ESPECTROMETRÍA Y DILUCIONES

DOCENTE NORMAN TORRES

BIOQUÍMICA

CARRANZA GÓMEZ PAULA SOFÍA

Cod: 20192181033
BERMUDEZ MENDOZA MAYRA YULISSA
Cod: 20192181030
CHRISTIAN DANIEL CALDERÓN ROMERO
Cod: 20182181039
Grupo: 181-101

UNIVERSIDAD DISTRITAL FRANCISCO JOSÉ DE CALDAS

FACULTAD MEDIO AMBIENTE Y RECURSOS NATURALES
PROYECTO CURRICULAR INGENIERÍA SANITARIA
JUNIO 2022
 INFORME DE LABORATORIO ESPECTROMETRÍA Y DILUCIONES

INTRODUCCIÓN

La espectroscopia es una técnica analítica experimental muy utilizada en química. Se basa

en detectar la absorción o emisión de radiación electromagnética por parte de una
sustancia que queremos estudiar.

Para entender cualquier técnica espectroscópica debemos pensar que siempre tenemos
3 elementos básicos: la fuente de luz, la muestra que queremos estudiar y un detector. La
fuente de luz irradia la muestra, interacciona con las sustancias que la forman, estas
modifican la luz incidente (porque la absorben parcialmente o porque emiten una diferente)
y con un detector registramos la luz resultante de interaccionar con la muestra. Si sabemos
interpretar las diferencias entre luz incidente y luz resultante (grabadas en forma de lo que
llamamos espectro), obtendremos información sobre la muestra.

Los tipos de espectroscopia se diferencian según el tipo de energía radiante implicada, es

decir, según el tipo de luz que utilizamos para interaccionar con la muestra. Las radiaciones
del espectro electromagnético se diferencian entre sí por tener una longitud de onda
determinada, lo que hará que la interacción de esta radiación con la materia sea diferente
dependiendo del tipo de radiación con la que trabajamos.
Por otro lado, las diluciones consisten en bajar la cantidad de soluto por unidad de volumen
de disolución. Se logra adicionando más diluyente a la misma cantidad de soluto: se toma
una poca porción de una solución alícuota y después esta misma se introduce en más
disolvente.
Esto se deduce al pensar que tanto la disolución en un principio como al final contará con
la misma cantidad de moles.

OBJETIVOS

 Determinar cuantitativa la concentración de CuSO4 en una muestra

problema mediante espectroscopia de absorción molecular UV-VIS.
 Comprender y aplicar los conceptos de molaridad, normalidad, porcentajes de peso
a peso y dilución.

MARCO DE REFERENCIA

Un espectrofotómetro es un instrumento para medir la absorbancia de una solución. La

absorbancia es una medida cuantitativa útil y está relacionada con la concentración a
través de la ley de Beer Lambert, la cual establece lo siguiente:
A=Ɛcl
Donde A es la absorbancia de la muestra a una longitud de onda dada, ε es el coeficiente
de extinción del compuesto a esa longitud de onda y sus unidades son (M∙cm)-1, c es la
concentración molar de la especie que absorbe, y l es la longitud de paso de la celda que
contiene la solución donde se realiza la medición y está dada en cm. Así, si el coeficiente
de extinción es conocido, la absorbancia de la solución puede ser usada para calcular la
concentración de la especie en solución (asumiendo que la única especie que absorbe es
el compuesto de interés).
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A=Log(I/L)

Donde I0 es la cantidad de luz que entra a la muestra, e I es la cantidad de luz que sale de
la muestra. La absorbancia es por lo tanto una medida de la porción de luz que llega al
detector. De lo cual se deduce que cuando la absorbancia vale 1, sólo el 10% de la luz
alcanza el detector, y cuando es 2, solo el 1% de la luz alcanza el detector. Valores de
absorbancia mayores de 2 no son confiables porque muy poca luz está alcanzando el
detector para permitir mediciones acertadas. Cuando se realizan las mediciones, si el valor
de absorbancia es mayor de 2, se debe diluir la muestra y realizar las mediciones
nuevamente.

DILUCIÓN
Para determinar el volumen requerido, según la concentración final deseada se usa la
siguiente ecuación:
C1V1=C2V2

Donde C1 es la concentración inicial, V1 es el volumen inicial, V2 es el volumen del material

diluido y C2 es la concentración final del material diluido. Es usado para determinar cuánto
de la solución inicial se requiere, para luego ser adicionado qué cantidad de disolvente
para obtener la solución final de concentración conocida.

También se ha de tener en cuenta que la nomenclatura para las diluciones se muestra

muchas veces como una relación. Una relación 1:2 quiere decir que a un volumen inicial
se le agrega otro volumen de solvente para lograr el volumen final. Una relación 1:5 quiere
decir que a un volumen inicial se le agregan 4 volúmenes de solvente. Otras veces la
nomenclatura está dada en valores de X, por ejemplo, una solución 10X. Si se quiere
preparar de esta una dilución 1X se necesitará una relación 1:10 para prepararla. De la
misma forma se pueden preparar otras diluciones para realizar una curva de calibración.
En este experimento, se aprenderá cómo preparar diluciones, cómo usar el
espectrofotómetro y cómo interpretar los datos.

MATERIALES
En la Tabla 1 se describen los materiales, equipos y reactivos utilizados en la práctica
experimental de espectrofotometría y disoluciones
MATERIALES EQUIPOS REACTIVOS
Pipetas Espectrofotómetro UV-Vis Sulfato de Cobre (CuSO4)
Puntas para pipetas Vortex Solución problema de (CuSO4)
Papel parafinado
Tubos de ensayo
Gradilla
Tabla 1 Materiales
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PROCEDIMIENTOS
En la Figura 1 se puede observar los procedimientos que se llevaron a cabo en la práctica
experimental, estos incluyen diluciones simples, diluciones seriadas y la lectura de
absorbancia por medio del espectrofotómetro con una longitud de onda de 700 nm de las
diferentes soluciones y diluciones.

Figura 1 Dilución simple 1, Dilución simple 2 y Dilución en serie

RESULTADOS
A continuación se pueden observar los resultados obtenidos en la práctica experimental de
diluciones y espectrometría, descritos paso a paso en los procedimientos anteriormente
descritos.

 Dilución Simple
Con el propósito de realizar diluciones simples y saber el valor que se debe emplear del
soluto (CuSO4) y el solvente (H2O Des ionizada) en esta, se lleva a cabo las siguientes
operaciones.
𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛
𝑆𝑜𝑙𝑢𝑡𝑜 = # 𝑑𝑒 𝑑𝑖𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛 Ec.1

𝑆𝑜𝑙𝑣𝑒𝑛𝑡𝑒 = 𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 − 𝑆𝑜𝑙𝑢𝑡𝑜 Ec.2

Sabiendo que el volumen requerido son 3 mL se realiza la ecuación 1 y 2 teniendo presente
las diluciones establecidas por la guía de laboratorio y se obtienen los resultados de la Tabla
2.
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Dilución Volumen Soluto Solvente

1:2 3 mL 1.0 mL 2.0 mL
1:5 3 mL 0.6 mL 2.4 mL
1:10 3 mL 0.3 mL 2.7 mL
1:50 3 mL 0.06 mL 2.94 mL
1:100 3 mL 0.03 mL 2.97 mL
Tabla 2 Resultados Diluciones Simples

 Dilución Simple 2
Estas diluciones dadas por X, se refieren a la relación 1:10 como se puede observar en la
Tabla 3 la operación realizada para determinar el valor del soluto y el solvente es la misma
que la primera Dilución simple.

Relación Dilución Soluto Solvente

0.5X 0.5:10 0.166 mL 2.834 mL
1X 1:10 0.333 mL 2.667 mL
2X 2:10 0.666 mL 2.334 mL
Tabla 3 Resultados diluciones simples 2

 Absorbancia

En la Tabla 4, podemos observar los resultados obtenidos en el espectrofotómetro respecto

a la absorbancia de las soluciones y disoluciones propuestas por la guía de laboratorio a
una longitud de onda de 700 nm.

Dilución Absorbancia Longitud de Onda

1:100 0.018 Abs 700 nm

1:50 0.012 Abs 700 nm

1:10 0.071 Abs 700 nm

1:5 0.125 Abs 700 nm

1:2 0.193 Abs 700 nm

Muestra Pura 0.622 Abs 700 nm

Muestra Problema 0.020 Abs 700 nm

2X 0.138 Abs 700 nm

1X 0.064 Abs 700 nm

0.5X 0.036 Abs 700 nm

Tabla 4 Resultados Absorbancia de las Diluciones realizadas
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ANÁLISIS DE RESULTADOS
En este apartado podemos observar como es el comportamiento de la absorbancia con respecto a
las concentraciones de las diluciones de CuSO4

Absorbancia Concentración
0.193 0.66
0.125 0.48
0.071 0.27
0.012 0.05
0.018 0.02

Diluciones Simples 1
0,25
0,2
0,15
0,1
0,05
0
0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7

Absorbancia Concentración
0,03 0,15
0,06 0,29
0,13 0,51

0,25

0,2

0,15

0,1

0,05

0
0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6
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CONCLUSIONES

 El conocer el adecuado uso del espectrofotómetro permitió obtener en el

laboratorio resultados con alta calidad analítica en las mediciones que son
emitidas por éste.
 Se identificó que el equipo presenta una adecuada precisión y exactitud
determinando que las mediciones realizadas en este pueden ser confiables

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

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Miscelánea Características generales de la Espectroscopía (Descifrando las claves
de la interacción materia-radiación). Retrieved from
https://rua.ua.es/dspace/bitstream/10045/23438/1/QCE_GradoQ
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 SECCIÓN 1: Identificación de la sustancia o la mezcla y de la sociedad o la empresa

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 Pérez Eliseo, S.f, Reglamento Interno de laboratorio, Universidad Distrital

Francisco José de Caldas, Obtenido de
http://www1.udistrital.edu.co:8080/documents/138568/e8ee3802- b669-4785-aa65-
65779e590830