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Manual Laboratorio Toxi
Manual Laboratorio Toxi
TOXICOLOGIA FORENSE
Instructivo de Laboratorio
i
PRÁCTICA 1: INTOXICACION POR SALICILATOS
Dosis claramente tóxicas son 300 μg/mL, y toxicidad severa se observará a concentraciones plasmáticas de
400 μg/mL. La dosis letal en adultos oscila entre 10 y 30 g y, en niños, se estima en 4 g.
2. OBJETIVOS
1. Determinar la presencia de salicilatos en una muestra de orina.
2. Determinar la concentración de salicilatos en una muestra a través de espectrofotometría.
3. Analizar la presencia de salicilatos en una muestra sanguínea.
4. MATERIALES Y EQUIPO
EQUIPO
• Solución de ácido salicílico en stock, 100 mg / dl (100 mg/100 ml) que se prepara asi:
transferir 1.16 g de salicilato de sodio a un frasco de 1 litro, diluir a 1 litro con agua destilada. Añadir unas
pocas gotas de cloroformo como preservante, almacenar la solución en un refrigerador. Descartar la
1
solución luego de 6 meses. Esta solución es equivalente a 100 mg / dl de ácido salicílico. El uso de esta
solución de ácido salicílico como estándar no es recomendado.
•Solución ácido salicílico como estándar, 5.0 mg / dl: transferir 5 ml de ácido salicílico en stock a 95 ml de
agua.
5. CONSIDERACIONES DE SEGURIDAD
Debe consultar las hojas de seguridad de cada uno de los reactivos a manipular y debe utilizar guantes de
nitrilo, mascarilla y bata durante la práctica.
6. ANTECEDENTES
Existen diferentes tipos de salicilatos, los cuales son empleados en una gran variedad de productos
farmacéuticos. Así tenemos el ácido acetilsalicílico, utilizado en casi todas las tabletas para uso analgésico;
su nombre comercial más famoso es ASPIRINA®. El ácido salicílico se usa en ungüentos dermatológicos o
como salicilato de sodio para uso interno. El salicilato de metilo en preparados dermatológicos empleados
con propósitos analgésicos, para aliviar dolores musculares.
Métodos de Análisis
La espectroscopia se refiere a la medición de la cantidad de luz absorbida por una solución, siendo la
cantidad de luz absorbida proporcional a la concentración de los compuestos en la solución. Cada
compuesto tiene asociadas unas cuantas longitudes de onda selectas que serán absorbidas, antes que el
resto de longitudes en el espectro. Por tanto, mediante la selección cuidadosa de longitudes de onda, es
muchas veces posible medir la concentración de un compuesto en la presencia de otros diversos.
Los salicilatos reaccionan con las sales férricas (es decir, de hierro) para producir un color violeta, el cual es
proporcional a la concentración del salicilato. Para la detección de salicilatos se debe utilizar una longitud de
540 nm para medir la absorción de luz. Dada la simplicidad del procedimiento para al salicilato, el supuesto
de envenenamiento con salicilatos puede ser verificado en minutos, especialmente debido a que el
envenenamiento severo produce un color violeta fuerte y fácilmente observable al aplicar el reactivo
adecuado.
Existen diversos tipos de espectrofotómetros en el mercado, uno de los cuales se presenta en la Figura No.
1. El sendero para la luz y los principales componentes se presentan en la Figura No. 2.
El presente experimento consiste de dos partes. En la primera sección se obtiene el color púrpura del
salicilato para varias soluciones de concentración conocida, preparando una curva de calibración, para luego
determinar la concentración de la muestra desconocida. La segunda parte consiste en la determinación de
salicilatos en una muestra de sangre.
2
Figura No. 1.- Ejemplo de Espectrofotómetro UV-VIS
7. PRE-LABORATORIO
Conteste las siguientes preguntas:
8. PROCEDIMIENTO
PARTE A: DETERMINACION CUALITATIVA DE SALICILATOS
3
2. pipetear las cantidades de material indicadas en la tabla no 1 en las seis cubetas, mezclar bien.
calcular la concentración de salicilato en mg/dl para cada muestra conocida de salicilato y registrar
el valor en la hoja de datos provista al final de la descripción de la práctica. (ayuda: la cubeta 2 tiene
una concentración de salicilato de 0.25 ml/dl).
3. nota: algunos cambios menores pueden ser requeridos en el procedimiento, dependiendo del
espectrofotómetro utilizado. en caso de duda, consultar el manual de uso.
4. encender el instrumento. puede ser necesario que se permita el calentamiento del mismo por 15 a
20 minutos para estabilizar la muestra y el detector.
5. Ajustar la longitud de onda a 540 nm.
6. Verificar que la lectura a realizar en el espectrofotómetro será de la de transmitancia.
7. Ajustar el 0% T. Asegurarse que el compartimento para la muestra está completamente cerrado.
8. Insertar la cubeta conteniendo el blanco hasta el fondo en el compartimento para muestras.
Alinear la marca guía de la cubeta con la marca del instrumento (realizar una marca en el lado de la
cubeta si se utilizan tubos de ensayo ordinarios).
9. Ajustar la lectura a 100% T. Remover la cubeta del compartimento.
Nota: en caso de que la lectura esté fuera de rango, diluir la muestra.
10. Insertar cada estándar conocido de ácido salicílico en el compartimento de muestra, y obtener la
lectura de transmitancia para cada muestra. Registrar cada lectura en la hoja de datos.
11. Graficar el porcentaje de transmitancia (% T) en el eje vertical en una hoja de papel milimetrado, y
la concentración © en mg/dl en el eje horizontal para las cubetas 1 a 6. Ajustar una recta por
Mínimos Cuadrados Ordinarios. Esta línea es conocida como curva de calibración.
12. Pipetear 1.0 ml de la solución desconocida en una cubeta, mezclar con 1.0 ml de nitrato férrico
diluido. Determinar la absorbancia.
13. Utilizando la curva de calibración y la lectura de absorbancia anterior, determinar la concentración
de salicilato en la muestra desconocida.
Realizar el siguiente procedimiento en duplicado. (Deberá efectuar el procedimiento dos veces, tanto a la
muestra desconocida como al estándar de 5.0 mg/dl).
1. Etiquetar dos cubetas para la muestra desconocida y dos para el estándar de 5.0 ml/dl.
2. En cada caso, una de las cubetas será etiquetada como “Test” y la otra como “Blanco”.
3. Pipetear 2.0 ml de agua destilada en cada cubeta.
4. Pipetear 0.2 ml de suero en las cubetas para la muestra desconocida.
4
5. Pipetear 0.2 ml de estándar de 5.0 mg/dl en las cubetas para estándar.
6. En las cubetas de etiquetadas como Blanco, pipetear 2.0 ml de ácido nítrico 0.039 M.
7. En las cubetas etiquetadas como Test, pipetear 2.0 ml de la solución diluida de nitrato de hierro.
8. Agitar todas las cubetas para mezclar su contenido.
La Tabla 2 enumera cada cubeta y sus contenidos.
9. Dejar reposar los mismos por 5 minutos.
10. Seguir las instrucciones en la Parte A de este experimento para obtener una lectura para cada
cubeta. Registrar la absorbancia leída en la hoja de cálculos.
Tabla No. 1.- Preparación de Estándares de Ácido Salicílico
Estándar 5.0 mg/dl Agua Destilada Nitrato de Hierro Ácido Nítrico 0.039 M
Diluido
5
Estándar de 5.0 mg/ml Absorbancia (primera corrida) Absorbancia (segunda corrida)
Estándar (Blanco)
Estándar 5.0 mg/ml
Desconocida (Blanco)
Desconocida
CÁLCULOS
a. Usar la siguiente relación para determinar la concentración de salicilato en la muestra desconocida:
b. Calcular cada muestra desconocida de forma separada, y promediar el resultado. Si los resultados
individuales no se acercan en por lo menos 2 a 3 mg/dl, repetir el análisis una tercera y cuarta vez.
Calcular y comparar los resultados con los obtenidos anteriormente. Promediar los resultados que
se acercan en 2 a 3 mg/dl entre sí.
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PRÁCTICA 2: ANÁLISIS DE ALCOHOL ETÍLICO EN SANGRE POR MICRO DIFUSIÓN
Dado a los altos índices de accidentes y delitos asociados al consumo de alcohol, el etanol es una sustancia
buscada en la mayoría de las pruebas de alcohol en sangre. Según reportes médicos el 10% del etanol sale
del cuerpo a través del sudor, la respiración y la orina. El resto debe ser metabolizado fuera del cuerpo a
través del hígado. El tiempo que tarda el alcohol en dejar el flujo sanguíneo es directamente dependiente de
la velocidad a la que el cuerpo puede metabolizar el alcohol. Por lo tanto una prueba de alcohol en sangre
puede aportar evidencia de el responsable de algún delito.
2. OBJETIVOS
Aplicar la técnica de micro difusión para determinar la presencia de alcohol en sangre.
3. MATERIALES Y EQUIPO
Celdas de Conway
1 Destapador de viales
12 Micropipetas
Perillas para micropipetas
Masking tape
Papel kraft para poner en las mesas
Guantes
Dicromato de potasio
Agua destilada
Nitrato de plata
Ácido sulfúrico concentrado
Reactivo de dicromato de potasio: Disolver 1 g de dicromato de potasio en 500 ml de agua. Agregar 0.1 g de
nitrato de plata a la solución. Cuidadosamente agregar 500 ml de ácido sulfúrico concentrado. Esta mezcla
es estable por al menos un año si se protege de la luz y la humedad. Para su uso, es conveniente dispensarlo
en frasco gotero de una onza.
4. CONSIDERACIONES DE SEGURIDAD
Previamente debe revisar los aspectos importantes de precaución en las hojas de seguridad de los reactivos
a utilizar. Prepare los reactivos en la campana de extracción de gases. Utilice bata, guantes de nitrilo y
lentes de seguridad.
5. ANTECEDENTES
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Las determinaciones analíticas de alcohol etílico se basan en su volatilidad y su potencial de reducción.
Ambas propiedades se utilizan en este procedimiento, en el que se utilizan celdas de Conway con reactivo
de dicromato de potasio. Si el etanol (o alguna otra sustancia volátil, reductora) está presente, se difundirá
en el interior de las celdas y reaccionará con el reactivo de dicromato de potasio, cambiando su coloración.
Este método es utilizado como un tamizaje en el que se logra identificar las posibles muestras positivas para
etanol. Una vez obtenido un resultado positivo –es decir cambio en la coloración del reactivo de dicromato
de potasio-, debe confirmarse por medio de una metodología cuantitativa, siendo de elección, la
cromatografía de gases con detector de llama.
No debe olvidarse que las muestras para alcoholemia deben ser preservadas con fluoruro de sodio y el
envase deberá ser lo más adecuado en cuanto a volumen de la muestra.
6. PRE-LABORATORIO
Contestar las siguientes preguntas:
7. PROCEDIMIENTO
1. Cubra el fondo del anillo externo de la celda de Conway con sangre u orina, colocándola directamente
desde el envase.
2. Agregue unas cuantas gotas de dicromato de potasio al centro de la celda de Conway.
3. Coloque la cubierta a la celda de Conway y deje estar a temperatura ambiente.
INTERPRETACIÓN:
El reactivo cambiará de color entre 15 minutos y una hora si el etanol u otra sustancia reductora volátil esta
presente. El cambio de color que se presenta va de amarillo a verde o azul.
9. DATOS Y OBSERVACIONES
Reporte los resultados obtenidos con las muestras analizadas.
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11. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
[1]. Conway, Edward J. (1962) Microdifusion Analysis And Volumetric Error. Crosby Lockwood & Son LT.
London.
[2]. Walllace Hayes A. (2001). Principles and Methods of Toxicology. 4th edición. Ed:Taylor & Francis.
USA.
2. OBJETIVOS
Realizar mediciones para detectar algohol en sangre a través de un alcoholímetro portátil.
3. MATERIALES Y EQUIPO
EQUIPO
• 1 Medidor de ampolla
• 1 Bulbo atomizador
• 1 Breathalyzer o equipo similar
• 1 Tubo para burbujeo
• 1 Par de lentes de seguridad
• 1 Boquilla
REACTIVOS
• 2 Ampollas de prueba del Breathalyzer o equipo similar
• Líquido de enjuague con contenido de alcohol
4. CONSIDERACIONES DE SEGURIDAD
Debe utilizar guantes, bata y lentes de seguridad durante la practica.
5. ANTECEDENTES
Una forma más popular para llevar a cabo el análisis consiste en la captura del aliento de la persona para
determinar su contenido de alcohol. Dos de los procedimientos más frecuentemente administrados son
mediante la utilización del alcoholímetro portátil. Básicamente, ambos hacen uso del hecho de que el ratio
de alcohol en la sangre al alcohol en el aire en los alveolos es de aproximadamente 2100:1. El alcoholímetro
portátil está diseñado para capturar el aliento alveolar y medir el contenido de alcohol mediante la reacción
9
con una solución de dicromato de potasio, que resulta en una solución azul, la cual es posteriormente
analizada mediante un espectrofotómetro de rango visible.
1. Una muestra de aliento alveolar es recolectada. Se pide al sujeto que sople en el tubo del aparato.
El aliento eleva un pistón hasta la parte superior de su recorrido, por sobre dos orificios de venteo.
Cuando la persona deja de soplar, el pistón regresa a su posición predeterminada, atrapando una
porción del aliento, y cubre los agujeros de venteo. La cantidad de aliento capturado es de 56.5 ml.
2. La muestra de aliento capturado es pasado a una ampolla de test que consiste de dicromato de
potasio, agua y ácido sulfúrico. Después de que la muestra de aliento ha sido burbujeada en la
ampolla de test, se permite que transcurran 90 segundos para completar la oxidación de cualquier
alcohol que haya estado presente en la muestra. La siguiente ecuación describe la reacción química
que toma lugar en la ampolla:
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El dicromato de potasio que no ha reaccionado (color naranja) y el sulfato de cromo (de color
verde) se mezclan y forman una solución de color azul.
Para determinar quién dice la verdad, se le solicitará que enjuague su boca con un líquido con alcohol. No lo
ingiera. A intervalos de 5, 10, 15 y 20 minutos, realizará pruebas a su aliento utilizando el alcoholímetro
portátil.
6. PRE-LABORATORIO
Conteste las siguientes preguntas:
7. PROCEDIMIENTO
PROCEDIMIENTO
1. Encender el switch del Breathalyzer a la posición de “on” y esperar a que el termómetro muestre
una lectura de 50 ± 3°C. Esta temperatura indica que la cámara de la muestra y los tubos
conductores para el aliento se encuentran a una temperatura mayor a la del cuerpo. Esto previene
que se condense humedad del aliento.
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2. Medir dos ampollas selladas con el medidor provisto en el aparato. Cuando la ampolla se encuentra
en el medidor, el fondo del menisco debe encontrarse al nivel del tope del medidor, o ligeramente
sobre el mismo. Remover la ampolla del medidor.
3. Colocar una ampolla sellada en el compartimento izquierdo del instrumento.
4. Romper el sello de la otra ampolla, colocarla en el compartimento derecho del instrumento.
Conectar el tubo que inyecta el gas en la ampolla a la toma de gas externa del instrumento, de
caucho. Insertar el tubo en la ampolla.
5. Con el selector en la posición de “toma”, bombear aire en el tubo de muestra con un bulbo
atomizador por un espacio de 10 segundos. Durante este tiempo, la luz verde se encenderá,
indicando que la cámara se encuentra llena.
6. Encender el selector a la posición de “analizar”. Este aire pasará de la cámara y será inyectado a la
ampolla de prueba. La luz verde se apagará cuando el pistón deje la parte superior de su recorrido.
Al fondo del mismo, un contacto eléctrico se llevará a cabo y una luz roja se encenderá. Esto
debería tomar unos 25 a 35 segundos, aunque el tiempo no resulta una variable crítica.
7. Noventa segundos después de que la luz roja desaparezca, una lámpara verde que indica “lectura”
se encenderá. En este momento, encender la fuente de luz, y mover el nodo de balance al lado
derecho del panel hasta que el puntero del medidor nulo se encuentre en la línea del centro.
8. Establecer el medidor de escala en la posición de cero. En el Breathalyzer modelo 900, el nodo del
puntero debe ser jalado hacia el operador para ser liberado.
9. Insertar la boquilla en el tubo plástico de muestra. Esta es una medida precautoria para mantener
la saliva u otros líquidos fuera del instrumento; sin esta medida, el pistón podría tornarse pegajoso
y dar una medida baja.
10. Tornar el selector a la posición de “tomar”, y soplar en la boquilla. No es necesario que se respire
profundamente, pero el sujeto debe vaciar sus pulmones tanto como sea posible al dar la muestra.
11. Repetir el paso 6.
12. Después de una pausa de 90 segundos a partir del momento en que la luz roja se encienda, ajustar
el nodo de balance mientras que la luz fuente se encuentre encendida hasta que la aguja del
medidor nulo se encuentre centrada. El puntero mostrará el porcentaje de alcohol en la sangre.
Registrar la lectura.
13. Repetir los pasos 4 al 11, de manera que se sople en el Breathalyzer aproximadamente 5, 10, 15 y
20 minutos después de enjuagar la boca con alcohol. La misma ampolla de prueba puede ser
utilizada para cada prueba.
14. Registrar en qué momento el alcohol ya no es detectable en el aliento.
PARTE B. EL INTOXILYZER
Existen diversos modelos del Intoxilyzer. Todos de basan en la absorción de la radiación infrarroja del
alcohol en el aliento del sospechoso.
Figura 3
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una lectura de a 3.48 que en presencia solamente de etanol. El Intoxilyzer mide la frecuencia de
tensión asimétrica a 3.39 del grupo metilo, así como a la frecuencia de tensión asimétrica de 3.48
micrómetros. Un ratio de la intensidad de las dos frecuencias es utilizado para determinar si se está
midiendo únicamente etanol. Este ratio es ajustado a cerca de 1.0. El agua tiene una fuerte banda
simétrica de tensión del grupo a 2.74 adjacente a las bandas , que se traslapa levemente
con las frecuencias del grupo metilo. Inicialmente se supuso que este fenómeno no creaba interferencia
puesto que el aliento de una persona se encuentra saturado de agua, y se asumió que el hombro de
absorción sería constante. Sin embargo, se ha encontrado que este no es siempre el caso, por lo que un
tercer filtro fue adicionado para su corrección, a 3.80 La Figura 3 muestra el espectro de transmisión
infrarroja de etanol, acetona y agua como se muestra en la patente del instrumento.
PROCEDIMIENTO
Nota: el procedimiento de esta sección es específico para el modelo Intoxilyzer 5000.
Puesto que no se puede permitir que un estudiante consuma alcohol previo a efectuar la prueba, se le
pedirá que utilice un enjuague con contenido de alcohol, para posteriormente efectuar la prueba. El modelo
5000 detectará que no se trata de alcohol presente en los pulmones en base a su desaparición rápida, y así
lo indicará. Sin embargo, este procedimiento permitirá demostrar la operación básica del aparato. Esta es
una prueba típica de blanco (aliento-aire blanco). Como se verá, esta prueba es bastante sencilla de llevar a
cabo.
Lectura Significado
1. “Listo para Iniciar” Insertar una nueva boquilla al final del tubo para soplar. Para inicial la prueba,
oprimir el botón de inicio en cualquier momento.
2. “Insertar Tarjeta” Insertar una tarjeta de evidencia en la ranura para tarjeta (parpadeante)
localizada en el panel frontal del instrumento. Asegurarse de insertar la carta
con la cara superior hacia arriba y con el borde que lee “in”, de acuerdo a las
instrucciones impresas en la tarjeta.
3. “Blanco de Aire”
4. “Tiempo ##HR
##MIN”
5. “Fecha MM/DD/YY”
6. “Blanco de Aire
.000”
7. “>…”
8. “Por favor, soplar Solicitar al sujeto que sople en la boquilla hasta que el tono se detenga; el sujeto
en la boquilla hasta tiene tres minutos para proveer una muestra de aliento adecuada.
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que se detenga el
tono; por favor
soplar”
9. “Por favor soplar De manera que una muestra de aliento adecuada sea provista, el sujeto debe
.###” Seguido de soplar por un mínimo de 4 segundos. Mientras que el sujeto sopla en la boquilla,
“Por favor soplar el instrumento hace sonar un tono continuo y despliega un mensaje en su parte
0.###” izquierda: “Por favor soplar .###” El número de tres (u opcionalmente dos)
dígitos es la concentración medida de alcohol del sujeto medida como
porcentaje peso/volumen. El tono continuo indica que el sujeto está soplando
con suficiente presión. Cuando el cero aparece antes del valor BAC (0.###), el
sujeto ha provisto una muestra de aliento adecuada. No instruya al individuo,
sin embargo, a que deje de soplar al aparecer el 0. Si se muestra S5 como
“apagado” durante la prueba, el instrumento no mostrará el valor de la
concentración de alcohol en la sangre hasta que el sujeto termine de soplar,
habiendo provisto una muestra adecuada de aliento. El instrumento no
mostrará tampoco el 0 indicando que dicha muestra es adecuada.
Si el sujeto deja de soplar antes de probar una muestra suficiente, se mostrará
la señal de “Por favor soplar” y se escuchará un tono cada 5 segundos. Si esto
ocurre, pedir al sujeto que sople en la boquilla hasta que el tono se detenga.
En el evento de que el sujeto falle en proporcionar una muestra adecuada
dentro de un espacio de 3 minutos, se mostrará el mensaje de “Muestra
Deficiente”, acompañado por un tono bajo-alto que suena intermitentemente
por cinco segundos. A continuación, el instrumento desplegará “Prueba Sujeto
.###” (el BAC más alto alcanzable de las muestras de aliento) y completará la
secuencia. En la tarjeta de evidencia, el instrumento indica el BAC más alto
alcanzable imprimiendo un asterisco (*) antes del mensaje “Prueba Sujeto
.###”. El asterisco es una referencia al mensaje impreso al final de la tarjeta de
evidencia: “Muestra deficiente- valor impreso es el más alto obtenido”.
10. “Prueba a sujeto
.###”
11. “Blanco de Aire
.###”
12. “Prueba Remover tarjeta de evidencia después de que esta es liberada por el
Completada” instrumento.
13. “Listo para Iniciar”
9. DATOS Y OBSERVACIONES
Reporte los resultados obtenidos en función de los valores indicados en el alcoholímetro.
14
[1]. Borkenstein, R. F., Smith, H. W. The Breathalyzer and its Applications. Medicine, Science and the
Law. 2 (1962) pp. 13 a 22.Apellido, Nombre (Año).
[2]. Draeger Hispania. Manual de análisis de alcohol en el aire respirado. 2000. Madrid.
15
PRÁCTICA 4: PRÁCTICA 3: ANÁLISIS DE PLAGUICIDAS
ORGANOFOSFORADOS
Todo plaguicida tiene cierto grado de toxicidad para los humanos. Los efectos químicos que pueden matar
otras formas de vida son desde perjudiciales para la salud hasta letales. Los insecticidas ingresan al
organismo por vía digestiva, respiratoria o dérmica.
2. OBJETIVOS
Observar la presencia de insecticidas en diferentes muestras de alimentos.
3. MATERIALES Y EQUIPO
4 Beakers de 25 ml
4 Beakers de 100 ml
Papel Filtro
Embudos pequeños
Estufa de plato
Micropipetas o capilares sin heparina
Cromatoplacas de Silica gel
Pipetas de 5 ml
Perillas succionadoras para pipetas
Frascos para correr las placas
Asperjador o en su defecto frasco spray o gotero
Guantes
Masking Tape
N-Hexano
Acetona
25 ml de solución débilmente clorhídrica de cloruro de paladio al 0.5% (revelador)
Muestra de maíz
4. CONSIDERACIONES DE SEGURIDAD
Antes de la práctica consulte las Hojas de Seguridad de cada uno de los reactivos a manipular, utilice la
campana de extracción de gases. Utilice guantes de nitrilo, bata y lentes de seguridad durante toda la
práctica.
5. ANTECEDENTES
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Los insecticidas pertenecen a un grupo de sustancias denominadas plaguicidas, los cuales son sustancias o
mezclas de sustancias destinadas para prevenir o controlar toda especie indeseable de plantas y animales
(plagas).
El término plaguicida abarca además, cualquier sustancia que se emplea para combatir plagas durante la
producción, almacenamiento, transporte, comercialización o elaboración de alimento para el hombre y los
animales o se administre a estos últimos para combatir insectos o arácnidos que se encuentren dentro o
sobre su cuerpo.
Entre los plaguicidas más importantes se encuentran los insecticidas organofosforados. Su mecanismo de
acción consiste en ejercer su acción tóxica al combinarse con colinesterasas, inhibiendo a la
acetilcolinesterasa eritrocítaria y de los tejidos nerviosos.
Paratión (Tamarón)
Etilparatión (Folidol)
Metilparatión
Malatión
6. PRE-LABORATORIO
Contestar las siguientes preguntas:
1) Cuáles son los plaguicidas que más casos de intoxicación provocan en Guatemala?
2) El plaguicida identificado en la práctica de hoy, ¿a qué grupo de plaguicidas pertenece?
3) Investigue cuáles son los signos y síntomas más característicos de este tipo de intoxicaciones. No
olvide incluir referencias.
4) El análisis de cromatografía en capa fina desarrollado en la práctica ¿es un análisis cualitativo o
cuantitativo? ¿Por qué?
7. PROCEDIMIENTO
Extracción de plaguicidas organofosforados:
b. Procedimiento:
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Sembrar con una pipeta Pasteur en la cromatoplaca, la solución a investigar y la solución patrón. Dejar
secar.
9. DATOS Y OBSERVACIONES
Reporte los resultados obtenidos.
[2]. Lu FC (1995) A review of the acceptable daily intakes of pesticides assessed by the World Health
Organization. Regul. Toxicol. Pharmacol. 21: 351-364.
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PRÁCTICA 5: TEST CUALITATIVO DE MARIHUANA
2. OBJETIVOS
Evaluar la presencia de marihuana y sus derivados en muestras especificas mediante test de Duquenois-
Negm.
3. MATERIALES Y EQUIPO
EQUIPO
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Hojas o flores de marihuana.
Preparación del Reactivo de Duquenois:
4. CONSIDERACIONES DE SEGURIDAD
Previo a la práctica debe revisar las hojas de seguridad de cada uno de los productos a utilizar. Debe utilizar
bata, guantes de nitrilo y lentes de seguridad durante toda la práctica.
5. ANTECEDENTES
Uno de los tests cualitativos más ampliamente utilizados para la identificación de la marihuana es el test de
Duquenois-Negm, desarrollado en 1938. Éste test presenta un color púrpura como indicativo de la presencia
de marihuana. La prueba carece de especificidad, sin embargo, puesto que otras sustancias pueden también
producir el color púrpura al ser analizadas con el mismo test. La modificación de Levine del test de
Duquenois-Negm le hace bastante más específico. En el procedimiento modificado, solamente el color
púrpura debido a la presencia de marihuana es extraído con cloroformo. La marihuana es una de las pocas
sustancias que presenta esta extracción de color, y en esta forma, la versión modificada del test Duquenois
ha sido utilizada oficialmente desde 1941.
En el área encontrará el material extraído de la pipa etiquetado como Muestra A. LA Muestra B es tabaco de
pipa. La Muestra C esta constituida de hojas molidas pertenecientes a una pipa, del que se conoce que no es
marihuana. Deberá realizar el test Duquenois modificado en las tres muestras. Esto le permitirá comparar el
resultado entre el tabaco, una hierba desconocida y el material sospechoso. Efectúe cuidadosamente las
pruebas, puesto que los resultados serán tomados como evidencia en una situación real.
6. PRE-LABORATORIO
Contestar las siguientes preguntas:
Cuales métodos existen para el análisis forense de drogas? Describa e indique las ventajas y desventajas.
7. PROCEDIMIENTO
PARTE A. MARIHUANA, HIERBAS Y TABACO
1. Obtener una muestra del material que se sospecha es marihuana.
2. Obtener una muestra de tabaco y de la planta que se conoce que no es marihuana.
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3. Moler las hojas y colocar cada muestra por separado en un tubo de ensayo de 15 cm. Se debe
colocar aproximadamente 1 cm de muestra de material en cada tubo de ensayo.
4. Añadir 2 ml del reactivo de Duquenois a cada tubo de ensayo, mezclar para extraer el residuo.
5. Añadir 2 ml de ácido hidroclórico, mezclar, y dejar reposar por 10 minutos.
6. Observar y registrar el cambio de color de la solución en cada tubo de ensayo en el lugar adecuado
en la hoja de datos originales.
7. Añadir 2 ml de cloroformo a cada tubo de ensayo, agitar para mezclar el contenido.
8. Colocar los tubos de ensayo en la gradilla, y permitirlos reposar hasta que los líquidos se separen.
Anotar el color de la capa de cloroformo. Un color púrpura es un resultado positivo para el test en
presencia de marihuana.
9. Registrar todas las observaciones en la hoja de datos originales.
10. Lavar la cristalería, regresarla a su lugar de almacenamiento.
11. Completar la hoja de cálculos y responder a las preguntas. Entregar estos resultados al instructor de
laboratorio.
En este experimento, 10 mezclas de vegetación desconocida han sido preparadas en el laboratorio. Colocar
cada una de ellas en el microscopio estereoscópico y examinar cada espécimen por la presencia o ausencia
de marihuana. Las muestras contienen marihuana, orégano, hierba gatuna, o alguna mezcla de ellas.
Registrar los resultados.
9. DATOS Y OBSERVACIONES
Elabore una tabla indicando los resultados de las pruebas (positivas o negativas)
21
Indique la confiabilidad del método utilizado y su uso en análisis forense.
[2]. Pitt, C.G.; Hemdron, R.W.; Hsia, R.S. The specificity of the duquenois color test for Marijuana and
Hashish. J. Forensic Sci., 1972, 17(4), 693-700.
22
PRÁCTICA 6: ANÁLISIS DE DROGAS – TEST SPOT PARA CASOS GENERALES
Cuando se trae al laboratorio una muestra que se sospecha es una droga, una serie de pruebas spot son
realizadas en primera instancia para identificar la posible presencia de drogas y, en caso afirmativo, de qué
clase general es dicha sustancia. Diversas drogas formadoras de hábito pueden ser obtenidas en dosis
suficientemente pequeñas para no ser dañinas, y sin embargo encontrarse en concentración suficiente para
dar positivo en el test adecuado
2. OBJETIVOS
3. MATERIALES Y EQUIPO
Equipo
1 Beaker de 50 ml
1 Beaker de 250 ml
8 Frascos con gotero
1 par de Lentes de seguridad
1 Mortero y pistilo, pequeño
4 Placas con hendiduras, 3 por 4
1 Gradilla para frascos con gotero
6 Varillas de agitación de vidrio de 10 cm
3 Espátulas
Guantes desechables
Reactivos
4. CONSIDERACIONES DE SEGURIDAD
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Consulte las hojas de seguridad para el manejo adecuado y disposición correcta de los reactivos, utilice
bata, guantes de nitrilo y bata durante toda la práctica.
5. ANTECEDENTES
Si una droga se encuentra presente y se desea una identificación definitiva, entonces se puede llevar a cabo
un proceso de separación de capa fina, seguido de la obtención del espectro infrarrojo.
Reactivo de Marquis: usualmente se torna violeta en la presencia de alcaloides de opio, tales como heroína,
morfina y codeína. Las anfetaminas o estimulantes, tales como dextroanfetamina y metanfetamina, tornan
el reactivo de Marquis en un color café-rojizo.
Tiocianato de cobalto: para los alcaloides de coca, en particular la cocaína; se forma un precipitado azul
escamoso.
Test de Duquenois: forma un color púrpura en presencia de marihuana (ver práctica anterior).
Test de Dille-Koppanyi: utiliza acetato de cobalto e isopropilamina para testear presencia de barbitúricos. Un
color rojo-violeta es formado por el ácido barbitúrico y sus derivados. Estos son sedantes. Ejemplos de ellos
son el fenobarbital, secobarbital, amobarbital y el pentobarbital.
Reactivo de Mecke: ácido selenioso en ácido sulfúrico; se trata de un test alternativo para los alcaloides de
opio que devuelve una secuencia de cambios de color para cada alcaloide, tal como un color verde para la
codeína.
Tras la queja de un vecino, dos oficiales de policía llegan a una casa para calmar un disturbio. Lo que
observan en el lugar les produce la sospecha de que se han utilizado drogas. Obtienen diversas muestras de
un tazón de ponche en una mesa del cuarto y la traen al laboratorio. Su trabajo es entonces determinar si las
muestras contienen drogas, y en caso positivo, de qué tipo.
6. PRE-LABORATORIO
Haga un diagrama de flujo de proceso para la identificación y análisis de drogas de acuerdo a las
instrucciones en el procedimiento
7. PROCEDIMIENTO
Las muestras que se le proporcionarán pueden ser preparadas de alguna de estas drogas, o bien pueden ser
muestras reales. Su muestra desconocida puede contener cualquiera de las drogas listadas en la Tabla No. 1.
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Primeramente, deberá realizar cada uno de los tests indicados, posteriormente realizará los exámenes sobre
una o más muestras desconocidas.
1. Obtener una o más placas con hendiduras, acomodarlas de manera que sea posible realizar las
pruebas detalladas en la Figura No. 1. Se necesitará un total de 30 espacios en un arreglo de 6 x 5.
2. Obtener muestras conocidas del instructor de sustancias tales como:
a. Alcaloides de opio – codeína
b. LSD (si está disponible)
c. Anfetaminas – dexedrina
d. Alcaloides de coca – cocaína
e. Barbitúricos – nembutol
3. Tratar cada una de las muestras como sigue: colocar unos pocos cristales o gotas de la muestra en
cada una de las hendiduras de la placa (hendiduras 1 a 5 para los alcaloides de opio; 6 a 10 para los
alcaloides de coca; 11 a 15 para LSD; etc.), como se muestra en la figura 1.
4. Añadir unas pocas gotas del reactivo de Marquis en la primera hendidura (1, 6, 11, 16, 21 y 26).
Mezclar y observar los resultados. Registrar estos resultados en la hoja de datos originales. Un color
violeta es considerado un resultado positivo para alcaloides naturales de opio.
5. En la segunda posición (2, 7, 12, 17, 22, 27), añadir 3 gotas de Tiocianato de cobalto, esperar unos
pocos minutos. Si se forma un precipitado azul, añadir 3 gotas de cloruro de estaño y agitar. Este es
un test para drogas del tipo de la cocaína.
Registrar los resultados. La cocaína formará un precipitado no soluble en cloruro de estaño,
mientras que la novocaína será soluble.
6. En la tercera posición (3, 8, 13, 18, 23, 28), añadir 15 a 20 gotas de agua si la muestra se encuentra
en estado sólido. Añadir 10 gotas de la solución de p-DMAB. La formación de un color azul después
de 10 a 20 minutos es un resultado positivo para la presencia de LSD. Registrar los resultados.
7. En la cuarta posición (4, 9, 14, 19, 24, 29) añadir 20 gotas de solución de acetato de cobalto y
mezclar. Añadir después 10 gotas de solución de isopropilamina y mezclar. Un color rojo es
característico de los barbitúricos.
8. En la quinta posición (5, 10, 15, 20, 25, 30) añadir 10 gotas del reactivo de Mecke. Este reactivo
produce diferentes colores con cada droga, y usualmente el color cambia dos, tres o incluso cuatro
veces durante la prueba. Observar cuidadosamente y registrar los cambios. Referirse a la Tabla No.
1.
9. Repetir todas las pruebas anteriores en la muestra de droga desconocida. Tomar una decisión, y
registrarla en la hoja de datos.
10. Limpiar el equipo y almacenarlo en el lugar apropiado.
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Figura No. 1.- Arreglo en la placa con hendiduras para las pruebas en general
Reactivo de
p-DMAB Reactivo de Mecke
Marquis
Alcaloides de Opio 1 2 3 4 5
Alcaloides de Coca 6 7 8 9 1
0
LSD 1 1 1 1 1
1 2 3 4 5
Barbitúricos 1 1 1 1 2
6 7 8 9 0
Anfetaminas 2 2 2 2 2
1 2 3 4 5
9. DATOS Y OBSERVACIONES
En una tabla reporte los resultados de las pruebas realizadas a las muestras que se le proporciono indicando
si el resultado fue: POSITIVO, NEGATIVO o si existieron FALSOS POSITIVOS O FALSOS NEGATIVOS.
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Concluya sobre la confiabilidad de los tests en el análisis forense y la posibilidad de procesar como resultado
de la aplicación FALSOS POSITIVOS O FALSOS NEGATIVOS.
[1]. Drugs Working Group of the European Network of Forensic Science Institutes (ENFSI) and UNODC
(2009), Guidelines for representative drug sampling, disponible en:
www.unodc.org/unodc/en/scientists/guidelines-on-representative-drug-sampling.html).
[2]. Jackson, B.P. and Snowdon, D.W. (1968), Powdered Vegetable Drugs, J&A Churchill Ltd., London
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PRÁCTICA 7: ANÁLISIS CUALITATIVO Y CUANTITATIVO
En cualquier caso, al seleccionar los parámetros deberá tomarse la droga en cuestión y los recursos con los
que cuenta el laboratorio para el análisis.
2. OBJETIVOS
Utilizar un método de análisis cualitativo para muestras confiscadas con materiales sospechosos.
3. MATERIALES Y EQUIPO
Portaobjetos
Varilla de agitación
Ácido Clorhídrico
a) Reactivo 1: Disolver 1,0 g de tiocianato de cobalto en 50 ml de ácido acético al 10% (vol / vol), y
añadir 50 ml de glicerina.
b) Reactivo 2: Ácido clorhídrico (concentrado)
c) Reactivo 3: Cloroformo
4. CONSIDERACIONES DE SEGURIDAD
Precaución 1
Precaución 2…
5. ANTECEDENTES
Muestreo de sustancias sospechosas
El objetivo es conseguir que un análisis quimico sea preciso., y ya que los métodos cualitativos o cuantitavios
que usan los laboratorios forenses disponen de porciones de material muy pequeños, es importante que las
porciones sean representativas de la masa de la que han sido extraidas. El muestreo debe realizarse con
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arreglo a los principios que determinan las farmacopeas. Tambien puede considerarse un método de
muestreo descrito en: Guidelines on Representative Drug Sampling (http://www.unodc.org/
unodc/en/scientists/publications_manuals.html).
Los ensayos presuntivos son procedimientos rápidos diseñados para indicar la la presencia o ausencia de
determinadas clases de drogas en la muestra y eliminar rápidamente las muestras negativas.
los ensayos del color los resultados positivos únicamente son indicios de la posible presencia de cocaína. Las
reacciones del color se deben a compuestos que tienen una estructura química concreta. Sin embargo el
color obtenido en un determinado ensayo puede variar en función de las condiciones en que se realiza, la
cantidad de sustancia empleada y la presencia de material extraño en la muestra.
Los ensayos del color utilizados para determinar la cocaína son especialmente propensos a dar falsos
positivos.
6. PRE-LABORATORIO
Consulte las referencias descritas en la sección de antecedentes y proponga dos métodos de muestreo de
sustancias sopechosas.
7. PROCEDIMIENTO
PARTE A: Ensayo de Scott
Método
1. Colocar una pequeña cantidad (no más de 1 mg) del material sospechoso en un tubo de ensayo. Añadir
cinco gotas del reactivo 1 y agitar el tubo de ensayo durante diez segundos. La cocaína y sustancias
conexas producen un precipitado azul y una solución azul.
2. Añadir una gota del reactivo 2 y agitar la mezcla durante algunos segundos. La solución azul debería
volverse rosa. Si el color azul no varía, añádase otra gota. Si el color sigue sin alterarse, repetir el ensayo
con una muestra más pequeña de material sospechoso.
3. Añadir cinco gotas del reactivo 3 y agitar. Si hay cocaína presente, la capa inferior de cloroformo se
volverá de un intenso color azul, mientras que la capa superior adquirirá una tonalidad rosa.
OBSERVACIONES: Es importante utilizar una muestra inferior a 1 mg. Tomar en cuenta que la relación entre
la cantidad utilizada de los reactivos 1 y 2 sí lo es. Si agrega una cantidad excesiva de ácido clorhídrico al
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reactivo 1 después de aparecer el color azul con la cocaína, la solución resultante será de color azul en lugar
de rosa.
La actividad biológica de la cocaína no posee un olor característico, sin embargo cuando se mezcla con
algunos reactivos específicos existe una transferencia de la función benzoica de la cocaína desde la
metilecgonina al metanol y que se logra en presencia de hidróxido sódico o potásico metanólico seco. La
evaporación del exceso de metanol deja un residuo que contiene benzoato metílico el cual resulta
fácilmente identificable por su olor.
Reactivo
Disolver 1 g de potasio o de hidróxido sódico en 20 ml de metanol para obtener hidróxido sódico o potásico
metanólico.
Método
1. Colocar dos gotas de la solución muestra (unos 2 ó 3 mg de muestra / 5 gotas de ácido clorhídrico al
10%) en un portaobjetos de microscopio limpio.
2. Colocar dos gotas del reactivo cerca de las gotas de muestra y utilizar una varilla de agitación para
crear un pequeño canal que conecte ambas soluciones.
3. Observar la reacción y los cristales resultantes, sin colocar un cubreobjetos, a una ampliación de
entre 100 y 200 aumentos en un microscopio.
Observaciones:
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Disponga los residuos en los recipientes rotulados para el efecto.
9. DATOS Y OBSERVACIONES
Registre los datos y observaciones realizadas durante la práctica.
[2]. Rapid Testing Methods of Drugs of Abuse (ST/NAR/13/REV.1), United Nations, New York (1995).
[3]. Tsumura, Y., T. Mitome y S. Kimoto, False positives and false negatives with a cocaine-specific field
test and modification of test protocol to reduce false decision. Forensic Science International, 155
(2005), 158-164.
[4]. 11. Grant, F. W., C. Martin y R. W. Quackenbush, A simple sensitive specific field test for cocaine
based on the recognition of the odour of methyl benzoate as a test product. Bulletin on Narcotics,
27 (1975), 33-35.
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PRÁCTICA 8: IDENTIFICACIÓN DE DROGAS EN GENERAL CON KITS ESPECÍFICOS
2. OBJETIVOS
Reconocer los kits comerciales usados para realizar pruebas presuntivas de drogas en general.
Evaluar los resultados de las pruebas (positivas, negativas, falsos positivos o falsos negativos)
previo a decidir a qué tipo de análisis final serán sometidos los indicios físicos.
3. MATERIALES Y EQUIPO
Muestras de material sospechoso
Kit varios de análisis rapido de drogas
4. CONSIDERACIONES DE SEGURIDAD
Disponga del material utilizado en el lugar que le indique el instructor, deseche los guantes en los
recipientes destinados para ello, deje limpio su lugar de trabajo. Antes de salir lávese las manos con
abundante agua y jabón.
5. ANTECEDENTES
Disponga del material utilizado en el lugar que le indique el instructor, deseche los guantes en los
recipientes destinados para ello, deje limpio su lugar de trabajo. Antes de salir lávese las manos con
abundante agua y jabón.
6. PRE-LABORATORIO
Contestar las siguientes preguntas:
1. Cuál es la composición química de los kits comerciales utilizados para identificación de drogas?
2. Qué ventajas tiene el uso de los kits comerciales? Que desventajas?
3. Que aporte tiene este tipo de kit comerciales a la investigación y análisis de indicios físicos?
7. PROCEDIMIENTO
1. Seleccione la muestra que va a analizar
2. El instructor le proporcionara los kits comerciales para proceder a la identificación de los fluidos
3. Revise el instructivo de aplicación según indique cada kit y repítalo en el orden indicado
4. Anote los resultados
5. Repita el procedimiento con una muestra que contenga una muestra de origen desconocido y
compárelo con las muestras que tienen los otros equipos de trabajo.
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8. LIMPIEZA Y DISPOSICIÓN DE RESIDUOS
Disponga del material utilizado en el lugar que le indique el instructor, deseche los guantes en los
recipientes destinados para ello, deje limpio su lugar de trabajo. Antes de salir lávese las manos con
abundante agua y jabón.
9. DATOS Y OBSERVACIONES
Anote lo que observo durante la práctica de aplicación de los kits comerciales. En forma de tabla presente
los resultados obtenidos, incluyendo los resultados de la muestra desconocida.
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