UNIDAD DIDÁCTICA: MÉTODOS Y TÉCNICAS EN

ANATOMÍA PATOLÓGICA

BATERIA DE
COLORACIÓN II
LIC. ROBERTO GONZALES HERRERA
CTMP 10346
BATERIA DE COLORACIÓN II
4. Tinción citoplasmática
5. Deshidratación
6. Aclaramiento
7. Montaje
* Control de Calidad
 Preparación de Hematoxilina
Ejercicio
• Los contenedores de Hematoxilina para la coloración de
H-E del servicio de Anatomía Patológica de cierta Clínica se
requiere como mínimo 1,2 L para tener cubierto
completamente las láminas a colorear, calcular cuánto de
colorante Hematoxilina así como demás insumos se
necesitará para asegurarnos que toda la batería de
coloración sea cubierta.

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 Preparación de Hematoxilina
Resolución:

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 Preparación de Hematoxilina
Coloración:

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 4. EOSINA
Finalidad:
• Coloración citoplasmática
Conceptos
• Son xantenos ácidos o colorantes de ftaleína
• Más comunes: Eosina Amarilla (más utilizada), Eosina B (azul),
Floxina, Eritocina, Zafranina, Rosa de Bengala
• Se acentúa más su acción con el uso de ácido acético glaciar

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4. EOSINA
Preparación:

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 Preparación de Eosina para uso
Ejercicio
• Los contenedores de Eosina para la coloración de H-E del
servicio de Anatomía Patológica de cierta Clínica se
requiere como mínimo 1,8 L para tener cubierto
completamente las láminas a colorear, calcular cuánto de
colorante de eosina así como demás insumos se
necesitará para asegurarnos que toda la batería de
coloración sea cubierta.

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 Preparación de Eosina
Resolución:

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 Preparación de Eosina
Coloración:

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 5. DESHIDRATACIÓN ALCOHÓLICA
Finalidad:
• Deshidratación en escala Ascendente de Alcoholes
Método:
• Se enfrenta tejido desparafinizado en ALCOHOLES (Etílico)
en escala ASCENDENTE de CONCENTRACIÓN

Agua destilada – 70° - 80° - 90° - 100°

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 Preparación de Alcoholes: C1 x V1 = C2 x V2
Ejercicio
• Los contenedores de alcohol para la coloración de H-E del
servicio de Anatomía Patológica de cierta Clínica se
requiere como mínimo 2,2 L para tener cubierto
completamente las láminas a colorear, se dispone solo de
alcohol absoluto en presentación de galón de 4lt, calcular
cuántos galones de alcohol absoluto se necesitarán para
asegurarnos que toda la batería de coloración sea cubierta
(Solo 1 contenedor por alcohol).

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 Preparación de Alcoholes: C1 x V1 = C2 x V2
• Alcohol Absoluto:

• Alcohol 90°:

• Alcohol 80°:

• Alcohol 70°:

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 Preparación de Alcoholes: C1 x V1 = C2 x V2
Resolución:

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 COLORACIÓN H-E

Muestra: Hígado

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6. ACLARAMIENTO
Finalidad:
• Transparentar nuestro tejido
Método:
• Enfrentar segundos nuestra muestra ya coloreada y
deshidratada en Xilol o neoclear

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7. MONTAJE
Finalidad:
• Conservar la muestra, concentrar la refracción de la luz
cuando se observa al microscopio
Método:
• Diluir bálsamo de canadá o entellán en xilol
• Distribuir unas gotas sobre el tejido a montar, colocar
lámina cubreobjetos sobre tejido embebido con bálsamo,
espera que de discurra a través de la lámina evitando la
formación de burbujas
* Rotular lámina con las etiquetas correspondientes

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CONTROL DE CALIDAD
Finalidad:
• Conjunto de características y acciones de un preparado
histológico o de un servicio que satisfacen las necesidades
del patólogo.
• Preparado histológico posea un grado aceptable de
conformidad dentro de ciertos limites de tolerancia
previamente establecido.

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CONTROL DE CALIDAD
Efectos de la NO calidad:
• Usuario insatisfecho
• Pérdida de imagen
• Pérdida de productividad
• Mayores costos
• Pérdida de mercado

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CONTROL DE CALIDAD
Herramientas para el aseguramiento y control de la calidad
Norma ISO/CD 15189
• Abarca todos los aspectos de la gestión de calidad así como
de la dirección y administración de un Laboratorio Clínico.
• Control de calidad interno
• Control de calidad externo

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CONTROL DE CALIDAD
Herramientas para el aseguramiento y control de la calidad
Control de calidad interno
• Pre procedimental: Adquisición de equipos, productos químicos
y colorantes de calidad. Reconocimiento de las impurezas del
“agua destilada”
• Procedimental: Observaciones de inspección en medio o al final
del procedimiento de coloración histológico o de la reacción
histoquímica.
• Pos procedimental: Observaciones de inspección final para
evaluar la calidad del preparado histológico acabado y la eficacia
de los procedimientos para detectar errores.

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CONTROL DE CALIDAD
Herramientas para el aseguramiento y control de la calidad
Control de calidad interno

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 Concentración del formol (v/v)

5% 7.5% 10% 15%

2% 3% 4% 6%

Concentración aproximada de formaldehido (p/p)

 Valores de pH
6.5 8.5
o menos 7.0 7.5 8.0 o más

Soluciones de formol - buffer fosfato

Alcoholimetros
Instrumento Técnica de Limites de
Frecuencia
o equipo control tolerancia

Registro de Diariamente 2° a 4°C

Refrigerador
temperatura

Registro de Diariamente +- 1°C de la

Criostato temperatura
temperatura fijada

Registro de Diariamente +- 1°C de la

Estufa temperatura temperatura
fijada
Instrumento Técnica de Límires de
Frecuencia
o equipo control tolerancia

Baño de Registro de Diariamente 40°C

flotación temperatura
Prueba con +- 0.1 unidad de
Medidor En cada pH del estándar
soluciones
uso en uso
de pH calibradoras
Controlar Dentro del 5%
Centrífuga revoluciones con Mensualmente de lo indicado
tacometro en el dial
CONTROL DE CALIDAD
Herramientas para el aseguramiento y control de la calidad
Procedimientos para detectar errores
• Lámina problema: Tejido objeto de estudio que es sometido a una
coloración, reacción histoquímica o inmunohistoquímica para saber si
presenta o no una determinada estructura o sustancia.
• Lámina patrón: Tejido “modelo” que sabemos dará una coloración, reacción
histoquímica o inmunohistoquímica positiva. Establece la eficacia de los
reactivos y del procedimiento usado.
• Lámina testigo: Sección del tejido objeto de estudio que es sometido a una
extracción enzimática o química de la sustancia a estudiar. Da especificidad
al método comparándola con la lámina problema.
• Lámina blanco: Sección del tejido objeto de estudio que no es sometido a
un paso del método histoquímico o inmunohistoquímico, casi siempre la
oxidación. Permite la demostración de falsos positivos

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Lámina Lámina
problema testigo
CONTROL DE CALIDAD
Herramientas para el aseguramiento y control de la calidad
Control de calidad externo
• Regional: Sociedad Peruana de Histotecnología, Sociedad
Peruana de Patología
• Nacional: Instituto Nacional de Salud
• Internacional: Departamento de Patología del Ministerio de
Salud de USA

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