INFORME : ANÁLISIS INSTRUMENTAL.

Nº DE PRÁCTICA : 02
TITULO : ELABORACIÓN DE CURVAS DE CALIBRACIÓN
ESPECTROSCOPICA Y SU APLICACIÓN ANALITICA
ALUMNOS :
PILLMAN CABANA, Daniel
HUACCACHI LLACCSA, Cesar
GRUPO : Miércoles 7 a 10am
MESA : Nº 04
PROFESORA DE PRACTICA : ALCARRAZ ALFARO, Tarcila.

ELABORACIÓN DE CURVAS DE CALIBRACIÓN ESPECTROSCOPICA Y SU APLICACIÓN ANALITICA

I. OBJETIVOS:
 Elaborar curvas de calibración espectroscópica y observar el cumplimiento de la ley de Beer.
 Determinar la cantidad de hierro en una muestra mineral expresado en molaridad y porcentaje
en peso y el contenido de nitrato en muestras de agua, expresado en ppm.
 Observa el funcionamiento y los principios espectrofotómetros visibles y UV.

II. FUNDAMENTO TEORICO:

CALIBRACIÓN DE INSTRUMENTOS UTILIZADOS EN EL ANÁLISIS QUÍMICO INSTRUMENTAL.

Calidad de una Calibración.

La calidad de la determinación de una concentración no puede ser mejor que la calidad intrínseca de la
calibración. Los factores que determinan la calidad de una calibración son:
La precisión de las medidas:
Estimada a través de la repetitividady la reproducibilidadde las medidas. La repetitividad se evalúa a
través del cálculo de la desviación estándar relativa
(RSD%) de la medida de los patrones de calibrado. En la práctica puede ocurrir que la repetitividad para
los patrones sea más pequeña que para las muestras, por lo que será necesario fabricar patrones
similares a las muestras o agregar el analito a las mismas.
Exactitud de los patrones.
El valor de concentración o masa asignado a cada patrón trae aparejado un error pequeño si es
preparado a partir de reactivos puros (grado analítico) con estequiometria bien definida. Este error en
general se desprecia, frente al error en las medidas de las señales producidas por el instrumento.
Modelos de calibración.
La forma de calibración más sencilla es la que utiliza un solo patrón. Este modelo es útil sólo cuando el
patrón es absolutamente confiable. Además, se supone que la señal cero del instrumento corresponde
al cero de concentración de la especie que se quiere determinar. Entre el cero y valor obtenido para el
patrón se realiza una interpolación lineal, pero la extrapolación más allá de la concentración de patrón
no es recomendada. El modelo correspondiente es:

Señal = constante x concentración

y=mx

La constante m es llamada sensibilidady corresponde a la constante de proporcionalidad entre laseñal y

la concentración. Esta proporcionalidad es útil sobre un restringido intervalo de valores.
A valores muy bajos de concentración la señal es demasiado pequeña y está sujeta a una
granincertidumbre. A valores muy altos la proporcionalidad dada en ecuación (3) puede dejar de
serválida. Este modelo es utilizado en muy pocos casos.
Si la respuesta a concentración cero de analito no es conocida de antemano, es necesariauna calibración
con un mínimo de dos puntos. Para esta calibración se utiliza un modelo linealcon un término constante:

Señal = señal del blanco + constante x concentración

y=b+mx

El término b indica la magnitud de la señal estimada del blanco, mientras que m es la pendientede la
recta de calibrado e indica nuevamente la sensibilidad.
Estadísticamente, una calibración realizada a partir de dos puntos es muy pobre ysu construcción a
partir de un número mayor de patrones es obligatoria. El procedimientoestadístico para determinar los
coeficientes b y m de la ecuación (4) se denomina regresión porcuadrados mínimos. La regresión por
cuadrados mínimos es una herramienta muy útil, sinembargo, deben conocerse sus limitaciones.
Además de la regresión por cuadrados mínimossiempre debe hacerse una inspección gráfica de los
datos obtenidos, para detectar puntosanómalos o fallas en la linealidad. Las ecuaciones mediante las
que se obtienen los coeficientesde la ecuación (4) se detallan en la próxima sección.

NITRATO EN AGUA POTABLE

¿Cómo puedo saber si mi agua de pozo tiene nitrato?

Los pozos poco profundos, mal sellados o construidos o los pozos que extraen agua de acuíferos poco
profundos tienen riesgo más alto de tener agua contaminada con nitrato. El abono (estiércol) y los
desechos de un tanque séptico pueden también contener bacterias y virus que causan enfermedades.
Si es usted el dueño de un pozo privado y no está seguro de la calidad del agua, debería hacerla analizar
por bacterias y nitrato. El departamento de salud de su condado puede decirle en donde obtener el
análisis de su agua y pudiera tener recomendaciones específicas para el análisis.
Muchos laboratorios certificados en cobran entre 20 y 40 dólares por análisis. Si el resultado del análisis
de nitrato es de más de 8 mg/L, recomendamos hacer análisis anuales. Si los resultados son menores de
8 mg/L, recomendamos hacer análisis cada tres años. (También vea Información
Importante para dueños de pozos privados, DOH Pub. #331-349)

¿Cómo puede entrar el nitrato en mi pozo de agua?

El nitrato es un químico que se encuentra en la mayoría de los fertilizantes, en el abono

(estiércol) y en los desechos líquidos liberados de los tanques sépticos. Las bacterias naturales en la
tierra pueden convertir el nitrógeno en nitrato. El nitrato puede ser transportado por la lluvia o por el
agua de riego, a través de la tierra y el agua subterránea. Si su pozo extrae agua de estas aguas
subterráneas podría contener nitrato.
¿Cómo afecta a la salud el nitrato?

El nitrato es un contaminante agudo, lo que significa que una sola exposición puede afectar la salud de
una persona. El nitrato reduce la capacidad de las células rojas de la sangre de llevar oxígeno. En la
mayoría de los adultos, niños y niñas estas células rojas vuelven rápidamente a su estado normal. Sin
embargo, en los recién nacidos puede tardar mucho más para que las células rojas vuelvan a la
normalidad. Como resultado, los recién nacidos que toman agua con niveles elevados de nitrato (o que
comen alimentos hechos con agua contaminada con nitrato) puede desarrollar una condición de salud
seria debido a la falta de oxígeno. Esta condición se llama metahemoglobinemia o “síndrome del bebé
azul.” Algunos científicos piensan que la diarrea puede empeorar este problema.
El nitrato en el agua no tiene un efecto duradero en su bebé. Si su bebé no tiene ninguno de los
síntomas del “síndrome del bebé azul” usted no tiene que hacer que el doctor haga análisis de
metahemoglobinemia.

¿Cómo se regula el nitrato en el agua potable?

El estándar de nitrato en agua potable en Washington es de 10 miligramos por litro (mg/l), o 10 partes
por millón (ppm) de nitrato. La ley estatal requiere que los sistemas de agua públicos tomen
regularmente muestras de varios contaminantes, incluyendo el nitrato. Si usted es dueño de un sistema
de agua privado, usted es responsable de tomar muestras. Sistemas de agua públicos con niveles de
nitrato mayores de 10 ppm deben notificar a las personas que reciben el agua.

III. EQUIPOS Y MATERIALES:

 Espectrofotómetro.
 Vasos precipitados.
 Fiolas.
 Luna de reloj.
 Espátula.
 Embudo simple.
 Papel filtro
 Pipeta graduada.
 Probeta graduada.
 Pipeta volumétrica

IV. REACTIVOS:

 Muestra problema de Hierro.

 Acido sulfosalicilico
 Nitrato de potasio KNO3
 Solución de HCL 1N.
 Muestras de agua (potable, embudo).
EQUIPOS:

 Balanza analítica
 Estufa eléctrica
 Espectrofotómetro
 Espectrofotómetro UV
V. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL:

ENSAYO 1: DETERMINACION DE HIERRO CON ACIDO SULFOSALICILICO

a) Principio: El Fe (II) forma un complejo coloreado (lila hasta violeta) con el acido sulfosalicilico,
cuya absorbencia a 500nm es útil para determinación espectro métrica. Para evitar la hidrolisis
del complejo la medición debe realizarse a pH=10
b) Reactivos:
 Solución patrón de hierro (III) 0.01M en HClO4 0.1M
 Solución 0.1M de HClO4
 Solución 0.01M de acido sulfosalicilico en HClO4 0.1M
c) Procedimiento:
1. Para la curva de calibración
 Diluir 1:1 la solución patrón con HClO4 0.1M y medir de esta ultima a fiola de
50mL, volúmenes de 1, 2,3, 4 y 5mL. Rotular
 Agregar 30mL de acido sulfosalicilico a cada fiola, mezclar bien y enrazar con
HClO4 0.1M.
 Homogenizar y dejar en reposo por espacio de una hora, para desarrollar el
color.
 Leer el las absorbencia a 500nm de longitud de onda y utilizando un blanco
para calibrar el equipo. El blanco solo debe contener acido sulfosalicilico y
HClO4 0.1M en la misma proporción de los patrones.
2. Preparación de la muestra
 Pesar 0.25g de muestra pulverizada y disolver con 15mL de HCl (1:1) y 2mL de
HNO3c en vaso precipitado. Ebullir en forma suave, tapado el vaso con una
luna de reloj, hasta que cese de desprender NO2.
 Enfriar, enjuagar la luna y las paredes del vaso hacia el vaso.
 Filtrar directamente a una fiola de 100mL, recuperando la solución coloreada
del vaso, papel de filtro con agua destilada. Enrazar con HClO4 0.1M.
 Medir 2mL de esta solución a una fiola de 50mL, agregar 30mL de acido
sulfosalicilico, mezclar, enrazar con HClO4 0.1M, homegenizar y medir su
absorbencia igual que de los patrones.
d) Cálculos:
 Elaborar la curva de calibración, graficando A Vs C(molaridad)) y realiza el ajuste de
recta, si es necesario.
 Determinar desde la grafica el contenido de hierro en la muestra en M y %(P)
 Calcular la precisión de la determinación, teniendo en cuenta los resultados de las
otras mesas de trabajo.
  Realizar los cálculos para preparar las soluciones utilizadas.

Hallando primero los cálculos previos para preparar las soluciones antes de iniciar con la práctica:
Donde:
PM: peso molecular (g/mol); %p: porcentaje en peso (%); M: molaridad (g/mol)
V: volumen (mL o L); ρ: densidad (g/mL); m: masa (g)

Solución de FeCl3 0.01M en 100mL

𝑚(FeCl3) = PM ∗ V ∗ M Remplazando obtenemos

270.30g 0.01mol
𝑚(FeCl3) = ∗ 0.1L ∗ = 0,2703g
mol L

Solución de HClO4 0.1 M en 1L

V = PM* V * M remplazando obtenemos

%p* ρ

V = (100.47g/mol * 1L * 0.1mol/L)/(0.70*1.620g/ml) = 8,86mL

Solución de acido sulfosalicilico 0.01M en 500mL

𝑚(𝐻𝑠𝑜𝑙𝑓) = 𝑀 ∗ 𝑝𝑚(𝐻𝑠𝑜𝑙𝑓) ∗ 𝑉(𝑠𝑜𝑙) Remplazando obtenemos

0.01𝑚𝑜 254.22𝑔
𝑚(𝐻𝑠𝑜𝑙𝑓) = ∗ ∗ 0.5𝐿 ∗ 0.995 = 1.2647𝑔
𝐿 𝑚𝑜𝑙

HCl 1N en 50mL
PM∗ V ∗ N
𝑉(𝐻𝐶𝑙) = Remplazando obtenemos
%p∗ ρ
36.5g mol
∗ 50mL ∗ 1
mol L
𝑉(𝐻𝐶𝑙) = 1.18g = 4,18mL
0.37∗
ml

Hallando la concentración de la muestra patrón, utilizando esta relación de ecuación.

Co ∗ Vo = C1 ∗ V1
0.01Mx25mL
Co = = 0.005M
50mL
Utilizando la misma relación de ecuación y con la misma analogía hallemos las concentraciones para
volúmenes de 1, 2, 3, 4 y 5mL, aquí un ejemplo. Los resultados de los restos se muestran en la siguiente
tabla.
0.005Mx1mL
C1 = = 0.0001mol/L
50mL
Tabla 1.1: datos obtenidos del laboratorio y del cálculo
Volumen de sol. Mesa de Acido HCH 0.1M (mL) Absorbencia a Absorbencia Concentración
patrón (mL) trabajo sulfosalicilico enrazado 500nm de la muestra (mol/L)

1 1 30 50 0.146 0.071 0.0001

2 2 30 50 0.279 0.047 0.0002
3 3 30 50 0.428 0.070 0.0003
4 4 30 50 0.534 0.082 0.0004
5 30 50 0.730 0.0005

Grafica1: absorbencia Vs concentración y haciendo el ajuste de recta.

GRAFICA 1: ABSORVANCIA Vs CONCENTRACION

0.8
0.7
ABSORVANCIA A 50nm

0.6 y = 1423x - 0.0035

R² = 0.9923
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
0 0.0001 0.0002 0.0003 0.0004 0.0005 0.0006
CONCENTRACION (mol/L)

En la siguiente tabla se muestra la absorbencia de las muestras a 500nm y las concentraciones de cada
grupo de trabajo. Aquí un ejemplo de mesa 1 como calcular la concentración de las muestras y la misma
analogía para los demás grupos.
De la relación.
Y= 1423x– 0.003
A = 1423C- 0.003………….I
(A+0.003)/1423 = C………..II

0.071 + 0.003
C1 = = 0.0000524mol/L
1423
Tabla1.2: absorbencia de la muestra y la concentración
MESA masa inicial(g) Absorbencia Concentración
500nm (mol/L)

1 0.2703 0.071 5.24E-05

2 0.2508 0.047 3.55E-05
3 0.2540 0.070 5.17E-05
4 0.2570 0.082 6.01E-05

Para graficar se toma el dato de la tabla 1.1 y el dato de la tabla 1.2.

Grafica 2: absorbencia de la muestra y la concentración

GRAFICA 2: absorvancia de lamuestra Vs concentracion

0.8

0.7
y = 1421.8x - 0.0031
0.6 R² = 0.9968
ABSORBANCIA

0.5

0.4

0.3

0.2

0.1

0
0.00E+00 1.00E-04 2.00E-04 3.00E-04 4.00E-04 5.00E-04 6.00E-04
CONCENTRACION (mol/L)

Ahora calculando la masa de fierro con las concentraciones calculadas que se reporto en la tabla1.2
como se muestra en la en siguiente tabla.
Ejemplo:
m(Fe + 2) = PM ∗ V ∗ M Remplazando obtenemos
55.85g 0.0000524mol
m(Fe + 2) = ∗ 0.1L ∗ = 0.000291g
mol L
0.0002913
%P = ∗ 100 =
0.2703
Tabla 1.3: determinación de la masa de hierro y el porcentaje de peso.
masa inicial (g) Concentración (mol/L) de Masa de hierro en (g) Porcentaje en peso (%P)
hierro

0.2703 5.24E-05 0.000291 0.10765816

0.2508 3.55E-05 0.000198 0.07894737
0.2540 5.17E-05 0.000289 0.11377953
0.2570 6.01E-05 0.000335 0.13035019
Calculando la precisión y exactitud con el resultado que se reporto en la tabla 1.3
En este caso como valor teórico se esta tomando el dato 0.10765816g
Tabla 1.4: determinación de precisión y exactitud de hierro en %P
%P de hierro
0.10768381
∑ 𝑋𝑖
𝑥̅ =
Promedio 𝑛

0.021422
Desviación √∑(𝑋𝑖 − 𝑥̅)^2
estándar 𝑠=
𝑛−1

19.8934282
Coeficiente de 𝑠
𝑐𝑣 = ∗ 100
variación 𝑥̅

0.02382385%
Error relativo (𝑉𝑟 − 𝑉𝑝)
𝐸𝑟 = ∗ 100
𝑉𝑟

80.1065718%
Precisión 𝑝𝑟𝑒𝑐𝑖𝑐𝑖𝑜𝑛 = 100 − 𝑐𝑣
99.9761761%
Exactitud 𝑒𝑥̅𝑎𝑐𝑡𝑖𝑡𝑢𝑑 = 100 − 𝐸𝑟

En este caso el exactitud se próxima al 100% mientras que precisión se aleja demasiado

ENSAYO 2: DETERMINACION DE NITRATO EN MUESTRAS DE AGUA:

a) Principio: Técnica recomendada para muestras de agua no contaminada (bajo contenido de

materia orgánica: aguas naturales) y agua potable. La ley de Beer cumple su linealidad 11mg/L.
Se mide la absorbancia de nitrato en el rango UV a 220nm y como también la materia orgánica
absorbe a esta longitud de onda se realiza una segunda medición a 275nm, donde nitrato no
absorbe, para ser la corrección correspondiente que dependerá de la naturaleza y
concentración de la muestra orgánica.
b) Reactivos:
 Solución stock de nitrato de potasio: pesar 0,1805g de KNO3 previamente secado a 105ºC por
24 horas, disolver y enrazar en una fiola de 250mL. Agregar 0,5mL de cloroformo como
preservante.
 Solución intermedia de nitrato de potasio: Diluir 5m L de la solución anterior a 50m L.
 Solución de HCl 1N.

c) Procedimiento:
 C.1. Para la curva de calibración:
 Se transfirió 1; 3; 5; 7 y 10mL de solución intermedia a fiolas de 50mL y enrazamos todas
con agua destilada.
 Agregamos a cada fiola 1mL de HCl 1N y homogenizamos.
 Leímos sus absorbancias a 220 y 225nm, calibramos el espectrofotómetro UV con un
blanco que contenga agua destilada y HCL1N en la misma proporción.

c.2. Para las muestras:

 Tomamos las muestras de agua `potable y medimos 50mL en una fiola, agregamos 1ml de HCl
1N, homogenizamos y medimos su absorbancia a 220y 225nm.
 Filtramos una muestra de agua contaminada, medimos 50mL, agregamos 1ml de HCL 1N,
homogenizamos y leímos sus absorbancias igual que el anterior.

Tabla 2.1: datos obtenidos en el laboratorio de química instrumental

Nº PATRON (NO3) + AGUA DESTILADA + HCl (1N) A (220nm) A (275nm)
1 1mL 50mL 1mL 0.070 0.021
2 3mL 50mL 1mL 0.160 0.020
3 5mL 50mL 1mL 0.244 0.026
4 7mL 50mL 1mL 0.322 0.023
5 10mL 50mL 1mL 0.464 0.027
6 Agua potable 50mL 1mL 0.096 0.035
7 Agua de bidón 50mL 1mL 0.141 0.057

Calculando la concentración inicial para solución stock (KNO3)

Datos:

𝑚 = 0,1805𝑔

𝑉 = 250𝑚𝐿

𝑚
𝑝𝑝𝑚(KNO3) =
𝑉
Calculando la masa de nitrato NO3- por gravimetría
N03−
m(NO3 −) = x mKN03 Remplazando obtenemos
KN03

46.008
m(NO3 −) = x 0.1805g = 0.0976g
85.11

0.0976𝑔 1000𝑚𝑔
𝑝𝑝𝑚(NO3−)o = ∗
0.25𝐿 1𝑔

𝑝𝑝𝑚(NO3−)o = 390.4mg/L

Calculando la nueva concentración para la solución intermedia de (NO3-), cuando se toma 5ml de la
solución stock, este se diluye en 50mL

Cumple la relación como se muestra.

𝒑𝒑𝒎(𝐍𝐎𝟑−)𝐨 ∗ 𝑽𝒐 = 𝒑𝒑𝒎(𝐍𝐎𝟑−)𝐢𝐧𝐭 ∗ 𝑽(𝒊𝒏𝒕) Remplazando obtenemos

mg
390.4 L ∗5mL
𝑝𝑝𝑚(NO3−)int =
50mL
𝑚𝑔
𝑝𝑝𝑚(KNO3)int = 39,04 , con este resultado podemos calcular de forma similar para los demás
𝐿

concentraciones, utilizando la relación anterior, como se muestra en la tabla siguiente los resultados
para cada una de la solución a 50mL.

Tabla 2.2: concentración de cada solución patrón

Concentración de (NO3)
Nº PATRON (NO3) - –
( ppm)
1 1mL 0.7808
2 3mL 2.3424
3 5mL 3.904
4 7mL 5.4656
5 10mL 7.808

CORRIGIENDO LAS ABSORBANCIAS: como se muestra a continuación

𝑨(𝒄𝒐𝒓𝒓𝒆𝒈𝒊𝒅𝒂) = 𝑨𝟐𝟐𝟎 − 𝟐 ∗ 𝑨𝟐𝟕𝟓

 Tabla 2.3: absorbencia corregida
PATRON (NO3-) + AGUA DESTILADA + HCl (1N) A (220nm) A (275nm) A
(corregida)
1mL 50mL 1mL 0.070 0.021 0.028
3mL 50mL 1mL 0.160 0.020 0.12
5mL 50mL 1mL 0.244 0.026 0.192
7mL 50mL 1mL 0.322 0.023 0.276
10mL 50mL 1mL 0.464 0.027 0.41
Agua potable 50mL 1mL 0.096 0.035 0.026
Agua de bidón 50mL 1mL 0.141 0.057 0.027

GRAFICANDO A (corregida) Vs CONCENTRACION (ppm)

CONCENTRACION (ppm) A(corregida)

0.7808 0.028

2.3424 0.12

3.904 0.192

5.4656 0.276

7.808 0.41

GRAFICA A(corregida) vs CONCENTRACION (ppm)

9
8 y = 18.611x + 0.2413
CONCENTRACION (ppm)

R² = 0.9987
7
6
5
4
3
2
1
0
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5
ABSORBANCIA CORREGIDA

𝑦 = 𝑚𝑥̅ − 𝑏 Ecuación lineal de una recta

 𝑦 = 18.61𝑥̅ + 0.241
C(NO3-) = 18.61A + 0.241
Ahora calculando para agua potable y agua estancada, las concentraciones
Para agua potable
C(NO3 −) = 18.61 ∗ 0.026 + 0.241=0.72486mg/L
Para agua del bidón
C(NO3 −) = 18.61 ∗ 0.027 + 0.241 =0.74347mg/L

0.72486
0.74347

VI. CONCLUSIONES:

 Se aprendióa elaborar curvas de calibración espectroscópica y se observo el cumplimiento de la

ley de Beer.
 En el ensayo 1 se determino la precisión y exactitud.
 Se logro determinarla cantidad de hierro en la muestra mineral expresado en molaridad y
porcentaje en peso.
 se logro determinar el contenido de nitrato en muestras de agua, expresado en ppm.
 Se logro observar el funcionamiento y los principios de los espectrofotómetros visibles y UV.
 En cada ensayo se explico de manera detalla con tablas y graficas para mayor entendimiento.

VII. RECOMENDACIONES:

 Verificar el manual del espectrofotómetro para tener una buena lectura.

 Preparar bien las soluciones y hacer bien los cálculos.
 Prestar atención a las indicaciones del profesor a las indicaciones que se da sobre los equipos.
 Hacer una buena lectura y preparar bien las soluciones, ya que estos errores serán reflejados
en la precisión como nos sucedió en la exactitud ya que el valor nos salió muy bajo.
 La preparación de la solución patrón tiene que ser al instante ya que el fierro tiende a oxidarse
a Fe (III).
 Por ultimo tener en cuenta bien las normas del laboratorio
VIII. CUESTIONARIO:

1.-Averigue los límites máximos permisibles de nitrato en agua potable y agua natural y
Comente los resultados obtenidos.
 PARAMETRO PARA SUSTANCIAS NO DESEADA
PARAMETRO VALOR RECOMENDADO (mg/L) VALOR MAXIOMO ADMISIBLE
Nitratos 25 50
Nitritos
Amonio 0.05 0.5
Hierro 0.3
Manganeso 0.1 0.5
Fluoruro 0.7 1.5
Sulfuro de Hidrogeno 0.05

Nitritos: Valor máximo admisible es de 0,1 o 3,0.

Si se escoge el valor de 3,0 debe relacionarse el nitrato y nitrito por la formula.

[𝑁𝑂3− ] [𝑁𝑂2− ]
+ <1
𝑉. 𝑅. 𝑁𝑂3− 𝑉. 𝑅. 𝑁𝑂2−

NOTA: V.R. = Valor Recomendado.

IX. BIBLIOGRAFIA:

 http://www.foodcolors.net/contactos.html
 www.google.com
 http://es.wikipedia.org/wiki