Introducción

La fosforilación oxidativa es el proceso por el que se forma ATP como resultado de la

transferencia de electrones desde el NADH o del FADH 2 al O2 a través de una serie de
transportadores de electrones. En los organismos aeróbicos, esta es la principal fuente de
ATP. La fosforilación oxidativa genera 26 de las 30 moléculas de ATP que se forman
cuando la glucosa se oxida completamente a CO 2 y H2O. En libros de otros autores pueden
aparecer cifras distintas respecto a la cantidad de ATP generado ya que la reacción no
corresponde a una estequiometria exacta como se podía ver en las vías o ciclos estudiados
anteriormente, pero en todos los casos hay coincidencia respecto a las proporciones de ATP
generado entre la vía glicolítica y la fosforilación oxidativa. El flujo de electrones desde el
NADH o el FADH2 al O2 a través de complejos proteicos localizados en la membrana
interna mitocondrial, provoca el bombeo de protones hacia el exterior de la matriz
mitocondrial. Se genera una fuerza protomotriz que está formada por un gradiente de pH y
por un potencial eléctrico transmembranal. Cuando los protones regresan a la matriz
mitocondrial a través de un complejo enzimático, se sintetiza ATP. De esta forma, la
oxidación y la fosforilación están acopladas por un gradiente de protones a través de la
membrana interna mitocondrial. El primer paso de la fosforilación oxidativa es ionizar los
átomos de hidrógeno extraídos hasta ese momento de los sustratos alimentarios. Se libera el
otro átomo de H unido al NAD y éste último se reutiliza una y otra vez para captar H. Los
electrones extraídos de los átomos de H para su ionización entran inmediatamente en la
CTE. La CTE está formada por 4 complejos proteicos con moléculas transportadoras y sus
enzimas correspondientes (Complejo I, NADH deshidrogenasa; Complejo II, Succinato-
CoQ reductasa; Complejo III, citocromo C reductasa; Complejo IV, citocromo oxidasa), 1
componente no proteico (ubiquinona –Q-) que está embebido en la membrana, y una
pequeña proteína llamada citocromo C, en el espacio intermembrana, pero adosada a la
membrana interna.
Diagrama

Medir la respiración Determinar la relación P/O (la

mitocondrial con cantidad de ATP sintetizado por cada
succinato, D-lactato, L- átomo de oxígeno consumido)
lactato y NADH. obtenida con cada uno de ellos.

Se registran los Se analiza el efecto de diferentes

inhibidores respiratorios sobre la L-
resultados obtenidos en
lactato con inhibidores como cianuro
la tabla 1.
(CN-), antimicina y mixotiazol,
oligomicina, oxalato, n-propil galato y
oxido 2-n-heptil-4-hidroquinona
(HQNO).

Se registran los Se muestra la velocidad de

resultados obtenidos al
medir la velocidad de
síntesis de ATP.
reducción de citocromo c,
medido con el citocromo c
reductasa utilizando como
sustrato, el decilbenzoquinol
(DBH) 60 µM.

Para el estudio se
utilizan inhibidores Para evaluar la participación de la rodoquinona
respiratorios del (RQ) en la cadena respiratoria de Euglena, se
complejo III. analizó la reducción de este compuesto y de la
ubiquinona dependiente de la oxidación de
varios sustratos, a diferentes concentraciones de
oxalato y malonato.

1. ¿Qué es la fosforilación oxidativa?

La fosforilación oxidativa es un proceso metabólico que utiliza energía liberada por
la oxidación de nutrientes para producir adenosina trifosfato (ATP). Se le llama así para
distinguirla de otras rutas que producen ATP con menor rendimiento, llamadas "a nivel de
sustrato". Se calcula que hasta el 90 % de la energía celular en forma de ATP es producida
de esta forma
2. Determinar el orden de transferencia de electrones.
Cuando se oxida NADH, existe una traslocación de protones en los tres sitios esperados
(complejos I, III y IV) obteniéndose un valor de 2.5. Sin embargo, para succinato y los dos
isómeros de lactato este valor es menor (1.3 y 1.2). Estos valores sugieren que al oxidar
sustratos diferentes al NADH (D-, L-lactato, succinato), dos de los sitios de la cadena
respiratoria que conservan la energía (complejo III y IV) continúan funcionando, mientras
que la SDH, la L-lactato deshidrogenasa independiente de piridin nucleótido (L-iLDH) y al
D-iLDH no translocan protones
3. Determinar la participación de los componentes en la fosforilación oxidativa.
La oxidación de L-lactato se inhibió parcialmente por cianuro (CN-) en un 70%, y la
respiración remanente fue sensible a n-PG y no a HQNO. Estos resultados sugieren la
presencia de una oxidasa terminal alterna semejante a la presente en plantas y no a la de
bacterias. Los valores obtenidos cuando se midió la síntesis de ATP muestran claramente
que esta oxidasa alterna no participa tampoco en la fosforilación oxidativa, debido a que
solo la adición de cianuro abate el potencial de membrana y la síntesis de ATP, mientras
que, la adición de n-PG no altera los valores de síntesis de ATP ni afecta el potencial de
membrana. Al ser alimentada con L-lactato, el sitio de ramificación debe encontrarse
entonces antes del complejo III. Resulta notoria la inhibición parcial de la respiración, de la
síntesis de ATP y del potencial de membrana cuando se inhibe el complejo III con
antimicina. La actividad remanente es sensible a mixotiazol, el otro inhibidor del complejo
III en mamíferos. Los mismos resultados se observaron al analizar la reducción del
citocromo c cuando se alimenta la reacción directamente con DBH, un análogo de
ubiquinol.
4. En qué proceso metabólico se produce lactato
El ciclo de Cori es el ciclo de reacciones metabólicas que envuelve dos rutas de transporte
de productos entre los músculos y el hígado. A lo largo del ciclo, el glucógeno muscular es
desglosado en glucosa y ésta es transformada a piruvato mediante la glucólisis. Este
piruvato se transformará en lactato (o ácido láctico) por la vía del metabolismo anaeróbico
(por falta de oxígeno en la célula) gracias a la enzima lactato deshidrogenasa. El ácido
láctico es transportado hasta el hígado por vía sanguínea y allí es reconvertido a piruvato, y,
después, a glucosa a través de la vía anaplerótica.
5. ¿Cuál es el producto de la oxidación del lactato?
Loa productos de la oxidación del lactato son: CO2, acetil coA y piruvato.
6. ¿En qué etapa del trasporte electrónico se acopla el L-lactato y D-lactato?