Nombre: Jessica Paola Pinzón Robles

Fecha: 05/09/2023
CAPACIDAD ANTIOXIDANTE. MÉTODO ESPECTROMÉTRICO 2,2-DIFENIL-1
PICRILHIDRAZILO: (DPPH)
Facultad de Ciencias Exactas y Naturales/Universidad de Antioquia, Medellín, Colombia

1. INTRODUCCIÓN
La capacidad antioxidante proveniente de extractos plantas y frutos es hoy en dia muy
estudiada pues se usa para el mejoramiento de las propiedades de muchos alimentos, sin
embargo, existen problemáticas en la expresión de dichos resultados, pues hay una gran
variabilidad en la presentación de estos, como variaciones en las condiciones y reactivos.
Este trabajo tomó el método más usado para la determinación de la capacidad antioxidante,el
método de DPPH para analizar la capacidad inhibitoria de radicales del extracto de la
hierbabuena.

2. METODOLOGÍA Se encendió el espectrofotómetro UV-VIS

1.1 Preparación de la solución de DPPH
(0,1µM)
Se pesaron 0,7886 mg de DPPH los cuales
posteriormente se disolvieron con agua
desionizada en un balón de 100mL.
1.2 Preparación del la muestra de DPPH
y del patrón de Ácido ascórbico
Para la preparación de la muestra (sin
reaccionar) se mezclaron 1mL de la
solución al (0,1 µM) de DPPH y 1mL de
agua desionizada en la celda para el
espectrofotómetro que se utilizó. Y para el
patrón de Ácido ascórbico se preparó
inicialmente una solución (10µM)
,posteriormente se diluyó 1 mL de esta con
agua desionizada en un balón de 100mL.
1.3 Obtención del extracto
Se hizo una infusión de la respectiva
aromática (0,9 g) en agua corriente a una
temperatura de 78°C, posteriormente se
realizó una dilución de 50µL de la infusión
en 950 µL de agua (la misma agua
corriente). Y finalmente se agregaron 1000
µL de la solución 0,1 µM de DPPH.
1.4 Determinación de la capacidad
antioxidante mediante el método
espectrofotométrico
durante alrededor de 40 min, luego se
procedió a ajustar la λ=517 nm,
posteriormente se introdujo la celda que
contenía el blanco para así ajustar la
absorbancia en cero, luego se introdujo la
celda con la muestra de DPPH midiendo
su absorbancia y después la celda con el
patrón de Ácido ascórbico. Finalmente se
analizó la celda con que contenía el
producto de reacción entre el extracto y el
DPPH. Las celdas tenían una longitud de
paso de luz de 1cm.
1.5 Normalización de las absorbancias
encontradas en diferentes infusiones.
A manera de comparación se tomaron los
resultados experimentales de cada
estudiante en el laboratorio y se
sometieron a una normalización mediante
la ecuación:
𝑁 = 𝐷 · (𝐴𝑖 − 𝐴𝑓)
Donde, D es el factor de dilución, Ai y Af
las absorbancias iniciales y finales
respectivamente.
 3. RESULTADOS
3.1 Valores absorbancia de las soluciones
Solución Absorbancia (λ=517)

DPPH + blanco 0,844

Ácido ascórbico 0,868

0,157 (Ai)*
DPPH + Infusión
0,166 (Af)*
* (Ai, Af): Absorbancia inicial y final

3.2 Capacidad antioxidante de la aromática de hierbabuena

Gráfica 1. Absorbancia de una solución de DPPH (λ=517 nm) vs tiempo bajo el efecto
antioxidante de la aromática de hierbabuena.

Tabla 2: Porcentaje de inhibición del radical libre (DPPH)

Muestras Porcentaje de inhibición del radical

DPPH + hierbabuena 1* 81,40%

DPPH + hierbabuena 2* 80,33%

● (1,2): Absorbancia medida a los 0 y 30 min respectivamente.

3.3 Normalización de absorbancia obtenidas en diferentes infusiones

Tabla 3: Normalización de las absorbancias obtenidas con diferentes sustancias

Aromática analizada Normalización

Eucalipto y miel (con vitamina C) 27,00

 Frutos tropicales (Mango, piña, maracuya) 14,40

Para la noche (Manzanilla, cidrón, menta) 13,68

Hierbabuena 27,12

Toronjil 26,04

Cidrón 13,60

Chai Tea (contiene te negro) 11,58

Mujer (Flor de jamaica, canela, anis, menta,

manzanilla y stevia) 14,46

Té verde (Flor de jamaica) 90,40

Calma y equilibrio 12,54

Gengibre, naranja y curcuma 4,68

Frutos del bosque (uva, fresa, flor de jamaica y

arándanos) 13,66

4. DISCUSIÓN
En la tabla 1 se puede observar que efectivamente se produjo la reacción que inhibición de
los radicales del DPPH, esto se refleja en la disminución de la absorbancia de la solución que
pasa de 0,844 a 0,157 , en un principio la solución fue de color violeta y gracias a la acción
antioxidante de la infusión de hierbabuena perdió absorbancia, por ende color. Esta reacción
radicalaria se midió en dos tiempos diferentes, y se obtuvieron los resultados de la gráfica 1
donde se establece un orden ascendente de la absorbancia en el tiempo, este resultado no
concuerda con lo esperado teóricamente, pues lo que se buscaba era llegar a un punto donde
la infusión actuará sobre los radicales antes de llegar al 100% de la reacción, ya que se
deseaba determinar este poder antioxidante medio, estos resultados reflejan que se usó una
solución de hierbabuena muy concentrada lo que provocó que se llevara a cabo la reacción
completamente, la absorbancia luego de esto aumentó ligeramente por la presencia de otras
reacciones radicalarias en la solución, sin embargo, ya no había DPPH en el sistema. Algo de
importancia para mencionar es que la absorbancia del patrón se salió del rango de
absorbancia de la sustancia analizada, esto imposibilita el usar esta solución como patrón, lo
que debió hacerse fue diluir un poco más la solución de ácido ascórbico para poder comparar
con los resultados obtenidos a partir de la muestra problema. En la tabla 2 se vuelve a resaltar
la errónea dilución de la infusión de hierbabuena pues el % de inhibición disminuye, es decir,
había más presencia de radicales al final que al comienzo de la medición, sin embargo los
valores de la capacidad antioxidante de la hierbabuena fueron bastante altos en comparación
con otras sustancias, esto fue debido a la gran cantidad de monoterpenos (carvona y
limoneno) [1] que la componen alrededor del 80% [2], estas sustancias son capaces de
capturar radicales libres dañinos y estabilizarlos, gracias al sistema con posibilidad de
deslocalización de su estructura (ver figura 1).
 Figura 1. Estructura de la Carvona. Monoterpeno se presenta en la hierbabuena.

Finalmente en la tabla 3 se puede observar que las aromáticas estudiadas tienen un

comportamiento antioxidante alrededor del mismo rango, con excepción del té verde con flor
de jamaica, en este caso pudo deberse a un error de normalización (porque es poco probable
que esta sustancia desvarié tanto de los resultados). Sin embargo, confiando en estos
resultados se podría afirmar que el té verde obtuvo el mejor resultado de inhibición de
radicales libres.
Se puede observar que las infusiones de Eucalipto y miel, hierbabuena, toronjil destacan por
sus altos valores en la fuerza antioxidante, lo cual concuerda con su composición,
mayoritariamente terpenos. En el caso del eucalipto posee una gran ventaja con respecto a los
demás pues poseía adicionalmente vitamina C en la composición, un fuerte antioxidante.

5. CONCLUSIONES
Las hierbas aromáticas poseen importantes propiedades antioxidantes que dependen de la
estructura de las moléculas que las componen, esta capacidad se ve beneficiada por la
presencia de sistemas conjugados, estructuras que posibilitan la resonancia o insaturaciones
pues permiten estabilizar radicales libres. La aromática de hierbabuena tiene la capacidad de
inhibir radicales libres en medio acuoso.

6. BIBLIOGRAFÍA

[1] Vilanova, M., Santalla, M. and De Ron A, M. (2012) ‘LOS COMPUESTOS VOLÁTILES
BIOACTIVOS EN Phaseolus vulgaris ’, Misión Biológica Galicia. Consejo superior de
investigaciones científicas [Preprint]. Disponible en: https://core.ac.uk/download/pdf/145228756.pdf

[2] Beigi, M., Torki-Harchegani, M., & Ghasemi Pirbalouti, A. (2018). Quantity and chemical
composition of essential oil of peppermint (mentha × piperita L.) leaves under different drying
methods. International Journal of Food Properties, 21(1), 267–276.
doi:10.1080/10942912.2018.1453839

[3] Guzmán, H., Díaz, R., & González, M. (2017). PLANTAS MEDICINALES. Realidad de una
tradición ancestral. Mexico. Disponible en:
https://vun.inifap.gob.mx/VUN_MEDIA/BibliotecaWeb/_media/_folletoinformativo/1044_4729_Plan
tas_medicinales_la_realidad_de_una_tradici%C3%B3n_ancestral.pdf