Laboratorio N° 2

ANÁLISIS DE ORINA COMPLETA Y FUNCIÓN RENAL

El análisis de orina inicia con una muestra bien recolectada, preferentemente la primera orina de la
mañana (o un mínimo de retención de 3 horas), por ser la más concentrada y ácida. Se recolecta en
frascos limpios, no necesariamente estériles.
Luego se realizan 3 tipos de análisis: físico, químico y microscópico.
1- Examen físico: análisis cualitativos y cuantitativos.

COLOR
La orina normal es color amarillo ámbar por la presencia del pigmento urocromo y urobilina. La
intensidad puede variar por la toma de mucho líquido, vómitos o diarrea.
Las orinas patológicas tienen otros colores. Un color rojizo puede deberse a la presencia de sangre. Un
color amarillo intenso se da en orinas de alta densidad, ante oliguria (cuando se produce menos orina de
lo normal) o en ictericias: en este último caso, se debe agitar la orina y si la espuma se torna amarilla es
por la presencia de bilirrubina.

ASPECTO
La orina normal es límpida y transparente al verla en un tubo de vidrio. Luego de un tiempo en reposo se
observa un leve enturbiamiento que sedimenta al fondo del frasco y contiene mucus, células epiteliales
y leucocitos.
Se da un aumento en la turbidez por la presencia de fosfatos, uratos, pus, sangre y bacterias.

SEDIMENTO
En orinas normales es escaso o nulo. Se informa como escaso, regular o abundante.

OLOR
Ya no se informa. Es débilmente aromático.

ESPUMA
La espuma obtenida por la agitación de la orina es blanca y fugaz. Persiste cuando contiene albúmina o
sales biliares. Es amarilla si contiene bilirrubina.

VOLUMEN
El volumen normal eliminado por un adulto en 24 horas (diuresis) es entre 1500 y 1600 mL. Depende de
diversos factores. Se llama poliuria al aumento del volumen de orina eliminada, si disminuye es oliguria
y si está ausente es anuria.

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 2- Examen químico: casi todos se realizan mediante tiras de plástico con almohadillas impregnadas
con buffer e indicadores químicos.

PH
La orina normal tiene pH alrededor de 6 (ácido) y puede variar entre 4,6 y 8. La acidez de la orina se
debe a fosfatos ácidos a pequeñas cantidades de ácidos orgánicos (láctico, pirúvico y cítrico) que son
eliminados en forma de sales de sodio, potasio, calcio y amonio. La excreción de cationes mantiene el
equilibrio ácido-base mediante la reabsorción a nivel tubular.
La acidez aumenta a medida que el sodio es retenido por el organismo.
Las tiras reactivas tienen rojo de metilo y azul de bromotimol como indicadores, van de pH 5 a 9.

Rango de pH Colores
5 – 6,5 Anaranjado a amarillo
7 – 8,5 Verde a azul
Indicador de Guillaumin: rojo de metilo, azul de bromotimol, NaOH 0,1 N y agua destilada.

DENSIDAD
Es un parámetro que depende de la cantidad de solutos disueltos y volumen de muestra. A mayor
densidad, mayor cantidad de soluto. Se puede medir con un densímetro o con tiras reactivas.
La densidad normal de la orina varía entre 1,015 y 1,025. La densidad puede aumentar si hay presente
glucosa o proteínas urinarias. La densidad es baja en nefritis crónica y diabetes insípida. La densidad es
alta en procesos febriles, nefritis parenquimatosa o diabetes mellitus.

PROTEINAS
La orina normal no contiene proteínas cuando se usan métodos convencionales para su detección. Se
llama proteinuria a la presencia de proteínas y es un signo de enfermedad renal. Se puede usar tiras
reactivas o métodos de precipitación de proteínas.
Tiras reactivas es un método colorimétrico sensible a la albúmina.
Reacción de Kingsbury es un método de precipitación de proteínas, se usa ácido sulfosalicílico al 3 % en
agua destilada y determina todas las proteínas: albumina, globulina, glucoproteínas y proteínas de
Bence-Jones.
Procedimiento - Centrifugar 10 mL de orina La turbidez se compara con una escala
- Extraer 1 mL del sobrenadante turbidimétrica de Mc Farlan que va de
- Agregar 3 mL del ácido sulfosalicílico 0,1 g/L a 1 g/L de proteínas.
- Leer la turbidez a los 5 min
Proteínas de Bence-Jones son dímeros de cadenas livianas procedentes de inmunoglobulinas, es una
proteína de bajo PM. Su determinación se basa en su solubilidad, estas proteínas precipitan a 40°C -
60°C y solubilizan a 100°C.
Procedimiento - Centrifugar la orina
- Acidificar 5 mL de orina con ácido acético al 10 % hasta pH 5

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 - Calentar a BM 56°C durante 15 minutos: si hay precipitado, hay proteínas
- Se coloca el tubo en agua hirviendo por 3 minutos, si el precipitado disminuye se
debe a las proteínas B-J, si aumenta se debe a la presencia de otras proteínas
- La orina se puede filtrar para eliminar las otras proteínas

GLUCOSURIA
Normalmente se eliminan cantidades no detectables de glucosa por orina. Cuando su concentración en
sangre está en los valores normales, la glucosa es absorbida totalmente en los túbulos renales. Si los
valores exceden de 180 a 200 mg % puede aparecer en la orina. Se detecta mediante tiras reactivas o
por la técnica de Fehling.
Tiras reactivas se realiza el método de la glucosa oxidasa, las tiras están impregnadas con la enzima GOD
y POD (peroxidasa) que reaccionan con la orina dando una variedad de colores que van del verde al
marrón según la concentración.
𝐆𝐎𝐃
glucosa → ácido glucónico + H2 O2
𝐏𝐎𝐃
H2 O2 + IK → cromógeno oxidado + H2 O

Técnica de Fehling se basa en la reducción del ión cúprico (azul) a cuproso (precipitado rojo ladrillo) en
presencia de glucosa, en caliente y medio alcalino fuerte.
Se mezclan partes iguales del reactivo y orina fresca y se lleva a ebullición sobre llama para evidenciar el
cambio de color y aspecto.

ACETONA
Se debe al defecto del metabolismo o absorción de carbohidratos, ya que el organismo lo compensa
metabolizando mayores cantidades de ácidos grasos. Esto hace que aparezcan cuerpos cetónicos en
sangre, que son excretados en la orina en forma de ácido acetoacético, acetona y ácido β-hidroxibutírico
Técnica de Imbert se basa en la formación de un cromógeno rojo violáceo por reacción de acetona y
ácido acetoacético con nitroprusiato de sodio 10 mg % p/V, en presencia de amoníaco concentrado.
Se coloca 1 mL de orina y 5 gotas del reactivo de Imbert, luego de unos segundos se agregan 10 gotas de
amoníaco, el color violáceo revela la presencia de acetona.
Investigación del ácido hidroxibutírico: reacción de Hart
- Es necesario eliminar la acetona y el ácido acetoacético diluyendo 20 mL de orina en 20 mL de agua
destilada y gotas de ácido acético
- Se evapora por ebullición hasta 10 mL. Luego se agrega 10 mL de agua destilada.
- Se reparte en dos tubos, al tubo uno se le adiciona 1 mL de agua oxigenada, se calienta y se enfría.
- Luego se realiza la reacción de Imbert sobre los dos tubos: si la reacción es positiva en el tubo uno,
se debe a la presencia de hidroxibutírico que se oxidó a acetona. El otro tubo debe dar negativo.
BILIRRUBINA
La bilirrubina se elimina de la sangre circulante por el hígado, que combina al pigmento con ácido
glucóronico y luego lo excreta mediante el tracto biliar.

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La bilirrubina en orina se asocia a trastornos obstructivos hepáticos: si el conducto biliar está obstruido,
la bilirrubina conjugada (directa) vuelve al torrente sanguíneo y se filtra a través del glomérulo, pasando
a la orina. La bilirrubina no conjugada, ligada a la albúmina, no se excreta.
Tiras reactivas 2,4-dicloroanilina diazotada, la reacción positiva es de color marrón. Se indica como
positivo o negativo.

PIGMENTOS BILIARES
Aparecen en orina ante patologías como hepatitis u obstrucción de las vías biliares por cálculos.
Reacción de Gamelín se oxida la bilirrubina con ácido nitroso-nítrico, los enlaces metílicos se
transforman en carbonilos. Hay cambio de color.
- Se colocan 2-3 mL de orina y unas gotas de ácido nitroso-nítrico. Se observa luego de 15 min: la
reacción positiva da un anillo azul verdoso, la reacción negativa da un anillo rojizo.
UROBILINÓGENO
El urobilinógeno se genera en el intestino mediante enzimas bacterianas. Una pequeña cantidad se
excreta por los riñones, el valor normal en orina es de 1 a 4 mg/24 hs. Se determina su valor para
conocer el estado de la función hepática.
Tiras reactivas con p-dimetilaminobenzaldehído en medio ácido. Se produce cambio de color de amarillo
a castaño anaranjado.

SANGRE
En orinas muy alcalinas o de baja densidad puede darse la lisis de hematíes, que liberan hemoglobina en
la orina. La microhematuria se detecta a nivel microscópico, la hematuria altera el color de la orina.

Tiras reactivas detecta la hemoglobina libre. Se basa en la actividad de la hemoglobina que actúa
catalizando la reacción entre hidroperóxido de cumeno y 3, 3’, 5, 5’-tetrametilbencidina, dando una
gama de colores desde anaranjado, pasa por verde y llega al azul oscuro. El color azul indica positivo.

SEDIMENTO URINARIO
Se obtiene luego de centrifugar 10 mL de orina a 3000-3500 rpm durante 10 minutos.

3- Examen microscópico: se observa el sedimento urinario entre porta y cubre con un aumento de
400 x. Es útil para observar células epiteliales, leucocitos, hematíes, cilindros, cristales,
microorganismos y desechos.

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 EVALUACIÓN DE LA FUNCIÓN RENAL

Los riñones depuran la sangre mediante la formación de orina. La unidad funcional es el nefrón,
constituido por un sistema de vasos sanguíneos, capilares glomerulares y túbulos donde ocurre la
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filtración de la sangre que llega a los capilares, la 2reabsorción de sustancias que no deben eliminarse y
la 3secreción de sustancias.

La función renal se determina con el análisis de sangre y de orina, junto con la observación microscópica
del sedimento urinario.

UREA
Es la forma no tóxica del amoníaco, se produce por la degradación de proteínas y ocurre en el hígado. Se
elimina mediante el riñón, debido a su tamaño pequeño es reabsorbido y secretado de forma alternada
en los túbulos renales, por lo que no representa el índice de filtrado glomerular en comparación con
otras sustancias.
Los niveles séricos varían entre 0,15 y 0,40 g/L. Un aumento no solo indica falla renal, sino que puede
ser por otros factores, como deshidratación, uso de fármacos o alteración de la función hepática.
Determinación de urea: método enzimático
Se basa en la hidrólisis de urea por acción de la enzima ureasa, que da como productos CO2 y NH3. El
amoníaco reacciona con fenol e hipoclorito en medio alcalino dando azul de indofenol.
Se puede determinar tanto en suero como en orina: la orina se diluye con agua destilada debido a su
densidad. Se debe hacer un blanco de orina porque este líquido contiene cantidades variables de
amoníaco. El BO se prepara con los reactivos y 20 μL de la dilución de orina.
𝐮𝐫𝐞𝐚𝐬𝐚
urea + H2 O → CO2 + NH3

NH3 + fenol + NaClO → azul de indofenol

Se prepara un blanco (B), un testigo (T) y la muestra (D). Se lleva el aparato a cero con el B y se leen las
absorbancias a 540 nm.

Reactivos B T Muestra
Buffer de ureasa 1 gota 1 gota 1 gota
Testigo de urea 20 μL
Plasma o suero 20 μL
Incubar 5 min a 37°C para que ocurra la reacción enzimática
Fenol 1 mL 1 mL 1 mL
Hipoclorito alcalino 1 mL 1 mL 1 mL
Incubar 5 min a 37°C
Agua destilada 10 mL 10 mL 10 mL

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Cálculos y resultados

Valores de referencia La eliminación de urea depende de la dieta pero en promedio se excretan entre
20 y 40 g en 24 horas.

CREATININA
Es un producto del metabolismo de la creatina y su medición es muy útil para conocer la función renal.
La creatina se forma a partir del ácido guanidínico acético, sintetizado en riñones, intestino delgado y
páncreas. Este metabolito se dirige al hígado donde se metila y se produce creatina. La creatina se
almacena en cerebro y músculo en forma de fosfocreatina que mediante un proceso enzimático se
transforma en creatinina y se libera a la sangre. La creatinina se filtra por el glomérulo y no se
reabsorbe, su secreción es mínima pero es útil para evaluar la función renal.
Existen diversos métodos para determinar la concentración de creatinina: HPLC, métodos enzimáticos y
colorimétricos.

Determinación de creatinina: método colorimétrico

Reacción de Jaffeé Se basa en la reacción de creatinina con picrato en medio alcalino, se obtiene un
pigmento naranja brillante que es una sal de creatinina, ácido pícrico e hidróxido
de sodio, llamado complejo de Janowsky. El complejo tiene máximo de
absorbancia a 485 nm pero se lee a 510 nm para evitar interferencias.
- El ácido pícrico se debe usar puro, la presencia de impurezas da resultados falsos. Este reactivo
cumple doble función: desproteinizar y cambiar el pH a uno alcalino.
- Las proteínas son interferentes positivos y es necesario sacarlas del medio.
- Se puede usar muestras de suero o plasma, o de orina de 24 horas.
Reactivos 1: ácido pícrico 41,4 mmol/L
2: buffer glicina / NaOH 1 mol/L
Estándar: solución de creatinina 20 mg/L

Procedimiento
Si se trabaja con suero es necesario desproteinizarlo. Se toman 0,7 mL de suero, se agregan 3,5 mL del
reactivo 1, se deja reposar 10 min y se centrifuga a 3000 rpm por 5 min.
Blanco Estándar Muestra suero Muestra orina
Desproteinizar 3 mL
Estándar 0,5 mL
Orina 1/50 0,5 mL
Agua destilada 1 mL 0,5 mL 0,5 mL
Reactivo 1 2 mL 2 mL 2 mL
Reactivo 2 0,5 mL 0,5 mL 0,5 mL 0,5 mL

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Cálculos

Valores de referencia En sangre: 8 – 14 mg/L En orina: 0,9 – 1,5 g/24hs

FUNCIÓN DE LA FILTRACIÓN GLOMERULAR

Clearence: es el aclaramiento de una sustancia, se define como el volumen de plasma que al pasar por
los riñones queda libre de esa sustancia en una unidad de tiempo. Cada sustancia tiene un clearence
específico.
Este método se utiliza para determinar el funcionamiento de la filtración glomerular. La sustancia para
esta medición debe tener ciertos requisitos: debe circular libremente por el plasma, no ser
metabolizada en tejidos ni en los túbulos renales, no ser reabsorbida y ser filtrada por el glomérulo.
Existen sustancias exógenas y endógenas que se usan para este método: la inulina es una sustancia
exógena y se considera goldstandar, pero es muy costosa y difícil de utilizar en la práctica habitual.
Como sustancia endógena encontramos a la creatinina y es la prueba más utilizada.

Clearence de creatinina

Preparación del paciente
Dieta hipoproteíca: no debe ingerir más de 100 g de carne diarios las 48 hs
previas. Es para disminuir la excreción de creatinina por los túbulos
renales.
Hidratación: debe ingerir agua en cantidad suficiente para alcanzar un
volumen de 2 mL/min. En caso de tener poco tiempo el paciente debe
ingerir 500 mL de agua antes de la prueba y luego un vaso cada 45 min.
Suprimir té, café, mate, cerveza, son bebidas que pueden modificar la
filtración glomerular.
No realizar ejercicio intenso ese día.

Obtención de muestra Orina: se puede recolectar orina de 4, 8, 12 o 24 hs. Se debe realizar en

dos periodos de tiempo iguales. Lo importante es conocer el tiempo
exacto de recolección y el volumen total de orina recolectado.
Se puede efectuar la prueba en tiempos más cortos (menor de 4hs)
usando una sonda para la extracción de la orina.
Sangre: extracción venosa de sangre.

Conservación de muestras Orina: debe evitarse las variaciones de pH porque la creatinina se

transforma en creatina en medio alcalino.
Se puede conservar durante 7 días a 4°C o por mayor tiempo si se congela.
Suero o plasma: es estable 24 hs a 4°C o por mayor tiempo a -20°C.

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Cálculos
mg 20 mg/L
creatinina en suero ( ) = AM . f f =
L AT

g AM
creatinina en orina ( )= x V V = volumen de diuresis L/24hs
24hs AT

clearence de creatinina endógena CCE:

Valores normales de CCE: 80 a 140 mL/min

mL creatinina en orina g/24hs

CCE ( )= . 694 ml/min
min creatinina en suero mg/L

ml g/24hs 1000 mg . 1000 mL 1000000 mL

694 : = =
min mg/L 1 mg . 1440 min 1440 min

El filtrado glomerular determinado con creatinina varía con la superficie corporal, si el paciente se aleja
del promedio se aplica el factor de corrección: 1,73 m2/A m2

O x V 1,73
CCE = .
P A

Valores normales del filtrado glomerular según Hombres 105 ± 20 mL/min

clearence de creatinina: Mujeres 95 ± 20 mL/min

- El clearence de creatinina resuelve el problema de la variabilidad de la masa muscular pero

introduce la variable de la recolección de orina y la secreción tubular de creatinina
- Se debe tener en cuenta la hidratación del paciente
- Hay variabilidad de excreción de creatinina en el mismo paciente a medida que progresa la
insuficiencia renal
- Hay drogas que pueden inhibir la secreción tubular de creatinina y reducir el clearence

Clearence estimado de creatinina: existen ecuaciones que consideran el nivel de creatinina sérica, la
edad, género, raza y peso para estimar el filtrado glomerular.

Ecuación de Cockcroft-Gault: permite calcular la depuración de creatinina a partir de la creatinina en

plasma.

(140 − 𝑒𝑑𝑎𝑑 ) . (𝑝𝑒𝑠𝑜 𝑐𝑜𝑟𝑝𝑜𝑟𝑎𝑙 𝑒𝑛 𝑘𝑔)

𝑐𝑙𝑒𝑎𝑟𝑒𝑛𝑐𝑒 𝑒𝑠𝑡𝑖𝑚𝑎𝑑𝑜 𝑑𝑒 𝑐𝑟𝑒𝑎𝑡𝑖𝑛𝑖𝑛𝑎 =
𝑃𝑐𝑟 . 72 (ℎ𝑜𝑚𝑏𝑟𝑒𝑠)𝑜 85 (𝑚𝑢𝑗𝑒𝑟𝑒𝑠)

DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE PROTEINAS TOTALES EN ORINA

Las proteínas plasmáticas de pequeño peso molecular se filtran libremente a través del glomérulo renal
y luego son reabsorbidas por los túbulos renales, este proceso está en relación con el peso molecular, la
carga y la concentración de cada proteína.

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En individuos con función renal conservada los niveles de proteínas en orina son bajos, inferiores a 150
mg/24hs.
En condiciones fisiológicas como embarazo, ejercicio violento o fiebre se puede observar un aumento en
la excreción urinaria de proteínas.
La reabsorción tubular es saturable y el incremento en la filtración por disfunción glomerular o
disminución de la reabsorción debido a daño tubular puede resultar en un incremento en la excreción
de proteínas: proteinuria no fisiológica.
En condiciones patológicas la cuantificación de proteínas es un buen marcador para evaluar la función
renal. El perfil de excreción de proteínas urinarias mediante electroforesis y la cuantificación individual
de proteínas marcadoras de lesión tubular son de utilidad para clasificar el tipo de proteinuria y
establecer el grado de compromiso renal
Fundamento
Es un método colorimétrico de fijación de un colorante. Los grupos amino básicos de las proteínas
reaccionan, en medio ácido (pH 2,5), con una solución de rojo de pirogalol-molibdato, dando un
complejo coloreado azul/violáceo que absorbe a 600 nm.
Es un método sensible y lineal hasta 2 g/L.
Reactivos Rojo de pirogalol Solución de rojo de pirogalol 0,1 mmol/L, molibdato de sodio
0,1 mm/L en buffer succinato 50 mm/L
Solución estándar Solución de albúmina 100 mg/dL

Muestra: orina de 24 hs - Se mide la diuresis

- Si la orina es turbia es conveniente centrifugarla
- La orina debe mantenerse a 4°C (refrigerada)

Procedimiento

Preparar 3 tubos: un blanco, estándar y desconocido.