TÉCNICAS DE COMPROBACIÓN

DE ACTIVIDAD TERAPÉUTICA
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Con el auspicio de la
Director

Dr. Jorge R. Alonso

Docente de la Facultad de Medicina
de la Universidad de Buenos Aires
Rep. Argentina

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CURSO DE FITOMEDICINA Técnicas de Comprobación

TÉCNICAS DE COMPROBACIÓN DE ACTIVIDAD TERAPÉUTICA

A la luz de los modernos avances en botánica, fitoquímica, farmacología, farmacocinética,

farmacodinamia y toxicología, el conocimiento tradicional y popular sobre las propiedades
medicinales de las plantas deberá ser constatado y validado para garantizar una terapia
adecuada, eficaz y con la menor incidencia de ocasionar riesgos para el paciente.

En base a ello, se han diseñado una serie de tests y ensayos, tanto in vitro como en animales,
que permiten evaluar la seguridad y eficacia de un preparado. Posiblemente el punto más
álgido o controvertido radica en los ensayos en animales, los cuales tienen sus detractores y
sus apologistas. El sometimiento a animales de experimentación bajo condiciones muy crueles,
ha implicado la aparición de comités de bioética que procuran limitar al máximo estos ensayos,
destinándolos a procesos patológicos de alto impacto poblacional (por ej. cáncer, SIDA,
obtención de vacunas, repercusión de agroquímicos y radiaciones, etc.), o estudios
toxicológicos de drogas para enfermedades “huérfanas” (donde no existe un tratamiento
eficaz).

Las normativas del Comité de Bioética de los EE.UU para este tema, son las siguientes:

 Todos los animales utilizados para fines de experimentación deben haber sido adquiridos
legalmente.
 Todas las instituciones científicas deben disponer de un estamento administrativo que
ejerza las adecuadas funciones en todo lo referente al uso y cuidado de animales
empleados en los experimentos.
 Los experimentos que requieren la utilización de animales vivos deben llevarse a cabo o
estar directamente supervisados por un especialista calificado en experimentación
biológica.
 Los animales de laboratorio deben ser tratados de manera adecuada, alimentándolos
convenientemente y mantenidos bajo las oportunas medidas de higiene.
 Todos los experimentos que puedan causar daño o sufrimiento a los animales deben
llevarse a cabo bajo anestesia con el fin de evitar dolor innecesario al animal; únicamente
podrán llevarse a cabo sobre el animal despierto en aquellos casos en que se certifique
que la anestesia interfiere o invalida el propósito experimental, debiendo en ese caso estar
dicho experimento convenientemente aprobado y supervisado por el jefe del equipo de
investigación.

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 Si una vez finalizado un proceso experimental agudo no se precisa la supervivencia del

animal, éste deberá ser sacrificado por procedimientos que aseguren un mínimo
sufrimiento y un efecto inmediato, debiéndose constatar la muerte del animal antes de
deshacerse del mismo.
 Si la naturaleza de la experiencia requiere la supervivencia del animal, el comité ético del
centro supervisará la evolución del proceso y dictará en cada caso las normas a seguir para
controlar el estado y la evolución del animal tratado.
 El cuidado postoperatorio debe reducir al máximo las molestias y sufrimiento del animal
durante el período de convalecencia de acuerdo con las prácticas habituales.

La Declaración Universal de los Derechos del Animal fue promulgada por las Naciones Unidas
en 1976, y en su artículo 8° menciona: “La experimentación animal que implique un
sufrimiento físico o psicológico es incompatible con los derechos del animal, tanto si se trata de
experimentaciones médicas, científicas, comerciales, como de toda otra forma de
experimentación”.

Previo a esta declaración, en los años de posguerra había surgido el llamado “Código de
Nürenberg”, como consecuencia de las abominables pruebas hechas en humanos por los nazis,
el cual rezaba en uno de sus apartados: “El experimento debe diseñarse y basarse en los
resultados obtenidos mediante la experimentación previa en animales y en pleno conocimiento
de la historia natural de la enfermedad o del padecimiento”. Años más tarde, en 1964 aparece
la Declaración de Helsinski avalada por la OMS que indicaba: “Toda investigación médica en
humanos debe estar basada en pruebas de laboratorio adecuadamente realizadas y en
experimentación con animales”. Claro que ninguna de estas declaraciones daba cuenta hasta
qué punto se podía someter a sufrimiento un animal. A propósito de ello, nos decía el filósofo
inglés Jeremy Bentham: “El animal no razona, el animal no puede oponerse. ¿Entonces el
animal tiene derecho a sufrir?”.

Quienes defienden el empleo de estos ensayos argumentan que estos

animales se crían específicamente para este fin y no son obtenidos de
la caza silvestre. Muchos de estos animales son transgénicos y
mutantes, de manera que tienen fines decididamente direccionados
hacia la investigación. También, se resguardan en que las exigencias de
cuidado con roedores son solo para los laboratorios, mientras existen
campañas de desratización en las ciudades que procuran el exterminio
Ratón transgénico GM de estos animales para prevención de enfermedades.

Otro argumento de los defensores del ensayo en animales se respalda en el hecho que ni los
ensayos in vitro ni los simuladores por computadora, puede arrojar elementos fidedignos de lo
que sucede realmente en un organismo vivo cuando ingresa un fármaco. Claro que también
son muchas las evidencias que cuentan que ensayos en ratas no reflejan necesariamente lo
que sucede en un organismo humano. Por ejemplo, la penicilina mata a los gatos, mientras
que a un humano puede salvarle la vida. Una cucharadita de permetrina (piojicida) puede
matar a un gato, mientras que ello no sucede en un hombre. El arsénico no solo puede matar
a una persona, sino producirle cáncer, mientras que los ratones demostraron tener una alta
resistencia a la nocividad de dicha sustancia.

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El caso de la droga Talidomida, en los años 50’, fue determinante. A pesar que los estudios
preclínicos arrojaron datos de seguridad de su uso en el embarazo como sedante y calmante,
por lo menos 10.000 niños de madres que tomaron Talidomida presentaron malformaciones
congénitas. Ello determinó la creación en los EE.UU de los Comités de Fármacovigilancia. No
obstante, con el tiempo la Talidomida fue nuevamente autorizada, esta vez para tratamiento
del mieloma múltiple y en eritemas leprosos (conservándose su prohibición en el embarazo).
Otra droga emblemática fue el Clioquinol, lanzado al mercado como remedio para la diarrea,
pero miles de personas quedaron ciegas o con parálisis y otros miles más murieron tras su
suministro oral. Sin embargo, el clioquinol fue autorizado para uso tópico en casos de
dermatitis, acné o prurito. La Rezulina (antidiabético) fue otro ejemplo de inocuidad en
roedores y letalidad en humanos.

Más que nunca la ley del “acierto y error” que fue determinante en el conocimiento empírico
antiguo, tuvo su mismo correlato en las pruebas de drogas de síntesis. Por esta razón, la OMS
ha dictaminado que las plantas medicinales que tienen un correlato histórico de centurias de
empleo con un mismo efecto, y de las cuales no hay relatos de efectos adversos, no requieren
de ensayos clínicos para su incorporación en el ser humano. Esta declaración lógicamente no
es aplicable a ningún producto de síntesis, al no tener un uso tradicional bien conferido.

Decía Mark Twain en épocas donde se experimentaba con monos y

perros: “No estoy interesado en si la vivisección produce resultados
provechosos para la especie humana. El sufrimiento que eso causa
en animales que no han dado su consentimiento es el fundamento
de mi oposición, y para mí es más que suficiente”.

Albert Sabin, el creador de la vacuna contra la poliomielitis, nos

refería: “Hemos perdido tanto tiempo en sostener el concepto
erróneo que el organismo de un mono es igual al del ser humano,
que de habernos dado cuenta antes, hubiésemos salvado muchas
más vidas”.

De todo esto surge la encrucijada de validar o no estos métodos. Ha llamado poderosamente

la atención, que en medio de estos debates, algunas legislaciones aparecidas en los últimos
años, han establecido para determinados estudios toxicológicos, ampliar el campo de acción,
incorporando obligatoriamente a animales “no” roedores también (siendo que los animales
roedores eran los únicos admitidos hasta hace algunos años, estando prohibido o limitado en
perros, monos y gatos).

El riguroso “secreto” relacionado a la investigación de una droga, hace que sea difícil realizar
una verdadera auditoría en los laboratorios, a fin de constatar el cumplimientos de las normas
bioéticas en animales. El primer país que promulgó una ley de protección a animales fue
Inglaterra, a mediados del siglo XIX. Recién a mediados del siglo XX se comenzó a regular esta
actividad. En 2007, India prohibió el registro local de productos cosméticos que hayan sido
ensayados previamente en animales, en consonancia con la legislación europea para este tipo
de productos. Todo indica que el tema seguirá en debate un tiempo más.

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A nivel popular basta muchas veces con extraer los principios activos de la manera más
sencilla, como puede ser por medio de una infusión o decocción. En cambio, para analizar las
propiedades medicinales de una droga vegetal, en muchos casos se recurrirá a métodos de
extracción más complejos, que permitan obtener métodos reproducibles, con cuantificación
de principios activos en lo posible. Entre los métodos extractivos más empleados para
investigación cuentan:

1. Extracción para tamizaje: Se realiza por medio de una maceración de la planta a

temperatura ambiente con 1 a 3 disolventes de diferentes polaridades. Por lo general se
emplean: diclorometano o hexano, éter o etanol, y agua.

2. Aislamiento y elucidación estructural: Para aislar e identificar moléculas con actividad

terapéutica se recurre a técnicas de filtración, extracción selectiva, partición, intercambio
iónico, absorción, filtración en gel, cromatografía y cristalización.

Ensayos para Actividad Antimicrobiana

Con ella se puede conocer la capacidad que tiene una droga vegetal para generar una actividad
inhibitoria sobre el crecimiento de un determinado germen. Se emplean métodos de difusión
en placas o discos con agar, o en tubos con caldo para cultivo. El método consiste en
impregnar discos de papel secante de 6 mm de diámetro y 0,6 mm de grosor con 50 μl del
extracto vegetal. Se aplican los discos en el cultivo y se incuba a 35ºC durante 24 horas.
Al retirar se deberá ver (en caso de actividad) halos de
inhibición que se miden en mm. Si el halo dio mayor a 9 mm. el
resultado es positivo. Si el halo dio entre 6-9 mm. la actividad
se considera intermedia o moderada. Si el halo fue inferior a 6
mm. se considera negativo (sin actividad). Con este método se
puede determinar la CIM (Concentración Inhibitoria Mínima)
que requiere la droga vegetal para matar al microorganismo.

A B C

Diferentes halos inhibitorios en cultivos de Staphylococcus

aureus (A), Candida albicans (B) y Shigella dysenteriae (C)

Estas pruebas cobran vital importancia en la actualidad, habida cuenta de la alta resistencia
bacteriana que se viene registrando en estos últimos diez años. La resistencia a varios
antibióticos es importante en las cepas de la familia Enterobacteriaceae y en otros patógenos
como Bordetella, Haemophilus, Pasteurella y Pseudomonas, como así también entre las
bacterias Gram positivas, particularmente Staphylococcus aureus.

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La CIM es la concentración más baja que requiere el extracto ensayado para que haya
crecimiento visible. Los microorganismos más frecuentemente utilizados son:

Bacterias: Bacillus subtilis, Corynebacterium diphteriae, Escherichia coli, Haemophilus

influenzae, Klebsiella pneumoniae, Micrococcus luteus, Mycobacterium tuberculosis, Neisseria
gonorrhoeae, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhi, S. paratyphi, S. typhimurium,
Shigella dysenteriae, Shigella flexneri, Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogens,
Streptococcus pneumoniae, Vibrio cholerae.

Levaduras y Hongos: Aspergillus flavus, Candida albicans, Cryptococcus neoformans,

Epidermophyton floccosum, Microsporum spp., Neurospora crassa, Saccharomyces cerevisae,
Trichophytum mentagrophytes.

Protozoarios y Parásitos: Ascaris lumbricoides, Entamoeba hystolitica, Plasmodium berghei,

Plasmodium falciparum, Plasmodium spp., Trichomonas vaginalis, Trypanosoma cruzi.

Virus: Herpes simplex virus tipo I y II, virus de la estomatitis vesicular, Coxsakie virus, poliovirus,
citomegalovirus, etc.

En algunos casos hay que relacionar los resultados con el estudio etnobotánico. Por ejemplo,
durante un screening de actividad antiherpética, el extracto acuoso de la especie Gamochaeta
simplicicaulis presentó sólo un 14% de inhibición de crecimiento frente al virus HSV-1 (herpes
simplex virus tipo 1) en cultivos de células VERO. Este resultado parcial hubiera desalentado
estudios posteriores. Sin embargo los estudios etnobotánicos daban cuenta de un amplio
empleo de esa planta como antiviral. Cambiando el método, se observó que si el extracto era
administrado al mismo tiempo que el inóculo del virus en las células de cultivo, la inhibición
era del 99%. De ahí se infiere que el extracto actúa por inhibición en la adsorción del virus a la
célula y no tanto por ser tóxico viral directo. Los estudios posteriores determinaron el
aislamiento de un polisacárido aniónico con actividad antiherpética.

Por último, cabe señalar que los aceites esenciales de las plantas suelen ser las moléculas más
activas como inhibitorias del crecimiento de gérmenes, de ahí que se hayan creado
Aromatogramas, como métodos de investigación in vitro, similares a los Antibiogramas. Un
caso interesante, es el aceite de tea tree (Melaleuca alternifolia) y su eficacia sobre Escherichia
coli vancomicina resistente, o frente a Candida albicans fluconazol-resistente.

Pruebas para inhibición de tumores

La aplicación de nuevas drogas en el campo de la terapéutica resulta ser un proceso largo,

oneroso y no exento de dificultades, pudiendo llegar a los 10-20 años de desarrollo y costos
que pueden alcanzar 100-500 millones de dólares. En el caso del paclitaxel (agente antitumoral
de origen vegetal presente en el género Taxus sp.), trascurrieron 29 años desde que se
descubrió su actividad citotóxica a través del programa de "screening" del National Cancer
Institute (NCI) de los Estados Unidos. Este programa comenzó en 1955 y hasta la fecha ha
evaluado más de 130.000 extractos diferentes correspondientes a unas 35.000 especies. El
Developmental Therapeutics Program o DTP (Programa de Desarrollo Terapéutico) recibe
muestras provenientes de diferentes universidades, centros de investigación, agencias
gubernamentales y laboratorios.

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Se ensayan tanto fracciones como compuestos puros y extractos totales de una planta, en
principio sobre 3 líneas celulares in vitro. Si el extracto pasa esa prueba se continúa con una
batería de 60 líneas celulares adicionales para confirmar la actividad. Estos ensayos son sin
costo para quien lo envía y se suscribe un contrato de confidencialidad entre las partes. Los
ensayos in vivo sobre animales quedan limitados a aquellos casos donde sea necesario e
imprescindible ese ensayo, ya que existen restricciones impuestas por las sociedades
protectoras de animales.

La investigación pre-clínica puede ser llevada a cabo en cultivos de tejidos tumorales, tumores
trasplantados (Ehrlich) o tumores inducidos por sustancias carcinogénicas (por ejemplo
nitrosaminas, dimetilbenzantraceno = DMBA, acetato de 12-decanoilforbol, etc). Entre las
líneas celulares de mayor estudio cuentan:

- Carcinoma de células escamosas (A-431).

- Carcinomas humanos de mama (U-373)
- Carcinosarcoma de ratas (Walker 256)
- Carcinoma de pulmón de ratón (Lewis)
- Carcinoma humano de colon (COL-2).
- Leucemia linfocítica de ratón (P-388).
- Melanoma humano (MEL-2).
- Glioma humano (U87MG). Carcinosarcoma de Walker 256

Las líneas celulares tumorales se generan a partir de células aisladas del paciente tras
realizársele una biopsia. Ésta células crecen en cultivo y se preparan para poder ser
mantenidas de forma indefinida en laboratorio. Una de las grandes controversias de la
utilización de líneas celulares del cáncer es hasta qué punto se parecen a aquellas células
tumorales de las que derivan tras años de cultivo. Las últimas evidencias indican que la
correcta identificación de una línea celular requiere también que el perfil genético se
corresponda al del tejido de origen. Este paso es esencial para poder afirmar firmemente que
los resultados de un estudio con una línea celular determinada representan lo que sucede en
el tumor original.

En 1991 el prof. Mc Laughlin y colaboradores da comienzo a una nueva etapa en la

investigación fitoquímica con la introducción de algunos bioensayos primarios como el test del
disco de papa o el de la Artemia salina, comenzando así la época caracterizada por los
"screenings" y el "fraccionamiento guiado por bioensayo". Este fraccionamiento consiste en la
aplicación de técnicas de separación y aislamiento sobre un determinado extracto, con el
objeto de hacer un seguimiento de la actividad biológica de las fracciones y compuestos puros
obtenidos, para finalizar en la identificación de o los principios activos responsables de la
actividad demostrada por el extracto original.

Una secuencia estándar a seguir en screenings antitumorales consiste en seleccionar primero

sustancias que actúen por un determinado mecanismo, sea conocido o no. Luego se aplican
ensayos celulares a efectos de observar si se afecta la división celular. Finalmente por medio
de los ensayos in vivo se descartan aquellas sustancias que son inactivadas en el metabolismo
animal.

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El ensayo del disco de papa (los hay también sobre zanahoria) es un test sencillo que permite
determinar también actividad antitumoral. Los tumores de tipo "agalla de corona" constituyen
una enfermedad tumoral en muchos vegetales, estando inducidos por una bacteria Gram (-), el
Agrobacterium tumefaciens. Esta bacteria contiene Ti-plásmidos (inductores de tumor) con
carga genética (ADN) suficiente para trasformas células normales en células tumorales.

El fundamento de emplear este ensayo radica en que algunos mecanismos tumorogénicos son
comunes tanto a plantas como animales, lo cual implica que aquella droga que sirva para
desactivar este mecanismo en una planta, lo puede hacer también en un ser vivo. La única
limitación es que la muestra o extracto a evaluar no tenga actividad antibacteriana propia
frente a Gram (-) ya que puede generar falsos positivos.

La técnica consiste en emplear papas peladas (si son rojizas mejor) previamente esterilizadas
en hipoclorito de sodio durante 20 minutos. Se cortan unas rodajas o discos (1-1,5 cm de
diámetro) con un sacabocados y se colocan en una placa de Petri con agar (no más de 5 discos
por placa). Luego se inocula con 2 ml de caldo de cultivo de A. tumefaciens junto con 8 mg del
extracto a ensayar. Otras muestras se inoculan solo con el caldo de bacteria, ya que serán las
"muestras control". Se incuban las muestras a temperatura ambiente (27ºC) y se sellan las
placas 12-15 días. Finalizado ese lapso de tiempo, se abren las placas y se observarán los
porcentajes de inhibición en la formación de tumores respecto a las muestras control. Se
considera como promisorio aquel extracto o compuesto que generó más del 20% de inhibición.

Actividad Diurética

En estos ensayos se compara el volumen de orina excretado por una rata tratada durante un
período de tiempo con una droga de elección. Generalmente se compara con Hidroclorotiazida
y se administra a grupos de ratas en ayunas. Los mecanismos de acción de las drogas vegetales
diuréticas se llevan a cabo mediante mecanismos acuaréticos, siendo muy escasos los
ejemplos de vegetales que actúen por mecanismos de interferencia de reabsorción tubular de
sodio.

Actividad Espasmolítica

Se estudia a través de las contracciones inducidas por una sustancia espasmogénica en un

órgano aislado (generalmente íleon de cobayo, duodeno de rata, yeyuno de conejo, útero,
tráquea, músculo esquelético de ratas, etc). La inducción por lo general se realiza con
acetilcolina. También se utiliza la prueba de la inhibición de diarrea inducida por aceite de
ricino.

La droga vegetal puede ser administrada antes (efecto antiespasmódico) o después (efecto
espasmolítico). El control se hace generalmente con papaverina (relajante del músculo liso).
Ejemplos de principios activos antiespasmódicos son flavonoides (apigenina, quercetina,
kaempferol), aceites esenciales (anís, tomillo, ajo, menta, alcaravea, manzanilla), alcaloides
(papaverina, codeína, escopolamina, hioscina, atropina). Podemos decir que el aceite esencial
de menta y la quercetina de la guayaba son dos de los mejores antiespasmódicos vegetales.

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Actividad Antiulcerosa Gástrica

Para ello pueden utilizarse los tests antiespasmódicos anticolinérgicos (atropina, hioscina) los
cuales reducen la acidez gástrica y los espasmos. Pero más confiable o específico es trabajar
con agentes químicos ulcerogénicos sobre modelos animales (aspirina, indometacina,
histamina, prednisolona, alcohol) o agentes psíquicos (estrés). Para producir úlceras por estrés
se somete a ratas o cobayos a condiciones de semicongelamiento, nado y equlibrio forzados o
descargas eléctricas reiteradas.

Experimentalmente se sabe que las prostaglandinas (especialmente PGE2) son inhibidores de

las úlceras inducidas por alcohol, aún en pequeñas dosis, modificando la secreción ácida
gástrica y estimulando la secreción de mucus en la mucosa. La aspirina y otros
antiinflamatorios son inhibidores de la secreción de prostaglandinas protectoras gástricas.
Flavonoides como el hipoletin-8-glucósido (presente en el género Sideritis) presenta actividad
antiinflamatoria y citoprotectora gástrica. De igual modo los glucósidos fenólicos de la
Filipendula ulmaria cumplen con ambas actividades. Los curcuminoides de la Curcuma longa
han demostrado selectividad enzimática al actuar sobre la vía COX-2 (es decir, protegiendo la
mucosa gástrica, sin afectar la producción de prostaglandinas). Otras plantas que previenen las
úlceras gástricas son el jugo de repollo, la congorosa (Maytenus ilicifolia), sangre de drago
(Croton lechleri) y el regaliz (Glycyrrhiza glabra).

Actividad Hepatoprotectora

Para evaluar la actividad de un extracto vegetal como protector hepático, el mismo se

administra en animales ya sea de manera previa, durante la intoxicación o después de la
intoxicación. Las sustancias empleadas como hepatotóxicas suelen ser: etanol, paracetamol y
tetracloruro de carbono. Las necropsias de los animales revelan el grado de daño tisular. En
vida, se miden transaminasas y demás enzimas hepáticas en sangre, como así también algún
parámetro afectado por la intoxicación hepática: ej. inducción del sueño por hexobarbital.

También la prueba de hepatoprotección puede realizarse en cultivos

de hepatocitos. Otro test mide el grado de regeneración hepática in
vivo que producen algunos aceites esenciales, sobre animales
parcialmente hepatectomizados. Una planta que puede regenerar
hepatocitos es el cardo mariano (Silybum marianum) un reconocido
hepatoprotector. Para evaluar esta actividad, se les administra a los
animales durante un lapso de tiempo el extracto y al cabo de unos días
se pesan los animales y se hace la autopsia a fin de observar
macroscópica y microscópicamente el hígado, lo que determinará el
Cardo mariano eventual éxito del tratamiento (en general por efecto antioxidante).

Plantas como Schisandra sinensis o Picrorhiza kurroa demostraron prevenir los daños
hepáticos inducidos por paracetamol. El Cyperus rotundus, el Silybum marianum y la misma
Picrorhiza kurroa evitan la toxicidad hepática inducida por tetracloruro de carbono. Los
modelos experimentales en los que se administran lipoproteínas específicas que generan
hepatotoxicidad por incremento del complemento, son los ideales para reproducir in vitro,
modelos de hepatitis viral. Resultan efectivos en estos modelos la silibina (cardo mariano), la
cinarina (alcachofa), glicirricina y ácido glicirretínico (regaliz), picrósidos (Picrorhiza kurroa).

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Actividad Antihipertensiva

Se trabaja in vitro sobre músculo liso aislado a efectos de lograr vasodilatación o evitar
vasoconstricción. Entre los mecanismos de acción para trabajar en los tests figuran:

1. Bloqueantes alfa-1-adrenérgicos: prazocina, fentolamina, fenoxibenzamina.

2. Estimulantes de la síntesis de óxido nítrico: incrementan la producción local de GMP-cíclico
que causa hiperpolarización del músculo liso vascular (vasodilatación): nitritos como el
mono, di, y trinitrato de isosorbide.
3. Bloqueadores de los canales de calcio: verapamilo, nifedipina o diltiazem.
4. Inhibidores de la conversión de angiotensina (ACE-1 y ACE-2): enalapril, losartán, captopril.
5. Beta-bloqueantes: atenolol, propranolol.
6. Drogas de acción central: metildopa, clonidina.

Entre los métodos in vivo se trabaja con ratas normotensas anestesiadas mediante inyección
i.p. de pentobarbital. La presión se mide por medio de canulización carotídea. Las sustancias o
extractos a experimentar se introducen por vena yugular o femoral. Otro test es el alimentar a
ratas con comidas salinas y agua con 6% de cloruro de sodio. Al 10º día aparece hipertensión
en los animales. In vitro puede trabajarse por medio de la dilatación de aorta de conejo
precontraída con noradrenalina. Entre las plantas que demostraron actividad antihipertensiva
figuran el espino albar (Crataegus sp.), el Ajo (Allium sativum), la Pitanga (Eugenia uniflora) y el
Olivo (Olea europaea), entre otras.

Actividad Antiagregante - Antitrombótica

Estos estudios miden la capacidad de ciertos extractos o principios activos vegetales para
evitar el fenómeno de coagulación. La trombosis (coagulación sanguínea) es un evento
complejo que involucra varios factores. Las plaquetas (trombocitos) pueden ser activadas por
exposición frente a hormonas (adrenalina, vasopresina), autacoides (ADP = adenosin
difosfato), serotonina, eicosanoides, PAF (factor de agregación plaquetaria), factores
coagulantes (trombina, plasmina) y proteínas vasculares (colágeno, elastina).

Todos estos factores pueden interactuar con receptores situados en las propias plaquetas lo
cual despierta o genera la activación de algunos procesos intracelulares que involucran
segundos mensajeros (adenilciclasa), proteín-C-kinasa y canales cálcicos, lo cual conlleva a la
liberación de ácido araquidónico de la membrana fosfolipídica que determina la formación del
trombo y la agregación plaquetaria.

Los modelos de inhibición de la agregación plaquetaria no sólo

sirven para determinar el efecto antiagregante y
antitrombótico de algún compuesto, sino que también
permiten elucidar el mecanismo de acción de algunas
patologías como la migraña. De esta manera, un inhibidor de la
agregación plaquetaria como el partenólido (obtenido de
Tanacetum parthenium) ha resultado útil en la prevención y
abordaje de cuadros migrañosos. Tanacetum parthenium

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El método usado es el de preparar las plaquetas por centrifugado de sangre total con el
agregado de un anticoagulante como la heparina o citrato. Luego se separan las plaquetas por
un nuevo centrifugado para tener una solución libre de proteínas plasmáticas y
anticoagulante.

El PAF (Factor de Agregación Plaquetario) es un fosfolípido que no sólo interviene en la

agregación plaquetaria, sino que su presencia está relacionada a procesos asmáticos, alergias y
shock anafiláctico. Se une a receptores específicos ubicados en la superficie de las plaquetas.
Los inhibidores del PAF trabajan bloqueando la unión del PAF con el receptor sito en la
plaqueta. Entre los más estudiados tenemos los ginkgólidos (Ginkgo biloba) y la kadsurenona
de Piper futokadsurae.

Actividad Hipolipemiante

La constatación en la reducción de los lípidos (colesterol y triglicéridos) en sangre sirve no solo

como verificación de actividad hipolipemiante de una droga, sino también como constatación
de reducción del índice de aterogenicidad (arteriosclerosis). Entre los mecanismos de acción
propuestos cuentan:

 Inhibición de la síntesis de colesterol hepática por inhibición enzimática (HMG-CoA

reductasa) involucrada en la síntesis de colesterol. Actúan por este mecanismo las
estatinas (obtenidas inicialmente de la fermentación del hongo del arroz y de Aspergillus
terreus) y los extractos de berenjena.
 Acidos grasos poliinsaturados (aceites de pescado) los cuales incrementan la actividad de
la lipoprotein-lipasa e inhiben la síntesis de VLDL-colesterol en hígado.
 Antioxidantes (flavonoides en especial) que actúan inhibiendo la peroxidación lipídica.
 Inhibición de la absorción de colesterol a nivel intestinal empleando secuestrantes de
ácidos biliares como la colestiramina, la cual previene la reabsorción de ácidos biliares
desde el sistema digestivo. De esta manera promueve la conversión de colesterol en
ácidos biliares. Algunas fibras vegetales y fitoesteroles también actúan de esta manera.

Los modelos de hiperlipidemia en animales se logran tras alimentar al mismo con una dieta
rica en grasas durante un período de 3-6 meses. Si bien en un mes de dieta se puede medir el
efecto hipolipemiante, recién entre 3-6 meses se puede medir correctamente el índice
aterogénico. El índice aterogénico resulta de medir los cambios histopatológicos producidos en
la aorta del animal luego de finalizado el ensayo.

Dietas ricas en azúcares también se emplean, en especial cuando se investiga el poder

ateroesclerótico en presencia de diabetes. La planta a investigar se administra junto con la
dieta o posteriormente. Los animales que en estos casos demostraron un comportamiento
metabólico similar al humano son los conejos. La hiperlipidemia en ratas puede ser producida
por dieta rica en grasas o más fácilmente por administración intraperitoneal (i.p) de Tritón (iso-
octil-polioxi-etilenefenol) en dosis de 400 mg/kg. Los lotes de animales deben ser mayores a
seis.

Indirectamente pueden medirse determinadas hormonas. Tanto testosterona como hormonas

tiroides se hallan en bajos niveles en casos de dietas hipergrasas.

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Por ejemplo, pacientes con infarto de miocardio registran bajos niveles de testosterona. El
malonil-aldehido es un metabolito del ácido araquidónico formado durante el proceso de
agregación plaquetario. Recordar que las plaquetas están implicadas en los estadios iniciales
de aterogénesis. Entre las plantas que destacan por poseer actividad hipolipemiante figuran:
olivo (Olea europea), cúrcuma (Curcuma longa), mirra (Commiphora mukul), berenjena
(Solanum melongena), ajo (Allium sativum), chía (Salvia hyspanica), aunque esta última trabaja
esencialmente sobre triglicéridos.

Actividad Antiinflamatoria

El término inflamación involucra una compleja serie de respuestas (reparadoras, protectoras)

frente a injurias tisulares, producidas por infecciones, procesos inmunológicos o injurias
traumáticas directas. Agentes antiinflamatorios clásicos como la aspirina y otros AINE inhiben
la vía de la ciclooxigenasa y la síntesis de prostaglandinas. Poseen acción antipirética también
desde que las prostaglandinas intervienen en la generación de fiebre. Sustancias antioxidantes
cumplen un rol importante como agentes coadyuvantes, ya que los radicales libres cumplen un
rol destructivo tisular durante el proceso inflamatorio.

La actividad antiinflamatoria se ensaya generalmente a

Edema por carragenina (izq)
través de la inoculación en planta de pata u oreja de
rata, de una sustancia pro-inflamatoria (carragenina,
formaldehido, caolín, dextrán, ácido acético, aceite de
crotón, pellet o granuloma de algodón, etc). Una de las
más frecuentes es la del edema plantar por carragenina.
A continuación se administra el extracto a investigar y
posteriormente se hace una medición por pletismografía
digital.

Para realizar estudios comparativos con drogas sintéticas, se emplea indometacina 10 mg/kg
vía oral (inhibidor de ciclo-oxigenasa); difenhidramina (antihistamínico) a razón de 1 mg/kg vía
i.p.; metisergida (antiserotonina) en base a 100 microgr/kg vía i.p.; o fenilbutazona a razón de
150 mg/k. Los alcaloides de la uña de gato (Uncaria tomentosa) o los iridoides de la garra del
diablo (Harpagophytum procumbens) son uno de los numerosos ejemplos de plantas con
actividad antiinflamatoria en estos modelos.

Algunos ensayos emplean ratas adrenalectomizadas a efectos de eliminar mecanismos que

involucren el eje hipófisoadrenal. Otros ensayos emplean ratones o ratas con artritis inducida
por inyección intradérmica en una pata de 0,025 ml de gérmenes muertos de Mycobacterium
tuberculosis en parafina líquida. Este tipo de ensayo (junto a la prueba del compemento)
resulta útil cuando se desean testear extractos eventualmente útiles en artritis reumatoidea.

Actividad Analgésica

Algunos de los métodos descriptos para actividad antiinflamatoria también pueden ser de
utilidad para evaluar actividad analgésica. La aspirina se sabe actúa por medio de la vía de la
ciclo-oxigenasa, pero no cuenta para evaluar una acción analgésica central que pueda
involucrar sustancias opioides.

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Recordemos que a nivel cerebral existen receptores opioides específicos: δ (delta), η (kappa) y
μ (mu) los cuales pueden ser activados por endorfinas, narcóticos o hipnosedantes.
Compuestos como el paracetamol (acetaminofen) trabajan sobre la enzima ciclo-oxigenasa
pero únicamente a nivel cerebral. La actividad analgésica evalúa la capacidad de un extracto
vegetal para evitar la transmisión del dolor al SNC, o disminuir sensaciones primarias (tacto,
vibración, etc). La sensación de dolor es difícil de medir o cuantificar debido a la subjetividad
inherente a la persona o al hecho en sí. En experiencias in vivo se utilizan algesímetros que
miden la escala de dolor del animal. Los métodos para producir dolor pueden ser térmicos,
mecánicos, químicos, eléctricos o isquémicos.

Pruebas de Contorsión: Se administra el extracto previo a una inyección intraperitoneal de 10

ml/kg de peróxido de benzoilo al 10%. Otras sustancias usadas son ácido acético (1-3%) o
benzoquinona (0,2 mg/ml) también ambos por vía i.p. A los 5 minutos del suministro de la
droga se observa por espacio de 15-20 minutos, el número de contracciones abdominales.

Prueba de Inmersión de la Cola: Se sumerge 1/3 de la cola del ratón a un medio líquido
caliente (51º). Se mide el tiempo de reacción del animal después de administrar el extracto.

Prueba del Plato (Hot Plate): Se mide el tiempo de resistencia de un ratón sobre un plato
caliente o muy frío (el animal salta, se lame, trata de escapar, etc). A continuación pueden
verse estos equipos.

Cuando se pueda sospechar de un efecto analgésico central se trabajará en el test con

naloxona, un conocido antagonista opioide, la cual se administra previamente al extracto.

Actividad Antifebril

Los test antipiréticos se llevan a cabo comprobando el efecto de un extracto sobre hipertermia
en ratas inducida por pirógenos como la inyección de levadura de cerveza. Se administra 1
ml/kg vía subcutánea. A las 10-15 hs se toma la temperatura rectal del animal. Se suele testear
la actividad antipirética versus aspirina 100 mg/kg vía i.p.

Actividad Antiasmática

Mediadores de inflamación como los leucotrienos y el PAF están relacionados con los procesos
de broncoconstricción y asma. Los agonistas beta-adrenérgicos también. Extractos que inhiban
ambos parámetros se consideran coadyuvantes de la terapia antiasmática.

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La presencia de PAF en pulmón activa la cascada del ácido araquidónico generando

tromboxanos e histamina. Entre los antagonistas del PAF tenemos: ginkgólidos del Ginkgo
biloba, lignanos (kadsurenona, nectandrinas A y B de Nectandra rigida y el burserano de
Bursera microphylla).

La inhibición de la vía de la 5-lipooxigenasa a partir del ácido araquidónico permite obtener

una reducción en la formación de leucotrienos pro-inflamatorios (LTB-4) y espasmogénicos
tanto a nivel vascular como bronquial (LTC-4, LTD-4, LTE-4). Los receptores beta-2-
adrenérgicos se concentran de preferencia en pulmón, estando involucrados en los procesos
de broncodilatación. El salbutamol es un agonista de esta vía. Se diferencian de los beta-1 cuyo
radio de acción involucra actividad simpaticomimética alrededor del corazón.

En la práctica se trabaja con músculo liso bronquial o traqueal aislado y se observa la actividad
de los extractos y sus mecanismos de acción (anticolinérgicos, antihistamínicos, beta-2-
agonistas, PAF antagonistas, etc). Por ejemplo para evaluar un agonista beta-2 se trabaja
conjuntamente con un bloqueante beta. Entre los bloqueantes beta (para beta 1 y beta 2)
tenemos el propranolol, timolol y nadolol. De ahí su contraindicación en asma.

Actividad Hipoglucemiante

Drogas hipoglucemiantes sintéticas como las sulfonilureas actúan aumentando la secreción de

insulina, en tanto las biguanidas solo actúan en presencia de insulina residual. Para comprobar
la actividad hipoglucemiante de un extracto se produce una hiperglucemia o diabetes
experimental en el animal a través de la administración de aloxano (derivado de la urea),
glucagón o estreptozotocina (nitrosoureido citotóxico obtenido por fermentación de
Streptomyces achromogenes). El alloxano (150 mg/k) se aplica al 5% en agua destilada en dosis
simple sobre vena auricular en conejos, o por vía i.p. en ratas y ratones. La estreptozotocina se
administra por vía i.p. en dosis de 150 mg/kg en ratones y 80 mg/kg en ratas. A los 4 -7 días se
desarrolla la diabetes en el animal. Suele causar una necrosis selectiva de las células beta en
islotes pancreáticos. Se ensaya en ratas, conejos, ratones y perros.

estreptozotocina aloxano Suministro de aloxano

Inyección de aloxano en
rata
El índice diabetógeno (glucemia en ayunas) por aloxano puede ser moderado (180-250 mg/ml)
o severo (> 250 mg/ml). A continuación se administra el extracto vegetal a explorar. En los
casos severos, el resultado de la diabetes experimental por aloxano es equiparable a una
pancreatectomía, donde tanto las sulfonilureas como la tolbutamida presentan muy poca
actividad hipoglucemiante. Recordar que la prueba puede modificarse en presencia de
diuréticos.

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Se emplea como control generalmente tolbutamida y en otras ocasiones la clorpropamida.

Muchos ensayos conviene iniciarlos en animales normoglucémicos para en una segunda etapa
pasar al modelo hiperglucémico. Entre las plantas que demostraron actividad hipoglcemiante
por estos métodos figuran: fenogreco (Trigonella foenum-graecum), sarandí (Phyllanthus
sellowianus), pezuña de vaca (Bauhinia sp), cebolla (Allium cepa), momórdica (Momordica
charantia), etc.

Actividad Sedante

Existen muchas plantas que demostraron actuar de manera similar a las benzodiacepinas
sintéticas, interactuando en la mayoría de los casos sobre receptores GABA-A. Entre ellas
tenemos la manzanilla, la pasionaria, la valeriana, la melisa, etc. La actividad sedante de un
extracto vegetal se basa en algunas sencillas pruebas.

Prueba de la placa agujereada: Se coloca en la jaula una tabla con 16 agujeros. Se mide el
carácter de curiosidad del animal en la medida que introduzca su cabeza en cada agujero. Se
mide el número de agujeros explorados por minuto durante 5 minutos y se compara con otros
sedantes (benzodiacepinas). El sedante (vegetal o sintético) producirá una disminución en la
curiosidad del animal.
Test Rota Rod
Prueba de Rota-Rod: Evalúa los reflejos del animal haciendo
equilibrio sobre un eje giratorio (10 rpm) durante 3 minutos. Si se
administra un sedante, la caída y pérdida del equilibrio será
rápida.

Prueba de la chimenea: Se coloca el ratón en un tubo cilíndrico

de 30 cm de profundidad. Se lo empuja hasta el final. Se coloca de
pie el cilindro y se mide el tiempo que tarda el ratón en escapar Test del laberinto
del fondo del tubo.

Prueba del laberinto: Consiste en tomar el tiempo que tarda un

ratón en hallar la salida, dentro de una caja tabicada. El animal
sometido al extracto que causa sedación, tardará más tiempo en
hallar la salid.

Otras Actividades en S.N.C.

Actividad anticonvulsivante: Se logra mediante la administración i.p. de pentetrazole (80-120

mg/kg) en ratones, lo cual provoca convulsiones clónicas. Cuando se ensaya el extracto vegetal
se medirá (versus control con anticonvulsivantes sintéticos): tiempo de inicio de la convulsión,
número de animales convulsionando, episodios de convulsiones (número) acaecidos en 10
minutos, número de animales agonizantes en el lote tratado. Por ejemplo los extractos de
valeriana resultaron en estos test como excelentes anticonvulsivantes.

Inducción del sueño: Muy ligada a la actividad sedante. En este caso se induce el sueño
mediante administración de barbitúricos (pentobarbital = 55 mg/kg, hexobarbital = 35 mg/kg).

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Los extractos testeados medirán el tiempo que tarda el animal en comenzar a dormir y si el
tiempo total de sueño se prolonga con el agregado del extracto. Aquí también la valeriana ha
demostrado muy buenas cualidades.

Actividades en la Esfera Sexual

Test de actividad antifertilidad: Se utilizan ratas femeninas vírgenes a las cuales se les
administra el extracto vegetal durante varios días. Indicadores de estrogenicidad pueden ser
medidos por la observación de cornificación vaginal o por el incremento del peso del útero. La
medición de anti-estrogenicidad puede ser evaluada a través del bloqueo que induzca el
extracto vegetal sobre una inyección de estrógenos sintéticos. Actividad antigonadotrófica es
mesurable a través del nivel de hormonas en sangre y a nivel pituitario. En casos de actividad
antiimplante se administra el extracto vegetal por vía oral durante 1-5 días de haber sido
inseminados. Se hace laparotomía al 10º día bajo anestesia, y se observa el número de
implantes (si llegaron a implantarse correctamente, si presentan deformidades, etc).

Actividad Afrodisíaca: Se mide en ratas macho a través de la medición del número de cópulas
del animal luego de suministrado el extracto versus un lote de animales normales (no
recibieron ningún producto). En estos casos es muy importante establecer la edad de los
animales a ser tratados. Se coloca al ratón macho en una jaula durante un par de horas. Luego,
se introducen en la jaula cinco ratones hembra previamente tratadas con benzoato de
estradiol y progesterona, a efectos de producirles el estro.

A la mañana siguiente se examina una muestra vaginal para ver presencia de esperma en cada
rata. Por ejemplo la maca (Lepidium meyenii) demostró mejorar la actividad sexual en ratones.
En forma paralela se medirán parámetros sanguíneos a efectos de constatar modificaciones en
parámetros sanguíneos de testosterona, hormona luteinizante, folículo-estimulante,
prolactina, estrógenos y progesterona. De este modo se podrá inferir el mecanismo de acción
del extracto vegetal.

Índice de fecundidad: Se puede medir a través del aumento de la espermatogénesis. Una

planta que ha mejorado este índice es el jengibre. Finalmente, la actividad liberadora de óxido
nítrico en cuerpos cavernosos de ratas macho, suele ser otro indicador indirecto de generación
de erecciones tal como lo ha demostrado el Sildenafil. Plantas que demostraron esta actividad
son el abrojo (Tribulus terrestris), marcela (Achyrocline satureoides), sandía (Citrullus lanatus).

Actividad Antiinflamatoria en Colon

Los modelos de inflamación intestinal crónica permiten evaluar drogas que puedan tener
actividades benéficas en casos de colitis ulcerosa, enfermedad de Crohn y colon irritable. A las
ratas se les suministra indometacina subcutánea en base a 7,5 mg/kg cada 24 hs durante dos
días. Este tiempo es suficiente para generar lesión intestinal. A continuación, y durante 6 días,
se da el extracto vegetal. Al día siguiente de la última toma se sacrifica el animal y se le extrae
el yeyuno y se mira al micoscopio para su estudio histopatológica. Una especie que ha dado
buenos resultados en este modelo es el incienso (Boswellia serrata).

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ESTUDIOS DE TOXICIDAD

Los estudios de toxicidad de extractos vegetales se han hecho imprescindibles a la hora de

registrar un fitomedicamento. Si bien las normativas para un medicamento herbario de uso
tradicional no requieren de la exigencia de un ensayo clínico, eso no quita que deban hacerse
los estudios de toxicidad para el tipo de extracto y forma galénica a presentar. Ciertas
corrientes regulatorias medioambientales para estudios de estimación de riesgo, han
considerado por razones éticas y económicas el uso racional de los animales de
experimentación, contribuyendo a la acelerada adopción internacional de criterios regulatorios
en la validación y análisis de métodos alternativos científicamente seguros, menos costosos,
rápidos y extrapolables que favorezcan la implantación de las 3 R propuestas por Rusell y
Burch en 1959, referidas a Reducir (disminución), Refinar (perfeccionamiento) y Reemplazar
(sustitución) el uso animal, unido a una cuarta R de Responsabilidad por parte de los
investigadores.

Para medir la toxicidad de una planta o extracto se recurre con frecuencia a la prueba de
Artemia salina. Se trata de un pequeño camarón de mar (crustáceo que habita la bahía de San
Francisco) cuyas larvas (nauplios) son sensibles a gran variedad de sustancias. Los huevos de la
Artemia salina se venden como alimento de peces. Es un organismo completo en cuanto a
sistemas enzimáticos se refiere.

Se emplea no solo para evaluar la toxicidad de un vegetal, sino

también como método de comprobación de actividad para algunos
pesticidas, anestésicos, micotoxinas y toxinas de dinoflagelados. La
actividad observada en el test de Artemia salina se expresa como
toxicidad a los camarones (LC50), es decir la dosis que mata al 50% de
los camarones. No es un ensayo específico sino de toxicidad general,
aunque sirve también para el análisis de actividad de muchos
pesticidas. Se considera como citotóxico cuando la LC50 = 1000-2000
Artemia salina ppm (para extractos crudos) y < 200 ppm (para compuestos o
sustancias puras).

Toxicidad Aguda: Se realiza para determinar el potencial tóxico de una sustancia tras una dosis
única. Se administra por sonda orogástrica el extracto al ratón (previo pesado en balanza del
animal) durante 7 días. Se observa erizamiento de pelos, exoftalmia, estado depresivo,
disminución de peso, cambios en la posición de la oreja y cola y por último muerte si la
hubiere. El método sirve para determinar la Dosis Letal 50 de una administración única (dosis
necesaria para matar al 50% del lote de animales ensayados).

El grado de toxicidad por vía oral es el siguiente:

 Muy tóxica cuando la DL50 es = o < 25 mg/kg.

 Tóxica cuando la DL50 es = o < a 250 mg/kg.
 Nociva: Cuando la DL50 es = o < a 2.000 mg/kg.
 Inocua: Cuando al DL50 es = o > a 5.000 mg/kg.

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En general el test se realiza con 5 grupos de 10 animales de cada sexo, aunque existen hoy día
(por recomendación de organismos internacionales) métodos abreviados que intentan reducir
el número de animales a sacrificar.

Toxicidad Subaguda: Se evalúa a través de la administración del extracto (de manera diaria)
por espacio de 30 días consecutivos. Se solicita en estos casos, que las especies a testear sean
una roedora y otra no roedora. Para ambas especies se suelen utilizar entre 4 y 5 dosis
diferentes de la sustancia (baja, media baja, media, media alta y alta). Se emplea dosis orales
(300-600 mg/kg) e intraperitoneales (100-250 mg/kg). En ratas se requieren al menos 10
animales de cada sexo para cada dosis. Después del mes se sacrifican los animales y se
observan los órganos a efectos de verificar cambios histológicos debido a eventual toxicidad.

Toxicidad Subcrónica y Crónica: Estos estudios son similares a los anteriores en cuanto al
número de animales, número de dosis, observaciones, etc. Lo que va a diferir es el tiempo de
exposición de los animales al extracto. Un estudio de toxicidad subcrónica demanda unos 3
meses, mientras que la toxicidad crónica alcanza 6 meses. La forma de administrar el extracto
durante periodos prolongados es un tema a considerar, ya que si se atiene a alimentar con
sonda orogástrica, eso genera estrés en el animal, y puede modificar los resultados. De ahí que
muchas veces se opte por dar el extracto mezclado con los alimentos.

Si bien los resultados finales se verificarán por autopsia (cambios en los tejidos luego de ese
lapso de toma), no obstante, se irán observando durante el correr de los días cambios en la
actitud del animal, peso, control de sangre, etc. Para esta prueba se aconseja trabajar con dos
tipos de animales, en tres niveles de dosis.

Mutagenicidad: Son varios los test a emplear en estos casos. Lo que se recomienda es hacer
tres ensayos in vitro y un ensayo in vivo. Para el ensayo in vitro se suele recurrir al test de
Ames, el cual se realiza sobre la sensibilidad a sufrir cambios en la progenie en gérmenes como
Escherichia coli, Bacillus subtilis o Salmonella typhimurium. El Test de Ames fue desarrollado y
publicado en 1971 por Bruce N. Ames. Al poco tiempo se descubrió una alta correlación entre
cáncer y los resultados positivos de este test; lo cual derivó en un explosivo desarrollo de la
industria para esta prueba, constituyéndose en el test más importante para la detección de
riesgos de mutagénesis/cáncer inducido por compuestos químicos.

El estudio in vivo se trabaja sobre células de mamíferos o linfocitos humanos, sometidos a

incubación con el extracto (en concentraciones crecientes). Esto se realiza en presencia o
ausencia de la llamada fracción “S-9”, la cual consiste en una suspensión de microsomas
hepáticos de rata. Esta fracción se añade para favorecer la posibilidad que una sustancia (en
principio no mutagénica) experimente una metabolización hacia una sustancia que sí lo sea.
Por ejemplo, sirve para observar posibles defectos durante la hematopoyesis en el ratón (tst
del micronúcleo).

Teratogenicidad: Se trata de testear una sustancia en animales hembras preñadas para ver si
ocurren defectos de nacimiento (del griego teratos = deformidad). El ensayo de la evaluación
de la reproducción está formado por tres segmentos, siendo el ensayo de teratogénesis el
segmento II. Es una batería de pruebas que se hace en al menos dos especies de mamífero y
una no roedora, generalmente rata y conejo, para determinar el potencial inductor de
malformaciones de un fármaco. La sustancia se da en el periodo de embriogénesis.

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