“AÑO DE LA UNIDAD, LA PAZ Y EL DESARROLLO”

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA ACADÉMICA DE TECNOLOGÍA MÉDICA EN LABORATORIO CLÍNICO Y

ANATOMÍA PATOLÓGICA

CURSO:

HEMATOLOGÍA APLICADA - PRÁCTICA

DOCENTE

Mg. ALANIA, WILMER ANDRES

AULA

LCS908

INTEGRANTES

1. LOPEZ MENDEZ, Carlos Alfonso.

2. MENDOZA SAENZ, Milagros

3. MENDOZA VERAMENDI, Rosana Ibet

4. MONTES MALPARTIDA, Yessenia

5. VARGAS PASTRANA, Meiboll Zenith

2023 – II

1
 Tabla de contenido

MARCO TEÓRICO...................................................................................................................3

RESULTADOS:......................................................................................................................10

CONCLUSIONES..................................................................................................................11

CUESTIONARIO....................................................................................................................12

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS.......................................................................................17

2
 MARCO TEÓRICO

La prueba de Coombs, también conocida como prueba de antiglobulina, es una

prueba de diagnóstico utilizada para detectar anticuerpos que se unen a los glóbulos rojos.
Esta prueba juega un papel crucial en la identificación y diagnóstico de diversas patologías,
especialmente aquellas relacionadas con trastornos autoinmunitarios y no inmunitarios que
causan anemia hemolítica. La hemólisis en estas enfermedades es causada por glóbulos
rojos recubiertos de anticuerpos (IgG, IgM) y/o componentes del complemento (C3), que se
rompen en el torrente sanguíneo.

Existen dos tipos principales de la prueba de Coombs: la prueba directa y la prueba

indirecta.
La prueba de Coombs directa se centra en detectar anticuerpos y/o complementos ya
unidos a la superficie de los glóbulos rojos "in vivo", y permite detectar la sensibilización de
los glóbulos rojos produciéndose una aglutinación visible que será considerada prueba
positiva. (1)
Tiene un valor diagnostico en: Anemias hemolíticas inmunitarias, enfermedad hemolítica del
recién nacido, investigación de reacciones dudosas en una transfusión y el estudio de
enfermedades autoinmunes que implican la unión de inmunoglobulinas y/o fracciones del
complemento a los eritrocitos. (2)

La prueba de Coombs indirecta la sensibilización se realiza in vitro, se utiliza para

detectar anticuerpos que se encuentran en el suero o plasma del paciente. Consiste en
mezclar el suero del paciente con glóbulos rojos del donante, seguido de la detección de
anticuerpos no unidos con antiglobulina, si es positivo se observará aglutinación. Este tipo
de prueba se utiliza principalmente en pruebas de compatibilidad antes de las trasfusiones,
Eritroblastosis fetal, Fenotipo de glóbulos rojos, examen del suero del donante y del
paciente en busca de anticuerpos irregulares. (2)

Para estas dos pruebas se utiliza un reactivo de Coombs, que es un antisuero

compuesto de anticuerpos IgG, IgM y C3 preparados especialmente en conejos. Estos
anticuerpos se unen a anticuerpo contra antígenos en la superficie de los glóbulos rojos,
generando una reacción de aglutinación que indica un resultado positivo.(3)

3
 La presencia de anticuerpos en la sangre puede indicar respuestas inmunológicas
anómalas que pueden conducir a la destrucción de los glóbulos rojos y, por lo tanto, afectar
la salud del paciente.

En este informe detallaremos el procedimiento de la prueba de Coombs indirecta realizada

con muestras de sangre de diferente grupo sanguíneo (GRUPO O factor RH negativo y
GRUPO O factor RH positivo) con el objetivo de determinar la incompatibilidad a través de
la sensibilización que se podrá observar con la formación de una reacción aglutinante.

4
 MATERIALES Y METODOS:

MUESTRA USADA EN LA PRÁCTICA

Paciente: Meylin vallejos Olivares (O Rh -)
Paciente: Carlos López Méndez (O Rh +)
Paciente: Meiboll Vargas Pastrana (O Rh +)
Muestra problema: suero
Sangre total anticoagulada: para preparar células pantalla

5
 PROCEDIMIENTO:
1.- Rotular los tubos,

2.- Se procede a realizar el Lavado de glóbulos rojos de Carlos y Meiboll (O Rh +) de dos a

tres veces.

3.- Después de haber realizado los tres lavados

4.- Se procede a centrifugar a 3500 RPM X 5 minutos la muestra de la paciente Meylin, para
obtener plasma (el grupo OR h -)

6
5.-En 2 tubos preparar glóbulos rojos al 5% tanto de paciente Carlos como de Meiboll.

6.- Una vez obtenidos los glóbulos rojos al 5% de los pacientes Carlos y Meiboll (O Rh +) se
procede añadir 2 gotas de suero de la paciente Meylin (O Rh -) a cada tubo tanto a Carlos
como a Meiboll.

7.- Luego se centrifuga a 1000 RPM X 2 minutos.

7
8.-Se agrega 100ul de Albumina al 22 % a cada muestra de nuestros dos pacientes
(Carlos y Meiboll)

9.-Volver a centrifugar a 1000RPM X 2 minutos.

10.- Incubar 37°C X 30 minutos, ambos tubos

8
11.- Enseguida lavar de 3 a 4 veces.

12.- Después de los tres lavados agregar 2 gotas de Anti IgG.

13.- Volver a centrifugar a 1000RPM X 2 minutos.

9
14.- Luego de la centrifugación

15.- Se llevará a cabo la lectura

RESULTADOS:

CONCLUSIONES

Muestra de Carlos: 4+ Muestra de Meiboll : 2+

(POSITIVO) (POSITIVO)

10
 CONCLUSIONES

S e utilizó una muestra de sangre del grupo sanguíneo Rh (-), perteneciente a

una mujer cuyos hijos son del grupo Rh (+) y dos muestras del grupo sanguíneo Rh
(+) de hombre y mujer. Ambas muestras de Rh (+) se enfrentaron al Rh (-) utilizando
la técnica de Test de Coombs Indirecto. Del Rh (-) se utilizó el plasma, en el que se
deducía que había anticuerpos para el factor Rh (+), de acuerdo a teoría, y los
glóbulos rojos de las 02 muestras de Rh (+), como se suponía, ocurrió la rección
antígeno-anticuerpo. En el caso de la muestra del varón Rh (+), la aglutinación fue
positiva (++) y para el caso de la mujer Rh (+) fue positiva (+++).
Se concluye que el paciente Rh (-) ha generado anticuerpos anti-D producto de la
sensibilización con un feto, Rh (+), desarrollando anticuerpos anti -D de tipo IgG el
cual van a reaccionar con los glóbulos rojos de las muestras de Rh (+).

11
 CUESTIONARIO

SEMANA 3

1. Explique detalladamente el fundamento de Prueba de Antiglobulina Humana

indirecta; detalle las fases de la prueba y su importancia en el diagnóstico de anemias
hemolíticas.
En esta prueba, la incubación de glóbulos rojos con suero o plasma permite la formación de
complejo inmune in vitro que se da entre los antígenos presentes en los glóbulos rojos y
anticuerpos libres en el suero o plasma. Esta prueba permite determinar si existe o no
anticuerpos irregulares en el suero del paciente, primero enfrentándolo a los glóbulos rojos
tipificados específicos y, posteriormente por medio del reactivo de Coombs. Existirá
aglutinación si es positivo. (3)

Fases: estas fases permiten identifican diferentes tipos de inmunoglobulinas.

Fase salina:
la primera fase salina llega hasta la fase de Coombs, esta fase busca diferenciar los AC IgM
en su fase rápida a 22°c, son anticuerpos fríos y su medio de reacción optimo es la solución
salina. (4)
Si no aglutina pasamos a la fase albumina. 37 °C de la IgG en la fase de Coombs.
Fase albumina:
Esta fase sirve para potenciar la reacción entre anticuerpos clase de IgG y sus antígenos
correspondientes. La albúmina actúa reduciendo la potencial zeta y aumentando la
constante dieléctrica del medio, lo que reduce la fuerza de repulsión entre los glóbulos rojos,
facilitando su aglutinación. Por tanto, a los anticuerpos IgG les resulta más fácil mantener
unidos los glóbulos rojos y el fenómeno de aglutinación aumenta con la centrifugación. (5)
Fase Coombs:
En esta fase se agrega el suero de Coombs y se busca detectar anticuerpos incompletos
que se unen a la membrana de los eritrocitos mediante sensibilización in vitro, y podemos
detectar estos anticuerpos mediante una reacción de Coombs indirecta.
Para finalizar se agregará las células para el control de Coombs a cualquier resultado de
prueba antiglobulina humana negativa, se centrifuga y luego se comprueba con la
aglutinación. Este paso permite asegurarnos de que el procedimiento se ha realizado de
manera correcta. (5)

12
Importancia:
En general esta prueba de Coombs es muy importante, ya que permite conocer y detectar
la reacción de anticuerpos contra los hematíes, nos ayuda a evitar transfusiones y
suministros de sangre incompatibles que generan anemias hemolíticas en el receptor y
pone en riesgo su salud.
Las patologías inmunitarias son muy variadas, en este caso de las anemias hemolíticas
auto inmunitarias se da porque nuestro propio organismo presenta anticuerpos que dañan a
los propios eritrocitos, estos anticuerpos pueden ser anticuerpos fríos, anticuerpos calientes
y /o anticuerpos bifásicos. Las fases del test de Coombs nos permiten identificar estos
anticuerpos fríos y calientes. Con esta detección podemos realizar un diagnóstico y tomar
precauciones para evitar que el paciente quede expuesto a temperaturas frías y/o calientes,
previniendo así complicaciones más graves para el paciente. (6)

2.- Explique la importancia del empleo de la albúmina bovina en la prueba. Explique la

forma como interviene en la detección de anticuerpos irregulares.

Los anticuerpos que no causan aglutinación de los glóbulos rojos cuando están
suspendidos en una solución salina a veces pueden provocar aglutinación cuando se
encuentran en una solución que contiene albúmina bovina. Esto es posible debido a que la
albúmina bovina altera las propiedades del medio en el que se encuentran los glóbulos
rojos, aumentando la constante dieléctrica del medio y disminuyendo la potencial zeta. La
constante dieléctrica de un medio es una medida de su capacidad para dispersar cargas
eléctricas.

Sin embargo, no todos los anticuerpos de los grupos sanguíneos exhiben un aumento en su
actividad en presencia de albúmina. Por ejemplo, los anticuerpos anti-A, anti-B y anti-Lewis
en realidad disminuyen su actividad cuando se encuentran en presencia de albúmina. Esto
se debe a que la albúmina afecta el grado de hidratación de la membrana, lo que puede
alterar la disposición tridimensional del antígeno o reducir la cantidad de energía libre
disponible para dirigir la reacción. (7)

3.- Defina a que se denomina anticuerpo irregular o incompleto (COOMBS

INDIRECTO)

La prueba de coombs indirecta consiste en mezclar el suero del paciente con glóbulos rojos
que contienen el antígeno al que se dirige el anticuerpo. Luego se añade una sustancia
llamada antiglobulina, que se une a los anticuerpos incompletos y aglutina los glóbulos

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rojos, de esta forma se puede detectar la presencia y especificidad de anticuerpos
irregulares. Los anticuerpos irregulares pueden tener importancia clínica en la medicina
transfusional y en la incompatibilidad materno-fetal.(8)

CUESTIONARIO SEMANA 4

1. Qué significa sensibilización in vivo.

Cuando hablamos de la sensibilización in vivo, nos referimos a la prueba de Coombs
directa, en el test de Coombs la sensibilización de eritrocitos puede suceder en forma in
vitro o in vivo después de la incubación a 37 C.
Si arrojará positiva, puede o no estar relacionada con la destrucción inmunológica de los
glóbulos rojos, se utiliza principalmente para investigar casos de reacciones hemolíticas
postransfusionales (RHT), enfermedad hemolítica del feto y el recién nacido (EHFRN),
anemias hemolíticas autoinmunes (AHAI), aloinmunes y anemia hemolítica inducida por
medicamentos.
La sensibilización se da, in vivo del cuerpo del paciente, se extrae la sangre, prepara
glóbulos rojos al 5% y 2 gotas de antiglobulina luego se centrifuga. Si aglutina es positivo, si
no aglutina es negativo.
Si aglutina significa que hay anticuerpos que se han pegado a los hematíes del propio
paciente, en su cuerpo y sangre. El resultado permite identificar el proceso inmunológico y
contribuir al diagnóstico del paciente.
Varía según la técnica y los reactivos utilizados, pudiendo identificar entre 100 y 500
moléculas de IgG, y entre 400 y 1100 moléculas de C3d por cada glóbulo rojo.(9)

2.- Explique el proceso de hemólisis en los hematíes en un cuadro de Reacción

Hemolítica transfusional.
En las Reacciones Transfusionales Hemolíticas Agudas (RTHA) se observan dos formas de
hemólisis: intravascular y extravascular. Generalmente, una de estas prevalece, y esto está

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relacionado con el tipo de anticuerpos inmunoglobulina presentes, la concentración de
anticuerpos y el estado del sistema inmunológico.
Cuando se trata de reacciones mediadas por la inmunoglobulina M (IgM), la hemólisis
intravascular tiende a ser predominante. Esto se debe a la capacidad de estos anticuerpos
para activar el sistema de complemento hasta llegar a la formación del complejo de ataque
a la membrana (C5-9). En este caso, la destrucción de los glóbulos rojos ocurre
directamente en la corriente sanguínea, lo que conduce a la presencia de hemoglobinemia y
hemoglobinuria.
Por otro lado, cuando los aloanticuerpos pertenecen a la clase IgG, prevalece la hemólisis
extravascular. Esto se debe a que estos anticuerpos no activan el sistema de complemento
o lo hacen solo parcialmente, llegando hasta el componente C3. En este escenario, la
destrucción de los glóbulos rojos recubiertos con inmunoglobulinas y componentes del
complemento tiene lugar en el hígado y el bazo. Esto sucede después de que son
capturados por monocitos y macrófagos a través de sus receptores para la fracción Fc de la
IgG y el componente C3b del complemento. (10)

3. Explique detalladamente el fundamento de la prueba de antiglobulina humana

directa; detalle las fases de la prueba y su importancia en el diagnóstico de anemias
hemolíticas inmunes.

Es una prueba que detecta la presencia de glóbulos rojos o anticuerpos contra los glóbulos
rojo, esta prueba se realiza principalmente para diagnosticar la causa de la anemia
hemolítica, que es la destrucción acelerada de los glóbulos rojos. prueba directa de
antiglobulina humana se basa en el principio de que los anticuerpos unidos a los glóbulos
rojos pueden detectarse con globulina antihumana, un anticuerpo antihumano en animales.

La prueba se ejecuta en tres etapas:

 Lavado: Para eliminar los anticuerpos no unidos, se lavan los glóbulos rojos
del paciente.

 Adición: los glóbulos rojos lavados se mezclan con una solución de un anticuerpo
anti-IgG humana. Los anticuerpos anti-IgG humana se unirán a los glóbulos rojos si
tienen anticuerpos adheridos a su superficie.

 Se observa la aglutinación (unión) de los glóbulos rojos para ver si se produce. La

aglutinación es una señal de que los anticuerpos están adheridos a la superficie de
los glóbulos rojos.

La prueba de antiglobulina humana directa es crucial para el diagnóstico de anemias

hemolíticas inmunes porque puede identificar la presencia de anticuerpos que pueden estar
causando hemólisis (la destrucción prematura de los glóbulos rojos) al observar la superficie
de los glóbulos rojos. (11)

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4.- Defina a que se denomina anticuerpo irregular o incompleto (COOMBS DIRECTO)

Los anticuerpos irregulares o incompletos son aquellos que no reconocen adecuadamente

los antígenos de los glóbulos rojos. Estos anticuerpos pueden tener diferentes orígenes,
como la exposición a antígenos raros, la producción de anticuerpos anómalos o la alteración
de los antígenos de los glóbulos rojos, Los anticuerpos irregulares o incompletos pueden
provocar una reacción inmunitaria contra los glóbulos rojos, lo que conduce a su
destrucción. Esta situación se denomina anemia hemolítica y puede tener graves
consecuencias para la salud. (12)

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 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

1. Juárez 1. Qfb Javier, Hernández 2. Qfb Catalina. CD y AT positivos en el laboratorio Rev

Mex Med Tran. [Internet]. 2024;7(1) [citado el 30 de septiembre de 2023]. Disponible en:
https://www.medigraphic.com/pdfs/transfusional/mt-2014/mt141d.pdf

2. Clinica S. (Anti-IgG policlonal + anti-C3d monoclonal) Para realizar Prueba tiglobuli na

(Coombs) Directa o Indirecta [Internet]. Wiener-lab.com. [citado el 30 de septiembre de
2023]. Disponible en: https://access.wiener-lab.com/VademecumDocumentos/Vademecum
%20espanol/suero_anti_humano_sp.pdf

3.Henríquez JBH. Manual de Prácticas de Inmunohematología [Internet]. www.uv.mx.

[citado el 30 de septiembre de 2023]. Disponible en:
https://www.uv.mx/personal/bescobar/experiencias-educativas/manual-de-practicas-de-
inmunohematologia/

4. Bonilla R. Importancia de las pruebas cruzadas y de la búsqueda de anticuerpos. Rev

Med Inst Mex Seguro Soc 2006; 44 (Supl 2): 43-46.Disponible en:
https://www.medigraphic.com/pdfs/imss/im-2006/ims062j.pdf

5. Lopez G.Prueba de Coombs -Nombre de la técnica: Prueba de compatibilidad [Internet].

Estudio. [citado el 30 de septiembre de 2023]. Disponible en: https://www.studocu.com/es-
mx/document/instituto-politecnico-nacional/inmunologia/prueba-de-coombs/10786678

6. Braunstein M. Anemia hemolítica autoinmunitaria [Internet]. Manual MSD versión para

público general. [citado el 1 de octubre de 2023]. Disponible en:
https://www.msdmanuals.com/es/hogar/trastornos-de-la-sangre/anemia/anemia-hemol
%C3%ADtica-autoinmunitaria

7. Sld.cu. [consultado el 22 de septiembre de 2023]. Disponible en:

http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0864-02892001000200003

8. Insunza FA, Behnke GE, Carrillo T J. Enfermedad hemolítica perinatal: manejo de la

embarazada RhD negativo. Rev Chil Obstet Ginecol [Internet]. 2011 [citado el 2 de octubre
de 2023];76(3):188–206. Disponible en: https://www.scielo.cl/scielo.php?
script=sci_arttext&pid=S0717-75262011000300010

9. Prueba de antiglobulina de Coombs (Indirecta y directa)

[Internet]. Cigna.com. [consultado el 2 de octubre de 2023]. Disponible en:
https://www.cigna.com/es-us/knowledge-center/hw/pruebas-mdicas/prueba-de-antiglobulina-
de-coombs-hw44015

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10. Cortina L, López M. Reacción transfusional hemolítica inmune inmediata. Rev Cuba
Hematol Immunol Hemoter [Internet]. 2006 [consultado el 2 de octubre de 2023];22(2):0–
0. Disponible en: http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0864-
02892006000200001

11. Rodríguez-Carrasco, L., & López-Pedreño, A. (2018). Prueba de antiglobulina

humana directa. En Hematología clínica (4.ª ed., pp. 169-172). Barcelona: Elsevier.
12. Angarita Merchan M, Urbano Cáceres EX, Cantor-Becerra ML. Anticuerpos irregulares
en donantes de sangre. Rev Cuba Hematol Immunol Hemoter [Internet]. 2021 [citado el 1 de
octubre de 2023];37(4). Disponible en: http://scielo.sld.cu/scielo.php?
script=sci_arttext&pid=S0864-02892021000400008

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