mobiluncus
sp, se asigna un puntaje de acuerdo con la siguiente tabla
 Lactobacillus G. vaginalis y bacteroides sp. Mobilluncus

4+ : 0 puntos 4+ : 4 puntos 4+ : 2 puntos

3+ : 1 punto 3+ : 3 puntos 3+ : 2 puntos
2+ : 2 puntos 2+ : 2 puntos 2+ : 1 punto
1+ : 3 puntos 1+ : 1 punto 1+ : 1 punto
0+ : 4 puntos 0+ : 0 puntos 0+ : 0 puntos

La puntuación final se obtiene sumando los puntos de los tres grupos

La VB se puede diagnosticar con el

empleo de los criterios ya mencionados
El criterio diagnostico para la (aspecto pH, aminas, células guía,
vaginosis bacteriana es una lectura del Gram.), sin ser necesario el
puntuación de 7 o más; una cultivo. Cuando hay dudas al utilizarse
puntuación de 4 a 6 se considera estos criterios, por ejemplo, Gram. con
intermedia y una puntuación de 0 a 3 puntuación intermedia (4 a 6), debe
se considera normal. realizarse la identificación completa*
A. G.V.
 Tratamiento
• Primera línea recomendada por el CDC:

Metronidazol 500 mg VO c/12 h por 7 días,

ó
Metronidazol óvulos vaginales 500mg una vez al
día por 5 días.
ó
Clindamicina crema vaginal 2% una vez al día por 7
días.
 Bacterial Response to Treatment and
Biofilms
Biofilms good mechanisms for avoiding
Natural defences, antimicrobials and
Antibiotics
In vivo
Metronidazole temporarily suppressed
biofilm activity during treatment but
activity quickly restarted after treatment
LB gradually fill vacuum formed during treatment
G. vaginalis cleared more slowly then pure anaerobes and levels often
rebound during treatment
BVAB can quickly re-emerge when treatment is stopped
Mayer et al. J Infect Dis 2015
Biofilm persists on vaginal epithelium following lack of response to
treatment Swidsinski et al. Am J Ob Gyn 2008
 Diagnóstico diferencial de la infección vaginal
Criterio Vaginosis Vaginitis Vulvovaginitis
Normal
diagnóstico Bacteriana Trichomonas X Candida
pH vaginal 3,8 – 4,2 > 4,5 4,5 < 4,5
Blanco
Blanco, fino, Amarillo, verdoso, Blanco, cortado
Flujo vaginal grisáceo,
friable espumoso (requesón)
cremoso, fino
Test de
Ausente pescado pescado Ausente
aminas (olor)
Células guía,
Lactobacillus Trichomonas
Evaluación cocos, Levaduras, hifas
Células Leucos
microscópica adheridos y pseudohifa
epiteliales >10/campo
No leucos