UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA

TALLER EVALUATIVO DE BIOQUÍMICA SEGUNDO CORTE

PROGRAMA INGENIERÍA AMBIENTAL

Elaborado por: Gómez González Samir, Guzmán Estrada Juan Andrés y Sierra
Sánchez Pedro

CUESTIONARIO
1. Se ha determinado la velocidad inicial de una reacción catalizada por una
enzima para diversas concentraciones de sustrato. Los datos obtenidos son los
siguientes:
[S] µmol/L V (µmol/L)min-1
5 22
10 39
20 65
50 102
100 120
200 135
Calcule Vmax y Km a partir de un gráfico directo de V frente a [S]
Respuesta/:
Forma directa o al “ojo”

Primero calculamos la mitad de la velocidad máxima

Vmax= 135 (µmol/L)min-1

= = 67.5

Km = 25 µmol/L aproximadamente

1
Vmax y Km a partir de un gráfico directo de V frente a [S] por regresión lineal
con Excel

V 1/V
[S] 1/[S]
(µmol/L)min- (µmol/L)min-
µmol/L 1 µmol/L 1

5 22 0,2 0,04545455
10 39 0,1 0,02564103
20 65 0,05 0,01538462
50 102 0,02 0,00980392
100 120 0,01 0,00833333
200 135 0,005 0,00740741

Por medio de la siguiente formula hallamos la Vmax. Y la Km usando la pendiente

y el intercepto

Vmax Km

163,934426 32,147541

Se observa que el método de regresión lineal es el más exacto al valorar una

enzima, aunque el método al “ojo” es mucho más rápido

2
2. Los siguientes datos describen la catálisis de la ruptura de los enlaces
peptídicos pequeños por la enzima elastasa. La flecha indica el péptido que se
rompe en cada caso.

SUSTRATO Km (mM) Kcat (S-1)

PAPA G 4.0 26

PAPA A 1.5 37

PAPA F 0.64 18

a) Si se presenta una mezcla de estos tres sustratos a la elastasa, con una

concentración de cada péptido igual 0.5mM, ¿cuál sería digerido con
mayor rapidez? ¿cuál lo sería de forma más lenta? Asuma que la
enzima se encuentra presente en exceso.
R) Para responder esta pregunta primero se debe tener en cuenta que representa
cada valor, entre menor sea el valor en Km mayor será la afinidad que tiene el
catalizador por el sustrato, En cambio, el Kcat representa al número de moléculas
de sustrato transformadas en producto por unidad de tiempo por molécula de
catalizador. Entonces con esto en mente y observando los valores podemos decir
que el péptido P A P A F es el que mayor afinidad presenta, seguido del péptido
PAPA A y que este último presenta un mayor Kcat, los péptidos al encontrarse a la
misma concentración se diría por lo tanto que PAPA A es el que es digerido con
mayor rapidez, en cambio el péptido PAPA G presenta una baja afinidad y un Kcat
intermedio, por esta razón este sería el péptido que se digiere de forma más lenta.
Se realiza la relación entre Kcat y Km para analizar de mejor manera la eficiencia
de la reacción para cada sustrato.

b. Basándose en estos datos sugiera que características de la secuencia de

aminoácidos dictan la especificidad de la ruptura proteolítica de la elastasa.
De acuerdo a los datos de la tabla y sabiendo que la elastasa es una enzima
que produce un rompimiento en enlaces peptídicos, tras residuos pequeños
neutros, tales como la alanina, serina, glicina, o valina. Sólo si estos no están
seguidos de una prolina.

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3. Un inhibidor competitivo es análogo estructural del sustrato y compite por
ocupar el sitio activo de la enzima, además su unión con la enzima es
irreversible por lo su efecto sobre una reacción enzimática se refleja en un
aumento de Km. Se estudia la cinética de una enzima en ausencia y presencia
de dos inhibidores (A y B), la velocidad viene dada en función de la
concentración de sustrato en la siguiente tabla (2 ptos):

[S] mmol/L V[(mmol/L)mil-1]

Sin inhibidor Inhibidor A Inhibidor B
1.25 1.72 0.98 1.25
1.67 2.04 1.17 1.54
2.50 2.63 1.47 2.00
5.00 3.33 1.96 2.86
10.00 4.17 2.38 3.70

Qué tipo de inhibición se produce ¿Competitiva o no competitiva? Explique su

respuesta.

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De la gráfica anterior podemos concluir que el inhibidor B, es un inhibidor
competitivo, puesto que este se va a acercando a la velocidad máxima de la
reacción, es decir, que la velocidad máxima de la reacción sin inhibidor y con el
inhibidor B, es aproximadamente la misma, también se puede observar que el
inhibidor B necesita más sustrato para alcanzar ½ de la Vmáx, por tanto, su Km
será mayor, esto significa que el inhibidor B hace que la enzima requiera más
sustrato para poder competir con dicho inhibidor por el sitio activo de la enzima.
Por otro lado, se puede decir que el inhibidor A, es un inhibidor no competitivo, ya
que al a aumentar el sustrato, notamos que, este no tiene efecto significativo en el
inhibidor, además se puede deducir del comportamiento gráfico del inhibidor A,
que la cantidad de sustrato para alcanzar la mitad de la velocidad máxima de la
reacción es el mismo que el de la enzima sin sustrato, esto quiere decir que el Km
de la enzima no se altera, así mismo también se puede observar en la curva del
inhibidor A, de color naranja, que la velocidad máxima, disminuye, o dicho de otra
manera, ni siquiera alcanza la velocidad máxima de la reacción. De esta manera,
por los parámetros cinéticos, podemos decir que con el Inhibidor A se produce una
inhibición no competitiva, y con el inhibidor B, se produce una inhibición
competitiva.

4. La siguiente tabla muestra los parámetros cinéticos para la L-aminoácido

oxidasa de B. atrox sobre diferentes sustratos.

a. Explique la función biológica de esta enzima

R/La L-aminoácido oxidasa (LAO) es una flavoproteína que oxida los L-

aminoácidos en la posición alfa y genera los correspondientes cetoácidos,
amoníaco y peróxido de hidrógeno, lo que les confiere algunas propiedades
antibacterianas. Están muy extendidos a través de las escalas evolutivas y
participan en procesos como la defensa innata de los peces, el sistema inmunitario
humano y el desarrollo de biopelículas bacterianas. Campos como la biomedicina
han suscitado un gran interés en la investigación de LAO, y también son
importantes a nivel biotecnológico, ya que se utilizan en el desarrollo de
biosensores, producción de antibióticos, biotransformación, entre otros.

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 b. Según esta información con cuál de todos estos sustratos sería más
eficiente la L-aminoácido oxidasa. Defina Kcat y Km.

R/La Km también indica la afinidad que posee la enzima por el sustrato, siendo
ésta mayor, cuanto menor es la Km. Cuanto menor sea la Km menor será la
cantidad de sustrato necesaria para alcanzar la mitad de la velocidad máxima, es
decir, podemos afirmar que a mayor Kcat y menor Km mayor será la afinidad del
enzima hacia ese sustrato.

Reorganizando la tabla anterior de mayor a menor afinidad obtenemos los

siguientes resultados:
Sustrato pH Km Vmax Kcat Kcat/ Km
L-leucina 8,5 0,118 39,52 84,24 71,21
I- 8,5 0,051 11,47 24,44 47,89
Fenilalanina
L-leucina 7,5 0,127 24,49 52,19 40,90
L-metionina 7,5 0,067 7,21 15,17 22,44
I- 7,5 0,283 29,90 63,72 22,54
fenilalanina
L-metionina 8,5 0,449 22,98 48,97 10,91

L-arginina 8,5 1,652 17,25 36,78 2,23

L-arginina 7,5 26,465 47,12 100,42 0,38

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5. Las fosfatasas ácidas son producidas por los eritrocitos, hígado, pulmón, el
bazo y la glándula de la próstata. La enzima de ésta glándula es clínicamente
importante porque el aumento de su actividad en sangre es frecuentemente
una indicación del cáncer de próstata. La fosfatasa de la glándula prostática es
fuertemente inhibida por el ión tartrato, pero la fosfatasa de otros tejidos no.
Cómo puede esta información ser usada para desarrollar un procedimiento
para medir la actividad de la fosfatasa ácida.
Usando la información suministrada y teniendo en cuenta que las fosfatasas
acidas y que son inhibidas por ion tartrato en las glándulas prostáticas, podemos
decir que se puede utilizar un procedimiento como un panel de función hepática el
cual es un análisis de sangre que miden diferentes enzimas, proteínas y
sustancias producidas por el hígado, teniendo en cuenta que esta enzima es
producida en su mayoría por el hígado el bazo y los eritrocitos y pueden
encontrase en la sangre por medio de la cual puede medirse su actividad, también
se podría tomar una muestra de sangre al paciente y por medio de procesos
analíticos se determina la cantidad total de esta enzima en general incluyendo las
cantidades producidas por los eritrocitos , hígado, pulmón bazo y glándulas
prostáticas, luego se toma la muestra de sangre que se tenía inicialmente y se
trata con una solución del ion tartrato y se determina por al igual que el caso
anterior por medio de procesos analíticos la cantidad de esta enzima en la
muestra, finalmente se resta el valor inicial de fosfatasa acida cuan no se había
tratado con el tartrato menos el valor de la muestra tratada con tartrato y así se
puede determinar la actividad y cantidad presente de la fosfatasa ácida.

6. Consulta un ejemplo de cada tipo de enzima y explica su función teniendo en

cuenta la reacción que cataliza.

R/
En el siguiente cuadro se muestra la información investigada, de tal forma que se
ágil y fácil de interpretar.

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Tipo de enzima Reacción que cataliza Ejemplo Función
Utilizada en la industria
Catalizan las reacciones láctea, evita
Hidrolasas lactasa
de hidrólisis la cristalización de la
leche concentrada.
.Permite la utilización
de jarabes de alta
Catalizan las reacciones
Glucosa- fructosa en la
Isomerasa en las que un isómero se
isomerasa producción de
transforma en otro
alimentos dulces.

Sustrato clave para la

Catalizan reacciones de producción de energía
piruvato
Ligasas unión o degradación de y de la síntesis de
carboxilasa
sustratos glucosa
(neoglucogénesis)
Catalizan reacciones de
rupturas de sustratos en Es una enzima
las que se elimina agua involucrada tanto en la
(H2O), dióxido de carbono la acetacetato vía de producción de
Liasas.
(CO2) o amoníaco (NH3) descarboxilasa. cuerpos cetónicos en
para formar dobles humanos y otros
enlaces o añadir grupos a mamíferos
estos.
Interviene en el ciclo de
Catalizan reacciones de Krebs y en la cadena
oxidación-reducción, es succinato de transporte de
Oxidorreductasas
decir, de transferencia de deshidrogenasa. electrones, y que
electrones entre sustratos contiene FAD unido
covalentemente.
Es una enzima clave
Catalizan la transferencia
en la regulación de la
de un grupo químico
Transferasas glucoquinasa. homeostasis de
activo de un sustrato a
glucosa en el
otro
organismo

fuente: https://www.ejemplos.co/25-ejemplos-de-enzimas-y-su-funcion/#ixzz7nNHbEXTM

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7. La penicilina es hidrolizada y con ello inactivada por la penicilinasa una enzima
presente en algunas bacterias resistentes.

La cantidad de penicilina hidrolizada en un minuto en una solución de 10ml que

contiene 10-9 g de penicilinasa purificada, se midió como función de la
concentración de la penicilina obteniéndose los siguientes datos:
R/
[penicilina] x 10-5 ( Velocidad de hidrólisis(mol/min)
1/[P] 1/V
mol/L) x10-9
0.1 0.11 10,0 9,1

0.3 0.25 3,3 4,0

0.5 0.34 2,0 2,9

1.0 0.45 1,0 2,2

3.0 0.58 0,3 1,7

3.0 0.58 0,3 1,7

8. Mencione ejemplos de drogas o sustancias que inhiban algunas de las

enzimas en el metabolismo de los peces.

R/ El uso de medicamentos quimioterapéuticos como el MTX (metotrexato),

promueve cambios metabólicos complejos que involucran no solo las vías de
síntesis de novo de purinas y pirimidinas, sino también la síntesis de metionina,
glicina y serina, el metabolismo de las adenosinas, el glutamato y las histidinas, la
formación de poliaminas y la transmetilación de fosfolípidos y proteínas. El MTX
inhibe la enzima dihidrofolato reductasa (DHFR), que convierte el dihidrofolato
(DHF) en tetrahidrofolato (THF). Junto con lo anterior, las moléculas de MTX-PG
también inhiben la enzima TS y varias enzimas involucradas en la vía biosintética
en especies como en los peces cebra (Danio rerio)

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9. Defina los siguientes términos y mencione ejemplos.
a.) Isoenzima o Isozimas
b.) Zimógenos
c.) Holoenzima

R/

A.) Isoenzima o Isozimas

Las isoenzimas se definen como enzimas que cumplen la misma función es decir
catalizan la misma reacción química, pero difieren ligeramente en su estructura
primaria y, por lo tanto, en su carga eléctrica. viéndolo de otra manera más
sencilla son dos o más enzimas que son químicamente distintas pero que
funcionan de forma similar.

Proteinas con diferente estructura pero que catalizan la misma reacción

EJ:

• la glucoquinasa: una variante de hexoquinasa que no es inhibida por la glucosa-

6-fosfato.

• La lactato deshidrogenasa ó LDH: es una enzima tetramérica que contiene solo

dos subunidades distintas: las designadas H del corazón (miocardio) y las M del
músculo. Estas dos subunidades se pueden combinar de 5 formas diferentes.

• La amilasa: Existen dos isoenzimas de la amilasa: la “P” o pancreática, que pasa

más fácilmente a la orina y la “S” o salival, más rápida en la electroforesis.

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B.) Zimógenos

Un zimógeno o proenzima es un precursor enzimático inactivo, es decir, no

cataliza ninguna reacción como hacen las enzimas. Para activarse, necesita de un
cambio bioquímico en su estructura que le lleve a conformar un centro activo
donde pueda realizar la catálisis. También se pude definir como una sustancia
proteínica específica que origina una enzima. Los zimógenos son los precursores
de las enzimas.

EJ: el tripsinógeno, el quimotripsinógeno, el fibrinógeno, el tromboplastinógeno, la

proacelerina, etc.

C.) Holoenzima

Las holoenzimas son enzimas que está formada por una parte proteica llamada
apoenzima y un cofactor, que puede ser un ion o una molécula orgánica compleja
unida (grupo prostético) o no (una coenzima); en pocas palabras es una enzima
completa y catalíticamente activa.

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EJ:

• La enzima ADN polimerasa III es un ejemplo de una holoenzima que ayuda a

unir el esqueleto de fosfato del ADN en las células de E. coli.

• La holenzima kinesina-II es una proteína motora que ayuda a mover cosas en la

célula (como las mitocondrias) de un lugar a otro.

• La holoenzima ARN polimerasa II, que ayuda a convertir el ADN en ARN.

Diferentes proteínas se unen a la ARN polimerasa y son necesarias para que
encuentre su sitio de unión al ADN y active la polimerasa.

10. Cuando hay muerte de un tejido el contenido celular llega al pasma

aumentando la concentración de proteínas no plasmáticas como la
Fosfocreatinín quinasa (CPK) que es monitoreada a nivel sanguíneo
cuando hay ataques cardíacos. Está isozima, en los tejidos presenta una
isoforma distinta en donde las dos subunidades son de tipo muscular (MM),
En el corazón una es M y la otra es tipo B (MB) y en el cerebro sus dos
cadenas polipeptídicas son tipo B (BB). Explique por qué la electroforesis y
porqué sería la mejor técnica para dar un diagnóstico más acertado.

R) Tenemos que la electroforesis es un procedimiento en donde se lleva a cabo

una separación de moléculas, como las proteínas y los ácidos nucleicos, según la
movilidad de estas en un campo eléctrico.
Teniendo en cuenta que la masa muscular esquelética es 100 veces mayor que la
cardíaca, y que la concentración catalítica de la creatina-quinasa es 5 veces
mayor en el músculo esquelético, es de esperar que la isoenzima mayoritaria en el
suero de pacientes presuntamente sanos sea la creatina-quinasa 3. El 97% de la
concentración catalítica sérica de la creatina-quinasa se debe a la isoenzima 3 y el
resto a la isoenzima 2. Otros órganos no contribuyen significativamente, ya sea
por su baja concentración catalítica, o por su insuficiente masa (Jones y cols.,
1990). Además de las isoenzimas, en el suero se han descrito otras variantes

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denominadas isoformas. En los años 60, Sjovall y Voight (1964) y Kumadavalli y
Watts (1968), observaron que la creatina-quinasa 3 humana se podía separar
electroforéticamente en tres bandas que conservaban su actividad. Smith (1972)
analizó el plasma de pacientes que habían sufrido un infarto agudo de miocardio
mediante electroforesis en geles de poliacrilamida en condiciones no
desnaturalizantes, y observaron la separación de la isoenzima 3 en tres bandas, y
de la isoenzima 2 en dos. Más adelante, Wevers y cols. (1977), confirmaron las
observaciones de Smith, y observaron que el porcentaje de actividad de las sub-
bandas aumentaba hacia la más anódica a medida que transcurría el tiempo
desde el primer síntoma del infarto.
Estas bandas se denominaron isoformas de la isoenzima 2 y 3. Wevers y cols.
(1977) propusieron la existencia de dos isoformas de la subunidad M: M1 y M2, y
que la subunidad M2 se transformaba en la M1 mediante la intervención de una
sustancia termolábil presente en el suero humano. La naturaleza de la molécula
responsable de la modificación permaneció desconocida hasta que George y cols.
(1984) y Edwards y cols. (1984), simultánea e independientemente, demostraron
que la conversión se inhibía por completo mediante un inhibidor específico de la
carboxipeptidasa N. Perryman y cols. (1984), describieron el mecanismo molecular
mediante el que se producía la conversión de la isoenzima 3 (CK33) en el suero
humano: la carboxipeptidasa N hidrolizaba un residuo de lisina del extremo C-
terminal de una de las dos subunidades M, y a continuación hidrolizaba el
correspondiente a la otra subunidad, dando lugar a las isoformas 2 (CK32) y 1
(CK31), respectivamente. Con relación a la isoenzima 2, se conoce que la
isoforma tisular (CK22) tiene un residuo de lisina en el extremo C-terminal de cada
una de las dos subunidades (M y B). Aunque teóricamente podrían existir cuatro
isoformas, mediante separación electroforética sólo se han conseguido detectar
dos.
Entonces, de acuerdo a la información que presenten las subunidades, cada una
de estas presentará diferentes cargas, ya sean las MM, MB o las BB. De esta
forma es posible determinar el tipo de daño que se está sufriendo a partir de los
resultados obtenidos durante el proceso electroforético.

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 REFERENCIAS
 25 Ejemplos de Enzimas (y su función). (s. f.). https://www.ejemplos.co/25-
ejemplos-de-enzimas-y-su-funcion/

 Microbiología, G. D. D. M. D. U. Y. (2016, 10 noviembre). Identificación y

caracterización de una glicina oxidasa en Marinomonas mediterranea
perteneciente a una nueva familia de
qinoproteínas. https://www.tdx.cat/handle/10803/397658?locale-attribute=es

 colaboradores de Wikipedia. (2022, 24 febrero). Isoenzima. Wikipedia, la

enciclopedia libre. https://es.wikipedia.org/wiki/Isoenzima

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